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1、杀菌剂的毒力测定和第1页，共16页，编辑于2022年，星期六一、毒力测定一、毒力测定 杀杀菌菌剂剂对对病病菌菌的的毒毒力力是是指指药药剂剂本本身身对对病病原原菌菌直直接接作作用用的的性性质质和和程程度度，它它是是在在严严格格控控制制条条件件下下测测定定的的，常常用用有有效效中中量量（EDED5050）表表示示，是是指指抑抑制制50%50%病病菌菌孢孢子子萌萌发发所所需需的的剂剂量量或有效中浓度（或有效中浓度（ECEC5050）。）。杀杀菌菌剂剂的的毒毒力力测测定定方方法法很很多多，长长期期采采用用经经典典的的离离体体平平板板法法，即即以以孢孢子子萌萌发发，抑抑制制孢孢子子发发芽芽率率或或菌菌丝
2、丝生生长长、变色、变形等指标作为毒力衡量的标准。变色、变形等指标作为毒力衡量的标准。第2页，共16页，编辑于2022年，星期六 但但近近代代随随着着新新型型内内吸吸杀杀菌菌剂剂的的发发展展，对对杀杀菌菌剂剂的的生生物物筛筛选选逐逐渐由经典的离体筛选趋向活体筛选。渐由经典的离体筛选趋向活体筛选。因因为为它它不不仅仅模模拟拟田田间间实实际际，同同时时可可以以防防止止那那些些在在离离体体平平板板上上无效，而必须在植物活体上方显示活性的化合物漏筛。无效，而必须在植物活体上方显示活性的化合物漏筛。但但活活体体筛筛选选涉涉及及的的因因素素较较多多，对对寄寄主主植植物物、试试验验条条件件要要求求较较高高，如
3、如光光照照、湿湿度度、温温度度，为为控控制制病病原原菌菌与与寄寄主主相相互互作作用用的的条条件件，必必须须有有适适合合的的温温室，费工耗资都较大。室，费工耗资都较大。离离体体测测定定能能反反映映化化合合物物毒毒力力的的本本质质和和程程度度，方方法法简简便便，为为研研制制新新农农药药不不可可缺缺少少，但但它它存存在在有有一一点点缺缺点点，应应该该和和温温室室活活体体的的盆盆栽栽试试验验结结合合起起来。来。第3页，共16页，编辑于2022年，星期六1.1.毒力测定的方法毒力测定的方法 室内离体平板法：室内离体平板法：（1 1）孢子萌发测定法）孢子萌发测定法 （2 2）抑菌圈法）抑菌圈法 （3 3）
4、生长速率测定法）生长速率测定法第4页，共16页，编辑于2022年，星期六（1 1）孢子萌发测定法）孢子萌发测定法 有载玻片萌发法及平板培养基培养法。有载玻片萌发法及平板培养基培养法。即将不同的药液喷布于玻片表面或平板上，定量即将不同的药液喷布于玻片表面或平板上，定量 滴加孢子悬浮液，药液与悬浮液接触后，经一定培育滴加孢子悬浮液，药液与悬浮液接触后，经一定培育时间，镜检孢子萌发的百分率，载玻片法适合于水溶时间，镜检孢子萌发的百分率，载玻片法适合于水溶性较好的保护剂，能计算单位面积药液的沉积量及药性较好的保护剂，能计算单位面积药液的沉积量及药液浓度，接近实际条件，但对萌发时需氧较多的病原液浓度，接
5、近实际条件，但对萌发时需氧较多的病原菌不适用。菌不适用。平平板板萌萌发发适适用用于于不不易易分分解解的的保保护护剂剂，根根据据测测定定对对象象生生长长需需要要的的配配方方来来制制备备合合适适的的培培养养基基，由由于于孢孢子子在在培培养养基基的的表面能得到较充足的空气，萌发时不致因缺少氧而受影响。表面能得到较充足的空气，萌发时不致因缺少氧而受影响。第5页，共16页，编辑于2022年，星期六（2 2）抑菌圈法）抑菌圈法 广广泛泛地地应应用用于于真真菌菌细细菌菌的的杀杀菌菌剂剂筛筛选选，基基本本原原理理是是将将病病原原菌菌孢孢子子或或菌菌丝丝的的悬悬浮浮液液与与琼琼脂脂培培养养基基混混匀匀冷冷凝凝后
6、后，在在培培养养基基平平面面放放上上消消毒毒的的并并蘸蘸有有不不同同浓浓度度药药剂剂的的圆圆形形滤滤纸纸片片（直直径径6mm6mm）左左右右，或或放放特特制制的的直直径径8mm8mm高高10mm10mm的的不不锈锈钢钢环环，将将配配好好的的药药液液定定量量加加 在在钢钢环环内内，经经定定温温培培养养一一定定时时间间后后，由由于于药药剂剂的的扩扩 散散作作用用，使使病病菌菌生生长长受受到到抑抑制制，即即形形成成“抑抑菌菌圈圈”。测量抑菌圈的大小，以比较杀菌剂的毒力。测量抑菌圈的大小，以比较杀菌剂的毒力。第6页，共16页，编辑于2022年，星期六（3 3）生长速率测定法）生长速率测定法 即即在在琼
7、琼脂脂培培养养基基中中加加入入药药液液，冷冷凝凝后后接接菌菌的的方方法法，用用木木塞塞钻钻孔孔器器切切取取正正常常培培养养基基上上的的供供试试菌菌丝丝体体，放放在在平平板板上上（也也称称菌菌碟碟），经经一一定定时时间间后后观观察察测测量量菌菌落落生生长长速速率率，一一定定时时间间菌菌落落直直径径的的长长度度与与对对照照组组比比较较，求求出出抑抑制制百百分分率率，绘绘浓浓度度对对数数-抑抑制制百百分分率率毒毒力力曲曲线线图图，以以EDED5050来比较毒力程度。来比较毒力程度。第7页，共16页，编辑于2022年，星期六 平板测定是室内杀菌剂活性测定最常用的方平板测定是室内杀菌剂活性测定最常用的方
8、法，优点是条件比较一致，影响因子比较单一，法，优点是条件比较一致，影响因子比较单一，活性效应显现较快，缺点是有时与活体测定结果活性效应显现较快，缺点是有时与活体测定结果不一致，有时会漏筛或误筛，如用粉锈宁处理大不一致，有时会漏筛或误筛，如用粉锈宁处理大麦白粉病菌，离体测定不仅分生孢子能萌发且能麦白粉病菌，离体测定不仅分生孢子能萌发且能形成吸器，但此药在活体上却表现高效。所以初形成吸器，但此药在活体上却表现高效。所以初筛手段不采用平板法，采用盆栽法，即病原筛手段不采用平板法，采用盆栽法，即病原-寄主植物组合法。寄主植物组合法。第8页，共16页，编辑于2022年，星期六2 2盆栽方法盆栽方法 在在
9、温温室室内内进进行行的的，具具体体方方法法随随各各种种不不同同病病害害而而异异，例例：小小麦麦赤赤霉霉病病采采用用分分生生孢孢子子-幼幼苗苗组组合合法法，根根据据杀杀菌菌剂剂物物不不同同作作用用机机理理，有有测测定定以以下下作作用用的方法的方法。（1 1）保护作用；（）保护作用；（2 2）治疗作用；）治疗作用；（3 3）内吸作用。）内吸作用。第9页，共16页，编辑于2022年，星期六（1 1）保护作用：）保护作用：一一般般经经定定量量喷喷雾雾法法处处理理供供试试植植物物，喷喷药药后后间间隔隔一一定定的的时时间间再再接接种种（方方法法很很多多，如如多多针针接接种种，剪剪叶叶法法或或将将菌菌丝丝块
10、块贴贴在在叶叶片片上上等等），保保持持发发病病所所需需的的温温、湿湿度度条条件件，发发病病后后再再按按病病情情分分级级标标准准进进行行统统计计，以以病病叶叶率率，病病情情指指数数增长等指标判断药效。增长等指标判断药效。第10页，共16页，编辑于2022年，星期六（2 2）治疗作用：）治疗作用：测测定定方方法法是是先先在在植植株株上上接接菌菌，保保温温，保保湿湿一一定定时时间间，待待病病菌菌菌菌丝丝侵侵入入或或始始见见发发病病，再再进进行行喷喷药处理，其他调查统计方法同上。药处理，其他调查统计方法同上。第11页，共16页，编辑于2022年，星期六（3 3）内吸作用：）内吸作用：测测定定根根的的内
11、内吸吸输输导导试试验验，可可以以采采用用水水培培的的稻稻株株或或棉棉株株，在在营营养养液液中中加加定定量量的的药药剂剂，待待24h24h或或48h48h后后进进行行接接菌菌，发发病病后后调调查查，若若以以土土培培盆盆栽栽方法，则药液定量灌入土中，程序与上相同。方法，则药液定量灌入土中，程序与上相同。v 持效期的试验：持效期的试验：以以上上各各种种方方法法，用用先先喷喷药药后后接接菌菌或或先先接接菌菌后后喷喷药药，间间隔隔不不同同日日期期进行处理，可以测定杀菌剂残效。进行处理，可以测定杀菌剂残效。v 剪叶法分级标准：剪叶法分级标准：0 0级级（不不发发病病）；1 1级级（剩剩余余叶叶面面1/41
12、/4）；2 2级级（剩剩余余叶叶面面1/4-1/21/4-1/2）；）；3 3级（剩余叶面级（剩余叶面1/21/2）；）；4 4级（全部发病）。级（全部发病）。第12页，共16页，编辑于2022年，星期六 二、有效中量的测定二、有效中量的测定 采用一系列的药剂剂量或浓度，每一剂采用一系列的药剂剂量或浓度，每一剂量或浓度可以得出一个相应的孢子抑制百分量或浓度可以得出一个相应的孢子抑制百分率，得到两组数据，然后把各剂量换算成对率，得到两组数据，然后把各剂量换算成对数值，将抑制百分率换算成几率值，将换算数值，将抑制百分率换算成几率值，将换算后的后的 5 5 对数据建立回归方程，在直坐标系中对数据建立
13、回归方程，在直坐标系中画出回归直线，此直线称为剂量对数画出回归直线，此直线称为剂量对数-抑制抑制百分率几率值直线（百分率几率值直线（ED-P-lineED-P-line直线）。直线）。第13页，共16页，编辑于2022年，星期六 抑制百分率抑制百分率=50%=50%，机率值，机率值=5=5 将将5 5代代入入回回归归方方程程，然然后后求求其其反反对对数数，即即LD-LD-P-LineP-Line（剂量对数（剂量对数-机率值直线）。机率值直线）。EDED5050可可以以作作为为多多种种药药剂剂对对同同一一病病菌菌等等效效剂剂量量的的毒毒力力比比较较，在在一一定定的的范范围围内内可可以以用用它它来
14、来衡衡量量一一种种药药剂剂对对病病原原菌菌毒毒力力的的大大小小，但但不不能能做做为为田田间间防防治治的的实实际际指标。指标。第14页，共16页，编辑于2022年，星期六三、田间试验三、田间试验 室内筛选的药剂必须进行田间试验，通过试室内筛选的药剂必须进行田间试验，通过试验确定其药效的好坏，经济效益的高低，也就是验确定其药效的好坏，经济效益的高低，也就是说，田间试验是确定一种药剂在生产上有无实用说，田间试验是确定一种药剂在生产上有无实用价值的主要方法。价值的主要方法。田间实验的具体方法可参考田间实验的具体方法可参考农药药效试验农药药效试验的设计与分析的设计与分析一书，防治效果可用以下公式一书，防治效果可用以下公式计算。计算。第15页，共16页，编辑于2022年，星期六第16页，共16页，编辑于2022年，星期六