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1、高中生物微生物的实验室培养本讲稿第一页，共六十三页微生物包括哪五类：微生物包括哪五类：病毒病毒细菌细菌放线菌放线菌真菌真菌原生动物原生动物特点：特点：结构都相当简单结构都相当简单,个体多数十分微小个体多数十分微小.通常要用通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构细胞结构.且体内一般不含有叶绿素且体内一般不含有叶绿素.不能进行光合作不能进行光合作用用.原核生物界原核生物界 原生生物界原生生物界真菌界真菌界病毒界病毒界微生物基础知识本讲稿第二页，共六十三页细菌的外形与大小细菌：细菌：单细胞不分枝的原核微生物单细胞不分枝的原核微生物。细
2、菌细胞细菌细胞微小而透明微小而透明，通常用适当染料，通常用适当染料染染色色后显微镜观察后显微镜观察图图1-1 常见的三种细菌典型形态常见的三种细菌典型形态A.球菌球菌 B.杆菌杆菌 C.弧菌弧菌本讲稿第三页，共六十三页细菌细胞由外向里依次有鞭毛鞭毛、菌菌（纤）毛纤）毛、荚膜荚膜、细胞壁细胞壁、细胞膜、细胞膜、细胞质细胞质，细胞质细胞质中又有液泡、储中又有液泡、储存性颗粒、核质存性颗粒、核质等等。细菌的构造图图图图1-3 1-3 细菌的结构细菌的结构细菌的结构细菌的结构本讲稿第四页，共六十三页*细胞壁结构特点：坚韧且有弹性结构特点：坚韧且有弹性细胞壁有哪些功能？细胞壁有哪些功能？固定细胞外形；固
3、定细胞外形；w w 保护细胞免受外力的损伤；保护细胞免受外力的损伤；保护细胞免受外力的损伤；保护细胞免受外力的损伤；w w 阻拦大分子物质进人细胞阻拦大分子物质进人细胞；使细胞具有致病性及对使细胞具有致病性及对噬菌体的敏感性。噬菌体的敏感性。伤伤寒寒杆杆菌菌细细胞胞壁壁中中含含毒毒素素本讲稿第五页，共六十三页 有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做芽芽孢孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。例。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸如，有的
4、细菌的芽孢，煮沸3 3小时以后才死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘小时以后才死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌细菌.本讲稿第六页，共六十三页菌落：单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落构的子细胞群体，叫做菌落。菌落是鉴定菌种的重要依据。菌落是鉴定菌种的重要依据。本讲稿第七页，共六十三页菌落细菌的菌落特征因细菌的菌落特征因种而异种
5、而异 本讲稿第八页，共六十三页放线菌放线菌1 1、结构：、结构：单细胞原核单细胞原核分支状的菌丝（基内菌丝、气生菌丝）分支状的菌丝（基内菌丝、气生菌丝）本讲稿第九页，共六十三页链霉素、土霉素、四环素、链霉素、土霉素、四环素、氯霉素、红霉素、庆大霉素氯霉素、红霉素、庆大霉素 微生物中发现了几千种抗生素，其中微生物中发现了几千种抗生素，其中2/32/3是是由放线菌产生的由放线菌产生的 应用应用:本讲稿第十页，共六十三页病毒的结构病毒的结构本讲稿第十一页，共六十三页病毒病毒 本讲稿第十二页，共六十三页SARS病毒、病毒、禽流感病毒禽流感病毒本讲稿第十三页，共六十三页朊病毒（蛋白质病毒）本讲稿第十四页
6、，共六十三页2、病毒的增殖：、病毒的增殖：本讲稿第十五页，共六十三页真菌真菌本讲稿第十六页，共六十三页如图是酵母菌电子显微镜如图是酵母菌电子显微镜下的形态结构下的形态结构酵母菌和霉菌酵母菌和霉菌青霉青霉本讲稿第十七页，共六十三页生殖生殖直立菌丝直立菌丝 营养菌丝营养菌丝腐生生活腐生生活孢子生殖孢子生殖本讲稿第十八页，共六十三页细菌的营养类型 根据细菌所利用的能源和碳源的不同，根据细菌所利用的能源和碳源的不同，将细菌分为两大营养类型。将细菌分为两大营养类型。自养菌（自养菌（autotrophautotroph）异养菌（异养菌（heterotrophheterotroph）腐生菌腐生菌寄生菌寄生菌
7、 大部分病原菌大部分病原菌本讲稿第十九页，共六十三页本讲稿第二十页，共六十三页 了解有关培养基的基础知识，进行无菌技了解有关培养基的基础知识，进行无菌技术的操作，进行微生物的培养。术的操作，进行微生物的培养。一、课题目标：一、课题目标：掌握掌握培养基的制备培养基的制备、高压蒸气灭菌高压蒸气灭菌和和平板平板划线法划线法等基本操作技术，熟练、规范地进等基本操作技术，熟练、规范地进行无菌操作，成功地培养微生物。行无菌操作，成功地培养微生物。无菌技术的操作。无菌技术的操作。二、课题重点和难点：二、课题重点和难点：三、技能目标：三、技能目标：本讲稿第二十一页，共六十三页一、基础知识：一、基础知识：（一）
8、培养基（一）培养基 培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。（1 1）按物理状态来分：培养基可分为）按物理状态来分：培养基可分为固体培养基固体培养基和和液体培养基液体培养基。其中固体培养基用于菌种分离、。其中固体培养基用于菌种分离、鉴定菌落等。鉴定菌落等。（2 2）按功能来分，可分为）按功能来分，可分为选择培养基选择培养基和和鉴别培养鉴别培养基基。（3 3）按成分来分，可分为）按成分来分，可分为天然培养基天然培养基和和合成培养合成培养基基。1.1.培养基的类型和用途培养基的类型和用途
9、本讲稿第二十二页，共六十三页 2.2.不同的微生物往往需要采用不同的不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方培养基配方(参考教材附录内容参考教材附录内容)3.3.不管哪种培养基，一般都含有不管哪种培养基，一般都含有水水、碳源碳源、和、和氮源氮源、无机盐无机盐、等等营养物质，另营养物质，另外还需要满足微生物生长对外还需要满足微生物生长对pHpH、特殊营养特殊营养物质物质,例如例如:生长因子生长因子(即细菌生长必需，而自即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物身不能合成的化合物,如维生素、某些氨基酸、如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶嘌呤、嘧啶)以及以及氧气氧气、二氧化碳二氧化碳、渗透压渗透压等的要求
10、。等的要求。本讲稿第二十三页，共六十三页选择培养基加入青霉素的培养基加入青霉素的培养基:分离酵母菌、霉菌等真菌分离酵母菌、霉菌等真菌加入高浓度食盐的培养基加入高浓度食盐的培养基:分离金黄色葡萄球菌分离金黄色葡萄球菌不加氮源的无氮培养基不加氮源的无氮培养基:分离固氮菌分离固氮菌不加含碳有机物的无碳培养基不加含碳有机物的无碳培养基:分离自养型微生物分离自养型微生物加入青霉素等抗生素的培养基加入青霉素等抗生素的培养基:分离导入了目的基因的受体细胞加入氨基喋呤、次分离导入了目的基因的受体细胞加入氨基喋呤、次黄嘌呤和胸腺嘧啶黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷的培养基核苷的培养基:分离杂交瘤细胞分离杂交瘤细胞本讲稿第二
11、十四页，共六十三页 根据细胞生存所需物质的种类和数根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成的。量，用人工方法模拟合成的。合成培养基主要成分是氨基酸、维合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。辅助物质。优点：优点：标准化生产，组分和含量相对标准化生产，组分和含量相对固定固定;成本低成本低 缺点：缺点：缺少某些成分，不能完全满足缺少某些成分，不能完全满足体外细胞生长需要。体外细胞生长需要。合成培养基合成培养基:本讲稿第二十五页，共六十三页 天然培养基有血清、血浆、和组织天然培养基有血清、血浆、和组织提取液（如鸡胚和牛胚
12、浸液）。提取液（如鸡胚和牛胚浸液）。优点：优点：营养成分丰富，培养效果好营养成分丰富，培养效果好缺点：缺点：来源受限来源受限;成分复杂，影响对某成分复杂，影响对某些实验产物的提取和实验结果的分析些实验产物的提取和实验结果的分析;易发生支原体污染易发生支原体污染;天然培养基：天然培养基：本讲稿第二十六页，共六十三页血清中含有：血清中含有：多种蛋白质（白蛋白、球蛋多种蛋白质（白蛋白、球蛋白、铁蛋白等）白、铁蛋白等）多种金属离子；多种金属离子；激素；激素；促贴附物质，如纤粘蛋白、冷促贴附物质，如纤粘蛋白、冷析球蛋白、胶原等。析球蛋白、胶原等。各种生长因子各种生长因子转移蛋白转移蛋白不明成分不明成分
13、人工合成培养基只能维持细胞生存，要想使细胞生长人工合成培养基只能维持细胞生存，要想使细胞生长和繁殖，还需补充一定量的天然培养基（如血清）。和繁殖，还需补充一定量的天然培养基（如血清）。本讲稿第二十七页，共六十三页液体培养基：液体培养基：表面生长表面生长均匀混浊生长均匀混浊生长沉淀生长沉淀生长本讲稿第二十八页，共六十三页固体培养基：菌落，菌苔固体培养基：菌落，菌苔本讲稿第二十九页，共六十三页半固体培养基：半固体培养基：无动力无动力 有动力有动力(弥散弥散)(是否运动是否运动)本讲稿第三十页，共六十三页4.4.培养基的用途培养基的用途液体培养基：增菌液体培养基：增菌固体培养基：纯化，增菌固体培养基
14、：纯化，增菌半固体培养基：动力检测，保种半固体培养基：动力检测，保种本讲稿第三十一页，共六十三页（二）无菌技术（二）无菌技术1.1.无菌技术的概念无菌技术的概念 无菌操作泛指无菌操作泛指在培养微生物的操作中，在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。所有防止杂菌污染的方法。无论是随后将要无论是随后将要学到的学到的倒平板倒平板、平板划线平板划线操作，还是操作，还是平板稀平板稀释涂布法释涂布法，其操作中的每一步都需要做到，其操作中的每一步都需要做到“无无菌菌”，即防止杂菌污染。只有熟练、规范地进，即防止杂菌污染。只有熟练、规范地进行无菌操作，才可能成功地培养微生物。行无菌操作，才可能成功地培养
15、微生物。本讲稿第三十二页，共六十三页（）（）消毒定义：消毒定义：利用化学或物理方法，杀死大部份致病利用化学或物理方法，杀死大部份致病微生物的过程。区分为微生物的过程。区分为高程度消毒高程度消毒（High-High-level Disinfectionlevel Disinfection）、）、中程度消毒中程度消毒（Intermediate-level DisinfectionIntermediate-level Disinfection）、）、低程度消毒低程度消毒（Low-level DisinfectionLow-level Disinfection）三）三种方式。种方式。2.2.消毒与灭菌
16、的概念及两者的区别消毒与灭菌的概念及两者的区别 本讲稿第三十三页，共六十三页（2 2）灭菌的定义：）灭菌的定义：以化学剂或物理方法消灭以化学剂或物理方法消灭所有所有微生微生物，包括所有细菌的繁殖体、芽孢、霉菌物，包括所有细菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒，而达到及病毒，而达到完全无菌完全无菌之过程。之过程。灭菌与消毒技术是微生物有关工作灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重要的技术。中最普通也是最重要的技术。本讲稿第三十四页，共六十三页1 1、煮沸消毒法煮沸消毒法:100100煮沸煮沸5-6min5-6min2 2、巴氏消毒法：、巴氏消毒法：70-75 70-75 下煮下煮30min30m
17、in或或 80 80 下煮下煮15min15min3 3、化学药剂消毒法、化学药剂消毒法:用用75%75%酒精、新洁酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒尔灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水源氯气消毒水源4 4、紫外线消毒、紫外线消毒(1)消毒的方法：消毒的方法：3.3.常用的消毒与灭菌的方法常用的消毒与灭菌的方法本讲稿第三十五页，共六十三页1 1、灼烧灭菌、灼烧灭菌2 2、干热灭菌：、干热灭菌：160-160-170 170 下加热下加热1-2h1-2h。3 3、高压蒸气灭菌：、高压蒸气灭菌：100kPa100kPa、121 121 下维持下维持15-30min.15-30min.(2)灭菌的方法：灭菌的方
18、法：本讲稿第三十六页，共六十三页 最常用的灭菌方法是最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌，它可以杀灭，它可以杀灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体，所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体，同时可以基本保持培养基的营养成分不被破坏。同时可以基本保持培养基的营养成分不被破坏。有些玻璃器皿也可采用有些玻璃器皿也可采用高温干热灭菌高温干热灭菌。为了防。为了防止杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻璃烧瓶止杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采都需采用适宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各种金属、塑料及硅胶帽，它们只可让空气通过，
19、用各种金属、塑料及硅胶帽，它们只可让空气通过，而空气中的其他微生物不能通过。而空气中的其他微生物不能通过。而平皿是由正反两平面板互扣而成，这种器具而平皿是由正反两平面板互扣而成，这种器具是专为防止空气中微生物的污染而设计的。是专为防止空气中微生物的污染而设计的。本讲稿第三十七页，共六十三页分类分类定义定义方法方法灭菌法灭菌法杀灭一切微生物杀灭一切微生物物理法：热力、辐射、微物理法：热力、辐射、微波、等离子体波、等离子体化学法：醛类、烷化剂化学法：醛类、烷化剂高效消毒高效消毒法法杀灭一切致病微杀灭一切致病微生物生物紫外线、含氯剂、臭氧、紫外线、含氯剂、臭氧、复配剂等复配剂等中效消毒中效消毒法法杀
20、灭除芽孢外的杀灭除芽孢外的致病微生物致病微生物超声波、碘类、醇类、酚超声波、碘类、醇类、酚类类低效消毒低效消毒法法杀灭细菌繁殖体、杀灭细菌繁殖体、亲脂病毒亲脂病毒单链季胺盐、双胍类、中单链季胺盐、双胍类、中草药、金属离子草药、金属离子无菌技术无菌技术本讲稿第三十八页，共六十三页3.微生物实验室培养的基本操作程序微生物实验室培养的基本操作程序1 1、器具的灭菌、器具的灭菌2 2、培养基的配制、培养基的配制3 3、培养基的灭菌、培养基的灭菌4 4、倒平板、倒平板5 5、微生物接种、微生物接种6 6、恒温箱中培养、恒温箱中培养7 7、菌种的保存、菌种的保存本讲稿第三十九页，共六十三页1.1.无菌技术
21、除了用来防止实验室的培养物被其无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？他外来微生物污染外，还有什么目的？2.2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。菌。如果需要，请选择合适的方法。（1 1）培养细菌用的培养基与培养皿培养细菌用的培养基与培养皿（2 2）玻棒、试管、烧瓶和吸管玻棒、试管、烧瓶和吸管（3 3）实验操作者的双手实验操作者的双手 答：无菌技术还能有效避免操作者自身被答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。微生物感染。答：（答：（1）、（）、（2）需要灭菌；（）需要灭菌；（3）
22、需要消毒）需要消毒。本讲稿第四十页，共六十三页三、实验操作三、实验操作 1.制备牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养细菌）制备牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养细菌）本讲稿第四十一页，共六十三页1 1计算、称量计算、称量2 2溶化溶化3 3调调pHpH：pH7pH76 64 4过滤：这一步可以省去。过滤：这一步可以省去。5 5分装：分装过程中注意不要使培养基分装：分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分装三角烧瓶的量以不超过三角烧污染。分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。瓶容积的一半为宜。6 6加塞加塞7 7包扎包扎操作步骤操作步
23、骤本讲稿第四十二页，共六十三页 8 8灭菌灭菌:将将50ml50ml培养基培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上棉用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅，在压力花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为为100kPa100kPa、温度为、温度为121121，灭菌，灭菌151530min30min。将。将培培养皿养皿用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在160160170 170 下灭菌下灭菌2h2h。9 9倒平板倒平板:待培养基冷却到待培养基冷却到50 50 左右时，在酒精灯附近倒平左右时，在酒精灯附近倒平板。（倒平板操作见课本）板
24、。（倒平板操作见课本）2d2d后观察平板，无杂菌污染后观察平板，无杂菌污染才可用来接种才可用来接种.10 10无菌检查：无菌检查：将灭菌的培养基放入将灭菌的培养基放入3737的温室中培养的温室中培养24482448小时，以检查灭菌是否彻底。小时，以检查灭菌是否彻底。本讲稿第四十三页，共六十三页倒平板技术倒平板技术倒平板技术倒平板技术本讲稿第四十四页，共六十三页1.1.培养基灭菌后，需要冷却到培养基灭菌后，需要冷却到50 50 左右时，才能用左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？答：答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，可以用手触摸盛有培
25、养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。以进行倒平板了。2.2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。培养基。本讲稿第四十五页，共六十三页3.3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，为什么要将平板倒置？4.4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？微生物吗？为什么
26、？答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。上的水珠落入培养基，造成污染。答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。本讲稿第四十六页，共六十三页2 2、纯化大肠杆菌、纯化大肠杆菌接种方法有：接种方法有：平板划线法和稀释
27、涂布平板法平板划线法和稀释涂布平板法 平板划线法平板划线法:通过接种环在琼脂固体培通过接种环在琼脂固体培养基表面连续画线的操作养基表面连续画线的操作,将聚集的菌钟将聚集的菌钟逐步稀释分散到培养基的表面逐步稀释分散到培养基的表面.在数次画线后在数次画线后,可以分离到由一个细胞可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体,这就这就是菌落是菌落.微生物的接种技术微生物的接种技术本讲稿第四十七页，共六十三页本讲稿第四十八页，共六十三页本讲稿第四十九页，共六十三页 1.1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在
28、划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？吗？为什么？答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。使每次划线时菌
29、种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。本讲稿第五十页，共六十三页2.2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？进行划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。答：以免接种环温度太高，杀死菌种。3.3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线是从上一次划线的末端开始划线？答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处答：划线后，线条末
30、端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。得到由单个细菌繁殖而来的菌落。本讲稿第五十一页，共六十三页本讲稿第五十二页，共六十三页本讲稿第五十三页，共六十三页 涂布平板的所有操作都应在火焰附近涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第作要求，想一想，第2 2步应如何进行无菌步应如何进行无菌操作？操作？应从操作的各个细节保证应从操作的各个细节
31、保证“无菌无菌”。例如，。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。等。本讲稿第五十四页，共六十三页微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养本讲稿第五十五页，共六十三页微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养本讲稿第五十六页，共六十三页菌种的保存菌种的保存 1 1、临时保藏：接、临时保藏：接种到固体斜面培养基，种到固体斜面培养基，菌落长成后置于菌落长成后置于44冰箱保存。冰箱保存。2 2、
32、长期保存：甘、长期保存：甘油冷冻管藏法油冷冻管藏法本讲稿第五十七页，共六十三页四、课题成果评价四、课题成果评价（一）培养基的制作是否合格（一）培养基的制作是否合格 如果未接种的培养基在恒温箱中保温如果未接种的培养基在恒温箱中保温1 12 d2 d后无菌落后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。（二）接种操作是否符合无菌要求（二）接种操作是否符合无菌要求 如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求并符合大肠杆菌菌落的特点，
33、则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。（三）是否进行了及时细致的观察与记录（三）是否进行了及时细致的观察与记录 培养培养12 h12 h与与24 h24 h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微的变化。这一步的要求主要是培养学生良好的科学态度与习惯。的变化。这一步的要求主要是培养
34、学生良好的科学态度与习惯。本讲稿第五十八页，共六十三页本课题知识小结本课题知识小结:本讲稿第五十九页，共六十三页【典例解析】【典例解析】例例1 1关微生物营养物质的叙述中，正确的是关微生物营养物质的叙述中，正确的是A.A.是碳源的物质不可能同时是氮源是碳源的物质不可能同时是氮源 B.B.凡碳源都提供能量凡碳源都提供能量C.C.除水以外的无机物只提供无机盐除水以外的无机物只提供无机盐 D.D.无机氮源也能提供能量无机氮源也能提供能量 解析：解析：不同的微生物，所需营养物质有较大差别，要针对微生不同的微生物，所需营养物质有较大差别，要针对微生物的具体情况分析。对于物的具体情况分析。对于A A、B
35、B选项，它的表达是不完整的。有的碳选项，它的表达是不完整的。有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同时是氮源，如源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同时是氮源，如NH4HCO3NH4HCO3；有的碳源同时是能源，如葡萄糖；有的碳源同时是氮；有的碳源同时是能源，如葡萄糖；有的碳源同时是氮源，也是能源，如蛋白胨。对于源，也是能源，如蛋白胨。对于C C选项，除水以外的无机物种类繁选项，除水以外的无机物种类繁多，功能也多样。如二氧化碳，可作为自养型微生物的碳源；多，功能也多样。如二氧化碳，可作为自养型微生物的碳源；NaHCO3NaHCO3，可作为自养型微生物的碳源和无机盐；而，可作为自养型微生物的
36、碳源和无机盐；而NaClNaCl则只能则只能提供无机盐。对于提供无机盐。对于D D选项，无机氮源提供能量的情况还是存在的，选项，无机氮源提供能量的情况还是存在的，如如NH3NH3可为硝化细菌提供能量和氮源。可为硝化细菌提供能量和氮源。答案：答案：D本讲稿第六十页，共六十三页例例2 2下面对发酵工程中灭菌的理解下面对发酵工程中灭菌的理解不正确不正确不正确不正确的是的是A.A.防止杂菌污染防止杂菌污染 B.B.消灭杂菌消灭杂菌C.C.培养基和发酵设备都必须灭菌培养基和发酵设备都必须灭菌 D.D.灭菌必须在接种前灭菌必须在接种前B 解析：灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。解析：灭菌是微生物发酵过程
37、的一个重要环节。A A说的是灭菌说的是灭菌的目的，因为发酵所用的菌种大多是单一的纯种，整个发酵过程的目的，因为发酵所用的菌种大多是单一的纯种，整个发酵过程不能混入其他微生物（杂菌），所以是正确的；不能混入其他微生物（杂菌），所以是正确的；B B是错误的，因是错误的，因为灭菌的目的是防止杂菌污染，但实际操作中不可能只消灭杂菌，为灭菌的目的是防止杂菌污染，但实际操作中不可能只消灭杂菌，而是消灭全部微生物。而是消灭全部微生物。C C是正确的，因为与发酵有关的所有设备是正确的，因为与发酵有关的所有设备和物质都要灭菌；发酵所用的微生物是灭菌后专门接种的，灭菌和物质都要灭菌；发酵所用的微生物是灭菌后专门接
38、种的，灭菌必须在接种前，如果接种后再灭菌就会把所接菌种也杀死。必须在接种前，如果接种后再灭菌就会把所接菌种也杀死。本讲稿第六十一页，共六十三页编号编号成分成分含量含量粉状硫粉状硫10g10g（NHNH4 4）2 2SOSO4 40.4g0.4gK K2 2HPOHPO4 44.0g4.0gMgSOMgSO4 49.25g9.25gFeSOFeSO4 40.5g0.5gCaClCaCl2 20.5g0.5gH H2 2O O100ml100ml例例3 3右表是某微生物培养右表是某微生物培养基成分，请据此回答：基成分，请据此回答：（1 1）右表培养基可培养）右表培养基可培养的微生物类型是的微生物类
39、型是 。（2 2）若不慎将过量）若不慎将过量NaClNaCl加入培养基中。加入培养基中。如不想浪费此培养基，可如不想浪费此培养基，可再加入再加入 .自养型微生物自养型微生物 含碳有机物含碳有机物 本讲稿第六十二页，共六十三页（3 3）若除去成分）若除去成分，加入（，加入（CH2OCH2O），该培养基可用于培），该培养基可用于培养养 。（4 4）表中营养成分共有）表中营养成分共有 类。类。（5 5）不论何种培养基，在各种成分都溶化后分装前，要）不论何种培养基，在各种成分都溶化后分装前，要进行的是进行的是 。（6 6）右表中各成分重量确定的原则是）右表中各成分重量确定的原则是 。（7 7）若右表培养基用于菌种鉴定，应该增加的成分是）若右表培养基用于菌种鉴定，应该增加的成分是 。固氮微生物固氮微生物 3 调整调整pHpH 依微生物的生长需要确定依微生物的生长需要确定 琼脂（或凝固剂）琼脂（或凝固剂）本讲稿第六十三页，共六十三页