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1、书山有路勤为径，学海无涯苦作舟。植物组织中淀粉含量的测定 植物组织游离脯氨酸含量的测定 原理 植物在逆境条件下，游离脯氨酸便会大量积累，且积累指数与植物的抗逆性有关。因此，脯氨酸可作为植物抗逆性的一项生化指标。 采用磺基水杨酸提取植物体内的游离脯氨酸，不仅大大减少了其他氨基酸的干扰，快速简便，而且不受样品状态（干或鲜样）限制。在酸性条件下，脯氨酸与茚三酮反应生成稳定的红色缩合物，用甲苯萃取后，此缩合物在波长520nm处有一最大吸收峰。脯氨酸浓度的高低在一定范围内与其消光度成正比。材料、仪器设备及试剂1.材料 植物叶片 2.仪器设备 分光光度计；水浴锅：漏斗：大试管（20m1）；具塞刻度试管（2
2、0m1）注射器或滴管（5loml）。 3.试剂 （1）3磺基水杨酸溶液 （2）甲苯； （3）2.5酸性茚三酮显色液：冰乙酸和6mo1.l-l磷酸以3：2混合，作为溶剂进行配制，此液在4下23天有效； （4）脯氨酸标准溶液。准确称取25mg脯氨酸，用蒸馏水溶解后定容至250ml，其浓度为100ug.ml-l。再取此液10ml，用蒸馏水稀释至looml，即成10g.ml-1的脯氨酸标准液。 1.标准曲线制作 （1）取7支具塞刻度试管按表9.2-1加入各试剂。混匀后加玻璃球塞，在沸水中加热40min。 （2）取出冷却后向各管加入5ml甲苯充分振荡，以萃取红色物质。静置待分层后吸取甲苯层以0号管匀对照
3、在波长520nm下比色。 （3）以消光值为纵坐标，脯氨酸含量为横坐标，绘制标准曲线，求线性回归方程 表9.2.1各试管中试剂加入量试管 0 6脯氨酸标准溶液（m1） 0 0.2 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0 水（m1） 1.8 1.6 1.2 0.8 0.4 0 冰乙酸（m1） 2茚三酮显色液（m1） 3样品测定 （1）脯氨酸提取。取不同处理的剪碎混匀植物叶片0.20.5g（干样根据水分含量酌减），分别置于大试管中，加入5m13磺基水杨酸溶液，管口加盖玻璃球，于沸水浴中浸提10min。 （2）取出试管，待冷却至室温后，吸取上清液2m1，加2m1冰乙酸和3m1显色液，于沸水浴中加热40min，下步操作按标准曲线制做方法进行甲苯萃取和比色（向各管加入5ml甲苯充分振荡，以萃取红色物质。静置待分层后吸取甲苯层以0号管匀对照在波长520nm下比色）。 （3）结果计算。从标准曲线中查出测定液中脯氨酸浓度脯氨酸含量的百分数。 脯氨酸g.g-1（干或鲜重）（c.v）（aw）1 式中：c一提取液中脯氨酸浓度（ps），由标准曲线求得： v提取液总体积（ml） a-测定时所吸取得体积（ml） w-样品重（g） 第 4 页 共 4 页