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1、性病实验室检查第1页，共65页，编辑于2022年，星期六一、淋球菌实验诊断淋球菌实验诊断（一）、涂片染色检查：（一）、涂片染色检查：原理原理 淋淋病病是是由由淋淋球球菌菌感感染染引引起起的的泌泌尿尿生生殖殖道道化化脓脓性性炎炎症症的的一一种种常常见见性性病病。淋淋球球菌菌为为革革兰兰氏氏染染色色阴阴性性双双球球菌菌，位位于于脓脓细细胞胞内内，呈呈肾肾形形成成双双成成对对排排列列。淋淋病病患患者者的的尿尿道道或或宫宫颈颈脓脓性性分分泌泌物物中中有有大大量量脓脓细细胞胞，可可通通过过分分泌泌物物涂涂片片革革兰兰氏氏染染色色直直接接镜镜检检查查找找到到典典型的细胞内革兰氏阴性双球菌，可作出初步诊断型
2、的细胞内革兰氏阴性双球菌，可作出初步诊断。第2页，共65页，编辑于2022年，星期六方法方法 首首先先用用无无菌菌生生理理盐盐水水拭拭子子洗洗尿尿道道口口，然然后后用用手手由由后后向向前前挤挤出出其其脓脓性性分分泌泌物物，再再用用棉棉拭拭子子插插入入尿尿道道口口取取材材，将将分分泌泌物物均均匀匀薄薄层层涂涂布布于于载载玻玻片片上上。女女性性取取宫宫颈颈或或尿尿道道分泌物涂片。凉干作革兰氏染色。分泌物涂片。凉干作革兰氏染色。(革革兰兰氏氏染染色色法法：标标本本涂涂片片，干干燥燥，火火焰焰固固定定，依依次次行行结结晶晶紫紫液液初初染染，碘碘液液媒染，酒精脱色，复红复染，水洗后凉干，油镜检查媒染，酒
3、精脱色，复红复染，水洗后凉干，油镜检查)第3页，共65页，编辑于2022年，星期六结果结果：显显微微镜镜下下革革兰兰氏氏染染色色淋淋球球菌菌和和多多形形核核白白细细胞胞均均染染为为红红色色，但但淋淋球球菌菌色色较较浓浓。急急性性男男性性患患者者尿尿道道分分泌泌物物中中见见大大量量白白细细胞胞及及细细胞胞内内双双球球菌，即镜检阳性。菌，即镜检阳性。第4页，共65页，编辑于2022年，星期六意义意义1.直接涂片染色检查简便、快速、低廉、且具有一定的敏感性和特异性。对急性男性尿道炎患者敏感性可 90；镜检阳性可诊断淋球菌感染，但阴性不能除外诊断，需作培养检查。2.对于女性病人宫颈分泌物中杂菌较多，不
4、易分辨，易造成假阳性，不推荐用镜检而用培养法作为女性淋病的诊断依据。3.慢性病人或用药后的病人因症状不典型，不易查到细胞及G双球菌，故以培养法进行诊断；4.其它部位标本如咽部、眼结膜、直肠肛门等部位标本一般不采用直接镜检而采用培养法确诊。第5页，共65页，编辑于2022年，星期六（二）、培养检查（二）、培养检查o原理原理o如果标本中有淋球菌，则细菌在适当的培养基（血琼脂培养基及巧克力琼脂培养基）上和适宜的培养条件下能生长繁殖，根据其菌落形态、大小、边缘、颜色及生化反应可以作出细菌的鉴定。第6页，共65页，编辑于2022年，星期六方法方法1、标本采集标本采集：淋球菌非常娇嫩，对环境抵抗力低，值淋
5、球菌非常娇嫩，对环境抵抗力低，值 温度、营养物质等均可影响淋球菌的检查结果，如采集不温度、营养物质等均可影响淋球菌的检查结果，如采集不 当，就会出现阴性结果当，就会出现阴性结果。（1 1）.尿道标本尿道标本：急性尿道炎有脓性分泌物，可用棉拭急性尿道炎有脓性分泌物，可用棉拭 子伸入尿道子伸入尿道2 24 4cmcm，停留数秒钟取分泌物进行检查。无尿道，停留数秒钟取分泌物进行检查。无尿道 分泌物或分泌物少时，取前列腺液检查。分泌物或分泌物少时，取前列腺液检查。第7页，共65页，编辑于2022年，星期六（2 2）.宫颈标本：宫颈标本：取宫颈分泌物培养时不能消毒，先用无菌棉取宫颈分泌物培养时不能消毒，
6、先用无菌棉 拭子擦去宫颈表面分泌物，再用另一根棉试子插入宫颈口拭子擦去宫颈表面分泌物，再用另一根棉试子插入宫颈口1 12 2 ，轻轻转动，停留，轻轻转动，停留20203030秒钟，让拭子充分沾取较多的分秒钟，让拭子充分沾取较多的分 泌物泌物（3 3）.肛门直肠标本：肛门直肠标本：将棉拭子插入肛门将棉拭子插入肛门1 12 2，轻轻，轻轻 转动，停留转动，停留2020钞钟取出。如果棉拭子碰到粪便应换一根拭子重钞钟取出。如果棉拭子碰到粪便应换一根拭子重 取。必要时可用直肠镜取材。取。必要时可用直肠镜取材。（4 4）.其它部位标本其它部位标本：眼结膜炎者取结膜分泌物，淋菌性咽眼结膜炎者取结膜分泌物，淋
7、菌性咽 炎用无菌棉拭子取喉、咽部脓性分泌物，播散性淋球菌感染的病炎用无菌棉拭子取喉、咽部脓性分泌物，播散性淋球菌感染的病 人取静脉血人取静脉血5 5l l进行细菌培养。进行细菌培养。第8页，共65页，编辑于2022年，星期六2 2、培养基：、培养基：国外常用的有国外常用的有h（）培（）培养基、养基、wYk（）培养基、（）培养基、（）培养基。国内的有桂敏培养基（）培养基。国内的有桂敏培养基,巧克力琼脂巧克力琼脂培养基。均应为选择性培养基培养基。均应为选择性培养基,在培养基中加入抗生素在培养基中加入抗生素(如多粘菌如多粘菌素素,万古霉素、制霉菌素等万古霉素、制霉菌素等)抑制杂菌生长抑制杂菌生长,同
8、时加入促淋球菌生同时加入促淋球菌生长的增菌剂长的增菌剂(如氨基酸、维生素、嘌呤等如氨基酸、维生素、嘌呤等)。第9页，共65页，编辑于2022年，星期六o3 3、培养条件：、培养条件：淋球菌培养条件高，温度、湿度、值等均可影响淋球菌生长，繁殖。最适生长条件：35 35 3636，含，含5%5%10%CO10%CO2 2，湿润，湿润（70%70%湿度）的环境。湿度）的环境。使用CO2培养箱最佳,若无可用虹缸培养。第10页，共65页，编辑于2022年，星期六结果：结果：o淋淋球球菌菌在在平平皿皿培培养养基基上上培培养养24244848小小时时后后，形形成成直直径径0.5-0.5-1 1mmmm左左右
9、右的的圆圆形形,半半透透明明或或灰灰白白色色,表表面面光光滑滑，湿湿润润，凸凸起起，边边缘缘整整齐齐的的菌菌落落，用用接接种种环环触触之之有有粘粘性性。菌菌落落形形态态特特征征也也为为细细菌菌鉴鉴定定的的标标准准之之一一。涂涂片片作作革革兰兰染染色色发发现现有有肾肾形形成成对对的的革革兰阴性双球菌。兰阴性双球菌。第11页，共65页，编辑于2022年，星期六第12页，共65页，编辑于2022年，星期六淋球菌的鉴定特征淋球菌的鉴定特征菌落形态菌落形态淋球菌样淋球菌样革兰染色革兰染色革兰阴性双球菌革兰阴性双球菌氧化酶试验氧化酶试验阳性阳性过氧化物酶试验过氧化物酶试验阳性阳性快速糖发酵试验快速糖发酵试
10、验G+L-M-S-内酰胺酶内酰胺酶阳性阳性PPNG或阴性或阴性第13页，共65页，编辑于2022年，星期六氧化酶实验第14页，共65页，编辑于2022年，星期六意义意义 1.培养及鉴定结果阳性可确诊淋球菌感染。分离培养、鉴定淋球菌是诊断淋病的“金标准”，也是目前推荐的诊断淋病的方法。2.除男性急性淋病外，男性慢性淋病、女性淋病及其它部位标本如咽部、眼结膜、直肠、肛门淋球菌感染应采用培养法确诊。3.培养的敏感性培养的敏感性81100%。4.培养的优点有：培养的优点有：o 特异性极高（特异性极高（100%）；）；o 可发现无症状淋球菌感染患者；可发现无症状淋球菌感染患者；o 可用于进一步作药敏试验
11、；可用于进一步作药敏试验；o 可用于治疗后的判愈试验。可用于治疗后的判愈试验。第15页，共65页，编辑于2022年，星期六二、支原体实验诊断二、支原体实验诊断分离培养：分离培养：原理原理 生生殖殖道道支支原原体体主主要要有有三三种种，即即解解脲脲支支原原体体(Uu)Uu)、人人型型支支原原体体(Mh)Mh)、生生殖殖支支原原体体(Mg)Mg)，其其中中UuUu与与MhMh较较常常见见。支支原原体体肉肉汤汤培培养养基基中中含含有有酚酚红红指指示示剂剂，并并含含有有尿尿素素、精精氨氨酸酸或或葡葡萄萄糖糖。UuUu有有尿尿素素酶酶，分分解解尿尿素素产产生生氨氨，使使pH值值上上升升，培培养养基基的的
12、颜颜色色由由黄黄变变为为粉粉红红色色。MhMh分分解解精精氨氨酸酸产产生生氨氨，也也使使培培养养基基变变为为粉粉红红色色。而而MgMg分分解解葡葡萄萄糖糖，产产生生乳乳酸酸，使使SP-4SP-4肉肉汤汤培培养养基基由由粉粉红红变变为为黄黄色色，可可初初步步判判定定有有支支原原体体生生长长，再再将将液液体体培培养养物物转转种种到到固固体体培培养养基基，在在合合适适的的条条件件下下，形形成具特征性油煎蛋样集落。成具特征性油煎蛋样集落。但但MgMg较较MhMh、UuUu培养不易生长。培养不易生长。第16页，共65页，编辑于2022年，星期六o方法方法o1、标标本本采采集集：男性用无菌棉拭子插入尿道2
13、4cm，轻轻转动取出分泌物，或取前列腺液；女性先用无菌的脱脂棉擦去阴道内粘液，用无菌棉拭子插入宫颈内12cm处旋转取材；或无菌试管收集清晨首次中段尿离心沉渣。标本采集后立即接种培养，不能立即培养的要放入运送培养基或保存液中。第17页，共65页，编辑于2022年，星期六2、将将标标本本分分别别洗洗人人UuUu、MhMh、MgMg（SP-4SP-4）液液体体培培养养基基，置置37温温箱箱培培养养，每每日日观观察察。Uu培培养养12天天，Mh培培养养23天，天，Mg培养约培养约35140天颜色才会变化。天颜色才会变化。3 3、培培养养基基发发生生颜颜色色变变化化后后取取0.2ml转转种种到到固固体体
14、培培养养基基，在在固固体体培培养养基基上上，Uu培培养养35天天，Mh培培养养45天天，Dienes染色，低倍显微镜下观察。染色，低倍显微镜下观察。第18页，共65页，编辑于2022年，星期六结果结果1、液液体体培培养养基基培培养养：UuUu、MhMh液液体体培培养养基基颜颜色色由由黄黄色色变变红红，透透明明无无混混浊浊，则则可可初初步步判判断断UuUu或或MhMh生生长长；若颜色无改变，则为阴性。；若颜色无改变，则为阴性。2、固体培养基培养：固体培养基培养后，经、固体培养基培养：固体培养基培养后，经Dienes染色，低倍显微镜下观察，见具特征染色，低倍显微镜下观察，见具特征性油煎蛋样集落，可
15、初步确诊，必要时行性油煎蛋样集落，可初步确诊，必要时行PCR鉴定。鉴定。第19页，共65页，编辑于2022年，星期六o意义意义o1、支原体可正常寄居在人体腔道的黏膜上，在机体免疫力低下或、支原体可正常寄居在人体腔道的黏膜上，在机体免疫力低下或黏膜受损的情况下，寄居的支原休可发展成致病原，通过与宿主细黏膜受损的情况下，寄居的支原休可发展成致病原，通过与宿主细胞膜问的相互作用，释放有毒的代谢产物或向宿主细胞吸取自身需胞膜问的相互作用，释放有毒的代谢产物或向宿主细胞吸取自身需要的营养成分，从而引起细胞膜损伤，与非淋菌性尿道炎要的营养成分，从而引起细胞膜损伤，与非淋菌性尿道炎(NGU)的发的发生密切相
16、关，引起前列腺炎、附睾炎、不育症及妇女泌尿生殖道炎症。生密切相关，引起前列腺炎、附睾炎、不育症及妇女泌尿生殖道炎症。第20页，共65页，编辑于2022年，星期六2、支原体的分离培养是确诊支原体感染的“金标准”，使液体培养基颜色改变的影响因素较多，单独的液体培养阳性不能确诊，还应行固体培养基培养鉴定。但Mg生长缓慢，分离培养的难度较大，用分离培养方法检测Mg，在临床实际应用中尚有一定难度，目前主要应用DNA探针及PCR检测Mg。3、34%的正常男性尿道及40%80%已婚妇女宫颈可查出Uu，故Uu阳性者，应结合临床综合判定。若支原体阳性，临床又有泌尿生殖道炎症，在其他病原体检查阴性的情况下，可考虑
17、支原体的感染。第21页，共65页，编辑于2022年，星期六三、沙眼衣原体实验诊断三、沙眼衣原体实验诊断第22页，共65页，编辑于2022年，星期六沙眼衣原体感染的致病谱 第23页，共65页，编辑于2022年，星期六男性尿道炎的诊断标准o尿道分泌物或尿道拭子涂片检查尿道分泌物或尿道拭子涂片检查:o至少在至少在5 5个个1000X1000X视野中，每个视野的多形核白细胞视野中，每个视野的多形核白细胞(PMN)5(PMN)5个个o清晨首次尿沉渣涂片检查清晨首次尿沉渣涂片检查:o至少在至少在5 5个个 400X400X视野中，每个视野的视野中，每个视野的PMN15PMN15个个第24页，共65页，编辑
18、于2022年，星期六诊断沙眼衣原体感染常用的实验室方法 细胞培养法；抗原检测试验,包括直接免疫荧光法和 快速抗原检测。第25页，共65页，编辑于2022年，星期六(一一)细胞培养法细胞培养法 优点优点o此法是目前检测沙眼衣原体感染“金标准”o敏感性8090,特异性100 o可用于判愈 o可用于确诊 缺点缺点o费时（需35天），费力，技术要求高o不宜作为临床常规检查o不宜用于大规模的筛查和流行病学调查第26页，共65页，编辑于2022年，星期六（二）、（二）、直接免疫荧光法直接免疫荧光法原理原理o用荧光素标记的对沙眼衣原体单克降抗体与标本中的沙眼衣原体的抗原结合，单克降抗体标有荧光素，在荧光显微
19、镜下阳性者可见到亮绿的原休和网状休。第27页，共65页，编辑于2022年，星期六直接免疫荧光法原原 理理v针对衣原体的单克隆抗体与相应的抗原结合，单克隆抗体标有荧光素，针对衣原体的单克隆抗体与相应的抗原结合，单克隆抗体标有荧光素，在荧光显微镜下，阳性者可见到亮苹果绿的原体和始体在荧光显微镜下，阳性者可见到亮苹果绿的原体和始体第28页，共65页，编辑于2022年，星期六方法方法 1、男性用无菌棉拭子插入尿道24cm，女性先用无菌的棉签擦去宫颈口粘液，用无菌棉拭子插入宫颈内12cm，旋转取带上皮细胞的标本，涂于玻片上，空气干燥、丙酮固定；2、加荧光素标记的单克隆抗体；3、荧光显微镜观察。第29页，
20、共65页，编辑于2022年，星期六结果结果 阳性标本可见到沙眼衣原体原体，为单个、针尖样大小、发出亮绿色荧光的颗粒。对于泌尿生殖道标本，如果每片中原体数10个，结果为阳性第30页，共65页，编辑于2022年，星期六o意义意义o1、沙眼衣原体为细胞内寄生物致病性微生物，引起泌尿生殖道感染，如尿道炎、宫颈炎和盆腔炎等，若阳性则可诊断NGU。o2、直接免疫荧光法检测沙眼衣原体操作简便、快速，特异性好（83-99%），但敏感性欠佳（70-95%），且受人为因素影响大，故阴性不能排除衣原体感染。第31页，共65页，编辑于2022年，星期六（三）、（三）、抗原快速检测抗原快速检测原原理理 在两块长方形塑板
21、中夹有检测滤纸条，滤纸条吸附有乳胶颗粒结合的沙眼衣原体单克隆抗体。在塑板的“样本窗”加入从标本中提取的抗原，衣原休抗原与衣原体单抗结合形成复合物，通过毛细作用，渗入“结果窗”，在此结合有针对衣原休抗原的制动抗体，如标本中含衣原体抗原则见细线形成。第32页，共65页，编辑于2022年，星期六（三）、（三）、抗原快速检测抗原快速检测免疫扩散试验（Clearview）原原 理理v在两块长方形塑板中衬有检测在两块长方形塑板中衬有检测滤纸条，滤纸条加样窗处吸附滤纸条，滤纸条加样窗处吸附有标记沙眼衣原体单克隆抗体有标记沙眼衣原体单克隆抗体的胶金颗粒。的胶金颗粒。v在塑板的样本窗加样，发生抗在塑板的样本窗加
22、样，发生抗原抗体反应，通过毛细作用，原抗体反应，通过毛细作用，渗入结果窗，此处有衣原体抗渗入结果窗，此处有衣原体抗原的制动抗体，发生沉淀反应，原的制动抗体，发生沉淀反应，见细线形成见细线形成第33页，共65页，编辑于2022年，星期六方法方法 以“立明”（Clearview Chlamydia）免疫扩散试验为例：男性用无菌棉拭子插入尿道24cm，女性先用无菌的棉签擦去宫颈口粘液，再用无菌棉拭子插入宫颈内12cm，旋转取带上皮细胞的标本；第34页，共65页，编辑于2022年，星期六o将标本置于含将标本置于含0.6ml抗原抗原提取液的塑料管中提取液的塑料管中o置置80水浴中水浴中10分钟以分钟以释
23、放抗原释放抗原o将拭子沿管壁挤压，弃将拭子沿管壁挤压，弃之之o加加5滴提取液于样本窗滴提取液于样本窗,15分分钟内观察结果钟内观察结果第35页，共65页，编辑于2022年，星期六男性尿液检查方法男性尿液检查方法第36页，共65页，编辑于2022年，星期六o结果结果 阳性标本在结果窗见一条细线。另外，无论标本为阳性或阴性，都应在质控窗显示一条细线，表明试剂质量合格，试验步骤正确第37页，共65页，编辑于2022年，星期六o意义意义o 此法诊断沙眼衣原体感染简便、快速，敏感性为此法诊断沙眼衣原体感染简便、快速，敏感性为87，特异性为特异性为98.8。临床最常用临床最常用。缺点是标本中需要足。缺点是
24、标本中需要足够数量的沙眼衣原体抗原，敏感性不够好，阴性不能排除够数量的沙眼衣原体抗原，敏感性不够好，阴性不能排除衣原体感染。衣原体感染。第38页，共65页，编辑于2022年，星期六四、梅毒实验检查四、梅毒实验检查（一）螺旋体暗视野显微镜检查（一）螺旋体暗视野显微镜检查 原理原理 梅毒螺旋体感染人体后，引起皮肤、粘摸及淋巴结的损害，并可在皮梅毒螺旋体感染人体后，引起皮肤、粘摸及淋巴结的损害，并可在皮肤、粘摸及淋巴结穿刺液中查到梅毒螺旋体。普通光学显微镜下梅毒肤、粘摸及淋巴结穿刺液中查到梅毒螺旋体。普通光学显微镜下梅毒螺旋体螺旋体半透明，折光性强，不能看见。用特殊的聚光器代替普螺旋体螺旋体半透明，
25、折光性强，不能看见。用特殊的聚光器代替普通聚光器装置的暗视野显微镜，光线从聚光器边缘斜射到显微镜载玻通聚光器装置的暗视野显微镜，光线从聚光器边缘斜射到显微镜载玻片上，而视野中无直射光线，如载玻片无标本则一片黑暗；当标本中片上，而视野中无直射光线，如载玻片无标本则一片黑暗；当标本中有螺旋体时，光线经过螺旋体时因折射而发光。用暗视野显微镜检查有螺旋体时，光线经过螺旋体时因折射而发光。用暗视野显微镜检查法不但可以观察有无螺旋体，还可以观察螺旋体的运动形态。法不但可以观察有无螺旋体，还可以观察螺旋体的运动形态。第39页，共65页，编辑于2022年，星期六方法方法、标标本本采采集集：选选择择发发病病时时
26、间间短短的的损损害害（硬硬下下疳疳、扁扁平平湿湿疣疣、溃溃疡疡、脓脓疮疮疹疹、粘粘膜膜斑斑），有有痂痂者者去去痂痂，先先用用无无菌菌棉棉球球或或纱纱布布蘸蘸生生理理盐盐水水，将将皮皮损损拭拭净净，轻轻压压皮皮损损至至渗渗液液（避避免免出出血血）。然然后后用用载载玻玻片片印印取取渗渗液液，立立即即检检查查，未未破破溃溃者者用用手手术术刀刀刮刮破破皮皮疹疹，取取渗渗出出液液。若若从从淋淋巴巴结结取取材材，以以无无菌菌操操作作法法用用注注射射器器吸吸取取0.3-0.5ml生生理理盐盐水水，穿穿刺刺入入淋淋巴巴结结，再再回回吸吸数数次次，最最后后将将吸吸取取液液涂涂玻玻片片上上，立即检查。立即检查。、
27、检查：、检查：标本置于载玻片上，加一滴生理盐水，盖上盖玻片，在标本置于载玻片上，加一滴生理盐水，盖上盖玻片，在暗室暗室中中于暗视野显微镜上油镜观察。螺旋体半透明，折光性强，不仅能看于暗视野显微镜上油镜观察。螺旋体半透明，折光性强，不仅能看到螺旋体形态，还可观察运动形态。到螺旋体形态，还可观察运动形态。第40页，共65页，编辑于2022年，星期六结果结果 在在暗暗视视野野显显微微镜镜下下梅梅毒毒螺螺旋旋体体折折光光性性强强，呈呈螺螺旋旋形形，较较纤纤细细，两两端端尖尖细细，其其长长度度6-14um.8-14个个螺螺旋旋，运运动动缓缓慢慢且且有有规规律律，方方式式有有旋旋转转、伸伸缩缩或或蛇蛇行行
28、运运动动，符符合合通通过过典典型型的的形形态态、大大小小、运运动动方式，则暗视野检查阳性。方式，则暗视野检查阳性。第41页，共65页，编辑于2022年，星期六第42页，共65页，编辑于2022年，星期六意义意义 1、暗暗视视野野显显微微镜镜查查阳阳性性，临临床床上上可可确确诊诊梅梅毒毒。特特别别对对一一期期梅梅毒毒硬硬下下疳疳，肿肿大大淋淋巴巴结结，二二期期梅梅毒毒皮皮肤肤粘粘膜膜损损的的诊诊断断有有重重要要价价值值，尤尤其其使使用用于于早早期期梅梅毒毒血血清学阴性时。但阴性结果不能排除梅毒感染。清学阴性时。但阴性结果不能排除梅毒感染。2、该该方方法法具具有有快快速速、方方便便、可可靠靠的的特
29、特点点，以以被被WHO确确定定为为性性病病实实验验室室必必备备项目之一。项目之一。3、口腔中含有其他密螺旋体，与梅毒螺旋体不易区别，暗视野显微镜、口腔中含有其他密螺旋体，与梅毒螺旋体不易区别，暗视野显微镜查不推荐于口腔皮损材料。查不推荐于口腔皮损材料。第43页，共65页，编辑于2022年，星期六（二）、梅毒血清学检查（二）、梅毒血清学检查原理原理 人体感染梅毒螺旋体后可产生多种抗体，一方面，在组织破坏过程中可释人体感染梅毒螺旋体后可产生多种抗体，一方面，在组织破坏过程中可释放一种具有抗原性的类脂质（心磷脂），能刺激机体产生相应的抗体，为放一种具有抗原性的类脂质（心磷脂），能刺激机体产生相应的抗
30、体，为非特非特异性的，称为反应素异性的，称为反应素。另一方面，机体产生针对梅毒螺旋体的抗体，为。另一方面，机体产生针对梅毒螺旋体的抗体，为特特异性异性的。故梅毒血清学试验包括在体外用心磷脂为抗原检测患者血清的。故梅毒血清学试验包括在体外用心磷脂为抗原检测患者血清中抗心磷脂抗体的非特异性血清学试验（非螺旋体抗原血清学试验）中抗心磷脂抗体的非特异性血清学试验（非螺旋体抗原血清学试验）和用死的或活的螺旋体或其成分来检测患者血清中抗螺旋体抗体的特和用死的或活的螺旋体或其成分来检测患者血清中抗螺旋体抗体的特异性血清学试验（螺旋体抗原血清学试验）。异性血清学试验（螺旋体抗原血清学试验）。第44页，共65页
31、，编辑于2022年，星期六方法方法心磷脂为抗原检测患者血清中抗心磷脂抗体，可定性、定量实验，包括a 性病研究实验室试验(venereal disease research laboratory，VDRL)b 不加热血清反应素试验(unheated serum reagin test，USR)c 快速血浆反应素环状卡片试验(rapid plasma reagin circle card test，RPR)d 甲苯胺红不加热血清反应素实验（Toluidine red unheated serum test.TRUST）第45页，共65页，编辑于2022年，星期六第46页，共65页，编辑于2022年
32、，星期六2、特异性血清学试验特异性血清学试验 用死的或活的螺旋体或其成分用死的或活的螺旋体或其成分作抗原作抗原来检测患者血来检测患者血清中抗螺旋体抗体。包括清中抗螺旋体抗体。包括1 梅毒螺旋体荧光抗体吸收试验梅毒螺旋体荧光抗体吸收试验(fluorescent treponemal antibody absorption test，FTA-ABS)2 2 梅毒螺旋体血球凝集试验梅毒螺旋体血球凝集试验(treponema pallidum hemagglutination test.TPHA)3 梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(treponemapallidum partic
33、le assay，TPPA)第47页，共65页，编辑于2022年，星期六第48页，共65页，编辑于2022年，星期六意义：意义：1、非特异性血清学试验非特异性血清学试验阳性可能表示：现症感染、接受或未接受过治疗的近期阳性可能表示：现症感染、接受或未接受过治疗的近期感染，以及生物学假阳性；感染，以及生物学假阳性；2、特异性血清学试验特异性血清学试验阳性结果表示：现症感染、接受或末接受过治阳性结果表示：现症感染、接受或末接受过治疗的近期感染，既往曾经感染。疗的近期感染，既往曾经感染。第49页，共65页，编辑于2022年，星期六3、非特异性血清学试验非特异性血清学试验敏感性高，特异性低，可出现假阳性
34、；早期梅毒敏感性高，特异性低，可出现假阳性；早期梅毒患者经充分治疗后，滴度逐渐下降，半年到患者经充分治疗后，滴度逐渐下降，半年到2年大部分年大部分非特异性血非特异性血清学试验清学试验阴转。早期未经治疗者到晚期，部分病人中反应素也可阴转。早期未经治疗者到晚期，部分病人中反应素也可以减少或消失。故以减少或消失。故非特异性血清学试验非特异性血清学试验可作为可作为筛选试验筛选试验及及观察疗效，观察疗效，复发及再感染。复发及再感染。第50页，共65页，编辑于2022年，星期六4、特异性血清学试验特异性血清学试验因其敏感性高，特异性强，可作为证实试验及排除假阳性。因其敏感性高，特异性强，可作为证实试验及排
35、除假阳性。在多数情况下，一旦感染了梅毒，在多数情况下，一旦感染了梅毒，特异性血清学试验特异性血清学试验抗体阳性可保持数抗体阳性可保持数年，甚至终生阳性，故定性的年，甚至终生阳性，故定性的特异性血清学试验特异性血清学试验不作为疗效判定。不作为疗效判定。第51页，共65页，编辑于2022年，星期六5 5、非特异性血清学试验、非特异性血清学试验生物学假阳性有多种生物学假阳性有多种疾病：疾病：急性或慢性传染病：风疹、麻疹、水痘、疟疾、上呼吸道感染、急性或慢性传染病：风疹、麻疹、水痘、疟疾、上呼吸道感染、病毒性肝炎，活动性肺结核、麻风，肺炎球菌性肺炎等；病毒性肝炎，活动性肺结核、麻风，肺炎球菌性肺炎等；
36、其它疾病：其它疾病：SLE、类风湿性关节炎、风心病、类风湿性关节炎、风心病、DLE、肝硬化、慢、肝硬化、慢性肾炎、系统性硬化症、自身免疫性溶血性贫血等；性肾炎、系统性硬化症、自身免疫性溶血性贫血等；身体状况改变：麻醉剂成瘾、妊娠、年老等。但一般身体状况改变：麻醉剂成瘾、妊娠、年老等。但一般假阳性血清抗体假阳性血清抗体滴度滴度1：4，可用定量的方法排除或用特异性螺旋体抗原试验进行确诊。，可用定量的方法排除或用特异性螺旋体抗原试验进行确诊。第52页，共65页，编辑于2022年，星期六6、梅毒感染的较早期，机体尚未产生抗体，、梅毒感染的较早期，机体尚未产生抗体，非特异性血清学试验和特异性非特异性血清
37、学试验和特异性血清学试验均可阴性，需追踪观察。血清学试验均可阴性，需追踪观察。第53页，共65页，编辑于2022年，星期六试验结果试验结果意义意义RPR+，TPPA-RPR+，TPPA+RPR-，TPPA+RPR-，TPPA-RPR假阳性现症梅毒，治愈的晚期梅毒极早期梅毒，治愈的梅毒排除梅毒感染极早期梅毒梅毒血清学试验的结果解释举例第54页，共65页，编辑于2022年，星期六梅毒的复查梅毒的复查 梅梅毒毒治治疗疗后后的的随随访访：第一年每3个月复查一次，以后每年复查一次，连续23年。如果在1224个月内未下降4倍（即2个稀释度）或有提示为梅毒进展的症状和体症，则应做N梅毒的评价，并予相应治疗。
38、妊妊娠娠梅梅毒毒：分娩前应每月检查一次RPR，如3个月内血清不下降二个稀释度，应予复治，分娩后按一般梅毒随访。先先天天梅梅毒毒：经过治疗的梅毒孕妇所生婴儿，出生时如血清反应阳性，应每月检查一次，连续6个月，如血清反应阴转，且未出现先天梅毒的临床症状，则可停止观察。出生时阴性，应于出生后1月、2月、3月及6月复查，至6个月时血清仍为阴性，且无先梅症状，可停止观察。第55页，共65页，编辑于2022年，星期六五、尖锐湿疣实验诊断五、尖锐湿疣实验诊断 尖锐湿疣的病原体为人乳头瘤病毒尖锐湿疣的病原体为人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)感染引起。运用基因克隆及分子杂交已发
39、现感染引起。运用基因克隆及分子杂交已发现HPV有有100多个亚型，在尖多个亚型，在尖锐湿疣中鉴定出锐湿疣中鉴定出20多种病毒亚型。外生殖器疣的发生主要与多种病毒亚型。外生殖器疣的发生主要与HPV 1、2、6、10、11、16、18、31、33、35、42、51型的感染有关。其中型的感染有关。其中6、11两型最常见于肛门及生殖器部位的尖锐湿疣，而两型最常见于肛门及生殖器部位的尖锐湿疣，而16、18、31、33、35则与亚临床感染及生殖器肿有关。则与亚临床感染及生殖器肿有关。尖锐湿疣临床表现典型时，诊断并不困难，但病变早期不典型病例则借助实尖锐湿疣临床表现典型时，诊断并不困难，但病变早期不典型病例
40、则借助实验室检查诊断。验室检查诊断。第56页，共65页，编辑于2022年，星期六1 1、病理检查：、病理检查：常规切片，常规切片，HE染色，病理变化主要表现为：轻度角化过度有角染色，病理变化主要表现为：轻度角化过度有角化不全棘层细胞增厚，乳头瘤样增生和化不全棘层细胞增厚，乳头瘤样增生和/或假上皮瘤样增生。颗粒或假上皮瘤样增生。颗粒层和棘层上部可见空泡细胞，多呈灶性。真皮水肿，毛细血管扩层和棘层上部可见空泡细胞，多呈灶性。真皮水肿，毛细血管扩张，周围有淋巴细胞浸润。张，周围有淋巴细胞浸润。第57页，共65页，编辑于2022年，星期六2 2、醋酸白试验：、醋酸白试验：原理原理 人人乳乳头头瘤瘤病病
41、毒毒（HPV）感感染染的的皮皮损损可可产产生生异异种种蛋蛋白白，在在5的的醋醋酸酸作作用用下下该该蛋蛋白白被被凝凝固固，使使组组织织变变白白，不不明明显显的的疣疣变变得得肉眼可见，可用于检测肉眼可见，可用于检测HPV的亚临床感染。的亚临床感染。第58页，共65页，编辑于2022年，星期六方法方法 用用棉棉签签蘸蘸5醋醋酸酸溶溶液液涂涂于于可可疑疑皮皮损损处处或或用用浸浸过过醋醋酸酸溶溶液液的的用用纱纱布布敷敷在在皮皮损损上上，5分分钟钟（肛肛周周皮皮损损10-15分钟）后肉眼观察分钟）后肉眼观察。结果结果 HPV感染部位呈现白色改变为感染部位呈现白色改变为醋酸白试验阳性醋酸白试验阳性。意义意义
42、 1、醋醋酸酸白白试试验验阳阳性性可可帮帮助助诊诊断断尖尖锐锐湿湿疣疣，尤尤其其亚亚临床感染者；临床感染者；2、醋醋酸酸白白试试验验检检测测尖尖锐锐湿湿疣疣敏敏感感性性很很高高，但但并并不不具具特特异异性性，在在慢慢性性炎炎症症、念念珠珠菌菌感感染染、上上皮增厚或外伤擦破的皮损可出现假阳性。皮增厚或外伤擦破的皮损可出现假阳性。第59页，共65页，编辑于2022年，星期六六、生殖器疱疹实验检查六、生殖器疱疹实验检查 生生殖殖器器疱疱疹疹的的临临床床表表现现多多样样，可可表表现现为为典典型型的的集集簇簇性性水水疱疱、脓脓疱疱、溃溃疡疡及及结结痂痂，也也可可表表现现为为非非特特异异性性红红斑斑、丘丘
43、疹疹、裂裂隙隙、硬硬结结(或或疖疖肿肿)、毛毛囊囊炎炎、皮皮肤肤擦擦破破、红红肿肿渗渗液液性性包包皮皮龟龟头头炎炎等等不不典典型型或或不不易易识识别别的的皮皮损损，但但无无症症状状亚亚临临床床感感染染者者较较为为普普遍遍。生生殖殖器器疱疱疹疹的的常常用用实实验验室室诊诊断断技术包括以下几个方面：技术包括以下几个方面：第60页，共65页，编辑于2022年，星期六一、一、HSV抗原检测抗原检测原理：原理：用免疫学技术检测病毒抗原 生殖器疱疹的损害中存在HSV，用荧光素标记的特异性抗HSV单克隆抗体，在一定条件下，再与标本中的相应HSV抗原结合，形成有荧光的抗原抗体复合物，通过荧光显微镜观察，可看到
44、复合物发出的荧光，即表示标本中存在HSV抗原。第61页，共65页，编辑于2022年，星期六方法方法 1、直接免疫荧光法、直接免疫荧光法从疱液、溃疡、宫颈取材涂片，丙酮固定、干燥，分别滴加异硫氰酸(FITC)标记的HSV-1和HSV-2荧光单克隆抗体，干燥后观察结果。2、间接免疫荧光法、间接免疫荧光法 待检标本涂片、固定，滴加抗HSV抗体(第一抗体)再加荧光素标记的抗球蛋白抗体(第二抗体)，干燥、荧光显微镜下观察结果 第62页，共65页，编辑于2022年，星期六结果结果 阳性：上皮细胞的细胞浆和细胞核内可见亮绿色荧光；阳性：上皮细胞的细胞浆和细胞核内可见亮绿色荧光；阴性：上皮细胞染成橙红或暗红色
45、，无亮绿色荧光阴性：上皮细胞染成橙红或暗红色，无亮绿色荧光。意义意义1、阳性提示生殖器疱疹的诊断；、阳性提示生殖器疱疹的诊断；2、免疫荧光试验方法简单、敏感性和特异性好，是目前临床、免疫荧光试验方法简单、敏感性和特异性好，是目前临床HSV检测的常用方法。检测的常用方法。o第63页，共65页，编辑于2022年，星期六二、二、HSV病毒分离培养病毒分离培养 是生殖器疱疹实验室诊断的是生殖器疱疹实验室诊断的“金标准金标准”。通常需时。通常需时24天，可长达天，可长达14天。天。临床标本可以来自皮损、尿道内、宫颈管。临床标本可以来自皮损、尿道内、宫颈管。标本的来源部位和疾病的病程影响病毒分离培养的敏感性，采用斑标本的来源部位和疾病的病程影响病毒分离培养的敏感性，采用斑丘疹、水疱、脓疱、溃疡、结痂性皮损标本作病毒分离培养的丘疹、水疱、脓疱、溃疡、结痂性皮损标本作病毒分离培养的敏敏感性感性分别为分别为25%、94%、87%、70%和和27%。第64页，共65页，编辑于2022年，星期六谢 谢！第65页，共65页，编辑于2022年，星期六