《高二生物(基因工程的基本操作程序)精选文档.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《高二生物(基因工程的基本操作程序)精选文档.ppt（14页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、高二生物(基因工程的基本操作程序)本讲稿第一页，共十四页三、目的基因导入受体细胞三、目的基因导入受体细胞 1 1、什么是转化？、什么是转化？2 2、目的基因导入植物细胞常用的方法、目的基因导入植物细胞常用的方法是什么？具体过程是怎样的？是什么？具体过程是怎样的？3 3、目的基因导入动物细胞常用的方法是、目的基因导入动物细胞常用的方法是什么？基本操作程序是怎样的？什么？基本操作程序是怎样的？4 4、目的基因导入大肠杆菌的方法是怎样的、目的基因导入大肠杆菌的方法是怎样的？钙离子有什么作用？钙离子有什么作用？本讲稿第二页，共十四页转化转化目的基因进入受体细胞内，并且在受体目的基因进入受体细胞内，并且
2、在受体细胞内细胞内维持稳定和表达维持稳定和表达的过程。的过程。三、目的基因导入受体细胞三、目的基因导入受体细胞本讲稿第三页，共十四页1.1.目的基因导入植物细胞目的基因导入植物细胞常用的方法常用的方法:农杆菌转化法、农杆菌转化法、基因枪法、花粉基因枪法、花粉 管通道法管通道法农杆菌的特点农杆菌的特点:a.a.易感染双子叶植物和祼子植物。易感染双子叶植物和祼子植物。b.b.具有趋化性。具有趋化性。c.Tic.Ti质粒上的质粒上的T-DNAT-DNA可转移到受体细胞，可转移到受体细胞，并整合到受体细胞染色体的并整合到受体细胞染色体的DNADNA上上三、目的基因导入受体细胞三、目的基因导入受体细胞本
3、讲稿第四页，共十四页三、目的基因导入受体细胞三、目的基因导入受体细胞1.1.目的基因导入植物细胞目的基因导入植物细胞农杆菌转化法的导入过程农杆菌转化法的导入过程:构建基因表达载体构建基因表达载体转入转入农杆菌农杆菌植物细胞植物细胞导入导入稳定维持和表达稳定维持和表达本讲稿第五页，共十四页.目的基因导入动物细胞目的基因导入动物细胞常用的方法常用的方法:显微注射技术显微注射技术操作程序：操作程序：三、目的基因导入受体细胞三、目的基因导入受体细胞a.a.先提纯含目的基因的表达载体先提纯含目的基因的表达载体 b.b.从动物体内取出卵从动物体内取出卵(受精卵）受精卵）c.c.显微注射仪进行显微注射显微注
4、射仪进行显微注射 d.d.将含目的基因的受精卵移植到输卵管将含目的基因的受精卵移植到输卵管或子宫中发育成新个体或子宫中发育成新个体本讲稿第六页，共十四页3.3.目的基因导入微生物细胞目的基因导入微生物细胞原核生物的特点原核生物的特点:繁殖快，多为单细胞，遗传物质相对较少。繁殖快，多为单细胞，遗传物质相对较少。大肠杆菌的转化过程大肠杆菌的转化过程:用用CaCa2+2+处理细胞处理细胞 增加细胞壁的透性，增加细胞壁的透性，与细胞膜无关与细胞膜无关三、目的基因导入受体细胞三、目的基因导入受体细胞 感受态细胞感受态细胞重组表达载体重组表达载体DNADNA分子与感受态细胞混合分子与感受态细胞混合感受态细
5、胞吸收感受态细胞吸收DNADNA分子分子本讲稿第七页，共十四页四、目的基因的检测与鉴定四、目的基因的检测与鉴定1 1、导入目的基因后需要检测哪些方面？各、导入目的基因后需要检测哪些方面？各采取什么方法？采取什么方法？2 2、什么是、什么是DNADNA分子探针？检测时的分子探针？检测时的DNADNA探针探针通过什么原理来检测目的基因和相应的通过什么原理来检测目的基因和相应的mRNAmRNA？3 3、利用抗体抗原杂交检测的原理是什、利用抗体抗原杂交检测的原理是什么？么？本讲稿第八页，共十四页1.1.目的基因是否插入受体细胞染色体的目的基因是否插入受体细胞染色体的DNADNA上上目的基因的检测内容和
6、方法目的基因的检测内容和方法检测方法检测方法:DNADNA分子杂交技术分子杂交技术DNADNA探针：探针：用放射性同位素等作标记的含有目的用放射性同位素等作标记的含有目的基因的基因的DNADNA片段。片段。四、目的基因的检测与鉴定四、目的基因的检测与鉴定本讲稿第九页，共十四页2.2.目的基因是否转录出目的基因是否转录出mRNAmRNA目的基因的检测内容和方法目的基因的检测内容和方法检测方法检测方法:分子杂交技术分子杂交技术用用DNADNA探针与探针与mRNAmRNA杂交。杂交。四、目的基因的检测与鉴定四、目的基因的检测与鉴定本讲稿第十页，共十四页目的基因的检测内容和方法目的基因的检测内容和方法
7、检测方法检测方法:抗原抗原抗体杂交抗体杂交3.3.目的基因是否翻译出蛋白质目的基因是否翻译出蛋白质 四、目的基因的检测与鉴定四、目的基因的检测与鉴定本讲稿第十一页，共十四页4 4、个体生物学水平的鉴定、个体生物学水平的鉴定四、目的基因的检测与鉴定四、目的基因的检测与鉴定本讲稿第十二页，共十四页珠蛋白是动物血红蛋白的重要组成成分，珠蛋白是动物血红蛋白的重要组成成分，当它的成分异常时，动物可能患某种疾病，当它的成分异常时，动物可能患某种疾病，如镰刀型细胞贫血症，假如让你用基因工程如镰刀型细胞贫血症，假如让你用基因工程的方法使大肠杆菌生产出鼠的的方法使大肠杆菌生产出鼠的珠蛋白，珠蛋白，想一想，应该如
8、何设计？想一想，应该如何设计？思考与探究思考与探究本讲稿第十三页，共十四页思考与探究思考与探究1.1.从小鼠中克隆出从小鼠中克隆出珠蛋白基因的编码序列（珠蛋白基因的编码序列（CDNACDNA）。）。2.2.将将cDNAcDNA前接上在大肠杆菌中可以适用的启动子，另外前接上在大肠杆菌中可以适用的启动子，另外加上抗四环素的基因，构建成一个表达载体。加上抗四环素的基因，构建成一个表达载体。3.3.将表达载体导入无四环素抗性的大肠杆菌中，然后将表达载体导入无四环素抗性的大肠杆菌中，然后在含有四环素的培养基上培养大肠杆菌。如果表达载在含有四环素的培养基上培养大肠杆菌。如果表达载体未进入大肠杆菌中，大肠杆菌会因不含有抗四环素体未进入大肠杆菌中，大肠杆菌会因不含有抗四环素基因而死掉；如果培养基上长出了大肠杆菌菌落，则基因而死掉；如果培养基上长出了大肠杆菌菌落，则表明表明珠蛋白基因已进入。珠蛋白基因已进入。4.4.培养进入了培养进入了珠蛋白基因的大肠杆菌，收集菌体，珠蛋白基因的大肠杆菌，收集菌体，破碎后从中提取破碎后从中提取珠蛋白。珠蛋白。本讲稿第十四页，共十四页