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1、实验检测生物组织中的糖类脂肪和蛋白质第1页，共18页，编辑于2022年，星期五一一.实验原理：实验原理：某些某些化学试剂化学试剂能够使生物组织中的有关能够使生物组织中的有关有机化有机化合物合物产生特定的产生特定的颜色反应颜色反应。如：。如：.还原性糖的鉴定：还原性糖的鉴定：还原性糖还原性糖+.脂肪的鉴定：脂肪的鉴定：脂肪脂肪+脂肪脂肪+.蛋白质的鉴定：蛋白质的鉴定：蛋白质蛋白质+淀粉+斐林试剂斐林试剂砖红色沉淀砖红色沉淀苏丹苏丹染液染液橘黄色橘黄色苏丹苏丹染液染液红色红色双缩脲试剂双缩脲试剂紫色紫色碘碘蓝色蓝色2第2页，共18页，编辑于2022年，星期五二二.目的要求：目的要求：尝试用化学试剂
2、检测生物组织中糖类、脂尝试用化学试剂检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质肪和蛋白质1 1、还原糖的检测和观察：、还原糖的检测和观察：选材选材 应该选择含应该选择含 量高量高.颜色为颜色为 以以苹果苹果.梨梨为最好。为最好。糖糖白色或近于白色白色或近于白色制备组织样液：制备组织样液：制浆制浆 过滤过滤 取液取液三三.实验过程实验过程:用一层纱布的植物组织，的植物组织，3第3页，共18页，编辑于2022年，星期五可溶性还原糖与斐林试剂在加热的过程中可溶性还原糖与斐林试剂在加热的过程中生成砖红色沉淀，生成砖红色沉淀，说明植物组织样液中含说明植物组织样液中含有有还原糖还原糖。注入注入2mL2mL苹果组苹果
3、组织样液织样液注入注入1mL1mL刚配制好的斐刚配制好的斐林试剂林试剂水浴加热约水浴加热约2min2min呈色反应呈色反应变成砖红色50-650C的温水结论：结论：甲乙液等量混匀现配现用振荡、混合摇匀呈现蓝色4第4页，共18页，编辑于2022年，星期五 还原糖有还原糖有 。试剂：试剂：.（甲液：（甲液：0.1g/ml 的的 ,乙液：乙液：0.05g/ml的的 .）甲乙液必须甲乙液必须 后再加入样后再加入样 液液中，中，。必须必须 。葡萄糖，果糖，麦芽糖葡萄糖，果糖，麦芽糖用水浴加热用水浴加热斐林试剂斐林试剂NaOHCuSO4等量混合均匀等量混合均匀现配现用现配现用注意事项：注意事项：颜色变化：
4、颜色变化：浅蓝色浅蓝色棕色棕色砖红色砖红色5第5页，共18页，编辑于2022年，星期五思考：思考：l1.为什么加入斐林试剂甲液和斐林试剂乙液时必为什么加入斐林试剂甲液和斐林试剂乙液时必须混合后再加入？须混合后再加入？l因为若先加入NaOH溶液，还原性糖中的还原性半缩醛羟基易被氧化而失去还原性，再加入CuSO4溶液后不能产生Cu2O砖红色沉淀，只有将其先配成Cu(OH)2悬浊液，才可产生砖红色沉淀。6第6页，共18页，编辑于2022年，星期五2.斐林试剂甲液和乙液既然混合后使用，为什么不能在实验前配制好，一定要使用时临时配制？l由一分析可知，鉴定试剂实质上是Cu(OH)2悬浊液，很不稳定，容易生
5、成蓝色Cu(OH)2沉淀，所以应将甲液、乙液分别配制储存，使用时再临时配制7第7页，共18页，编辑于2022年，星期五二、脂肪的检测方法一：制作临时切片二、脂肪的检测方法一：制作临时切片（1）选材：经浸泡去种皮的花生种子。选材：经浸泡去种皮的花生种子。（2）检测过程）检测过程：制片制片选取最薄的切片置于洁净的载玻片中央选取最薄的切片置于洁净的载玻片中央制制成临时装片：滴成临时装片：滴1 2滴蒸馏水，盖上盖玻片滴蒸馏水，盖上盖玻片染色：在薄片上滴加染色：在薄片上滴加2 3滴苏丹滴苏丹染液，染色染液，染色2 3min洗去洗去浮色：用吸水纸吸去染液，滴加体积分数为浮色：用吸水纸吸去染液，滴加体积分数
6、为50%的酒精的酒精1 2滴滴镜镜观察：观察：在低倍镜下寻找到已着色的圆形小颗在低倍镜下寻找到已着色的圆形小颗粒，然后用高倍镜观察。粒，然后用高倍镜观察。切片：切片：花生种子（浸泡花生种子（浸泡h），去皮，），去皮，将子叶削成薄片。将子叶削成薄片。视野中视野中有橘黄有橘黄色颗粒色颗粒第8页，共18页，编辑于2022年，星期五第9页，共18页，编辑于2022年，星期五橘黄色小圆颗粒即橘黄色小圆颗粒即为脂肪颗粒为脂肪颗粒脂肪脂肪+苏丹苏丹（或苏丹（或苏丹）染液）染液 橘黄色（或红色）橘黄色（或红色）第10页，共18页，编辑于2022年，星期五注意事项：注意事项：切片要切片要薄，薄，如厚薄不均就会导
7、致观察时如厚薄不均就会导致观察时有的地方清晰有的地方模糊。有的地方清晰有的地方模糊。酒精的作用是：酒精的作用是：。需需使用显微镜观察使用显微镜观察 使用不同的染色剂染色时间不同使用不同的染色剂染色时间不同颜色变化：颜色变化：。洗去浮色洗去浮色橘黄色或红色橘黄色或红色11第11页，共18页，编辑于2022年，星期五3 3、蛋白质的检测和观察：、蛋白质的检测和观察：选材选材 应该选择含应该选择含 丰富丰富 的的豆浆豆浆或或鸡蛋清鸡蛋清溶液（避免材料自身的颜色对实溶液（避免材料自身的颜色对实 验验变化颜色的掩盖）变化颜色的掩盖）蛋白质蛋白质黄豆浆滤液或蛋清稀释液黄豆浆滤液或蛋清稀释液制备组织样液制备
8、组织样液呈色反应呈色反应组织组织样液样液2mL2mL双缩脲试双缩脲试剂剂A A液液1mL1mL双缩脲试双缩脲试剂剂B B液液4 4滴滴摇匀后变成紫色结论：结论：说明组织样液中存在蛋白质。说明组织样液中存在蛋白质。12第12页，共18页，编辑于2022年，星期五（3 3）注意事项：）注意事项：试剂：试剂：（A液：液：0.1g/ml的的 ；B液：液：0.01g/ml的的 ）先加先加 ，再加，再加 。注意：注意：先加入试剂先加入试剂A，造成碱性环境，而只有在碱性环境中，蛋白质才，造成碱性环境，而只有在碱性环境中，蛋白质才容容易与易与Cu离子发生颜色反应，形成紫色的络合物。离子发生颜色反应，形成紫色的
9、络合物。B液要求量适中液要求量适中，否则，否则多余的多余的B液液将会将会与与A液液发生反应生成大量蓝色发生反应生成大量蓝色Cu(OH)2沉淀沉淀而遮盖试验中所产生的紫色而遮盖试验中所产生的紫色。同样为了防止生成较同样为了防止生成较Cu(OH)2沉淀遮蔽实验结果，在配制溶液时，双缩脲试剂沉淀遮蔽实验结果，在配制溶液时，双缩脲试剂B比斐林试剂乙液浓度小得比斐林试剂乙液浓度小得多，这也是斐林试剂和双缩脲试剂不能互换使用的道理。多，这也是斐林试剂和双缩脲试剂不能互换使用的道理。鉴定前，留出一部分组织样液，以便对比鉴定前，留出一部分组织样液，以便对比。用于蛋白质鉴定的蛋清必须稀释，以免实验后粘住试管壁，
10、不易洗刷用于蛋白质鉴定的蛋清必须稀释，以免实验后粘住试管壁，不易洗刷双缩脲试剂双缩脲试剂A A液液1ml1mlB B液液4 4滴滴NaOHCuSO4蛋白质的检测结果13第13页，共18页，编辑于2022年，星期五斐林试剂与双缩脲试剂的比较：斐林试剂与双缩脲试剂的比较：A A液液:0.1g/mLNaOH:0.1g/mLNaOHB B液液:0.010.01g/mLCuSOg/mLCuSO4 4甲液甲液:0.1g/mLNaOH:0.1g/mLNaOH乙液乙液:0.050.05g/mLCuSOg/mLCuSO4 4紫色物质生成紫色物质生成砖红色沉淀砖红色沉淀先加先加A A液液，再加再加B B液液，不不
11、需加热需加热甲液与乙液甲液与乙液先混再用先混再用，且，且现配现用现配现用，需，需加热加热蛋白质蛋白质还原性糖还原性糖试剂试剂组成组成检验检验结果结果试剂试剂用法用法检测检测对象对象双缩脲试剂双缩脲试剂斐林试剂斐林试剂14第14页，共18页，编辑于2022年，星期五比较项目比较项目斐林试剂斐林试剂双缩脲试剂双缩脲试剂不不同同点点使用方法使用方法甲液和乙液混合均匀后方可甲液和乙液混合均匀后方可使用，且使用，且现配现用现配现用使用时先加使用时先加A液再加液再加B液液反应条件反应条件需需50-65水浴加热水浴加热不需加热即可反应不需加热即可反应反应原理反应原理还原糖中的醛基被还原糖中的醛基被Cu（OH
12、）2 悬浊液氧化悬浊液氧化,Cu（OH）2被还原为被还原为砖红色砖红色Cu2O沉淀沉淀具有两个以上肽键的化合物具有两个以上肽键的化合物在碱性条件下与在碱性条件下与Cu2+反应生反应生成成紫色紫色络合物络合物颜色颜色砖红色砖红色紫色紫色浓度浓度乙液乙液CuSO4浓度为浓度为0.05 g/mLB液液CuSO4浓度为浓度为0.01g/mL相同点相同点 都含有都含有NaOH、CuSO4两种成分，且所用两种成分，且所用NaOH浓度都是浓度都是0.1g/mL第15页，共18页，编辑于2022年，星期五斐林斐林试剂与双缩脲试剂都由试剂与双缩脲试剂都由NaOH和和CuSO4组成，但二者有如下三组成，但二者有如
13、下三点不同：点不同：溶液浓度不同。斐林试剂中溶液浓度不同。斐林试剂中NaOH的浓度为的浓度为0.1g/mL，CuSO4的浓的浓度为度为0.05g/mL；双缩脲试剂中；双缩脲试剂中NaOH的浓度为的浓度为0.1g/mL，CuSO4的浓度的浓度为为0.01g/mL。使用原理不同。斐林试剂实质是新配制的使用原理不同。斐林试剂实质是新配制的Cu(OH)2溶液；双缩脲试溶液；双缩脲试剂实质是在碱性环境下的剂实质是在碱性环境下的Cu2。使用方法不同。使用斐林试剂时，先把使用方法不同。使用斐林试剂时，先把NaOH溶液和溶液和CuSO4溶液混合，溶液混合，然后立即使用。使用双缩脲试剂时，先加入然后立即使用。使
14、用双缩脲试剂时，先加入NaOH溶液，然后再加溶液，然后再加入入CuSO4溶液。溶液。第16页，共18页，编辑于2022年，星期五淀粉的检测和观察：淀粉的检测和观察：取材：取材：马铃薯匀浆马铃薯匀浆检测检测组织组织样液样液2mL2mL碘液碘液2 2滴滴结论：结论：说明组织样液中存在淀粉。说明组织样液中存在淀粉。注意：注意：常用材料：马铃薯常用材料：马铃薯 试剂：试剂：。颜色变化：。颜色变化：。碘液碘液变蓝变蓝摇匀后变成蓝色17第17页，共18页，编辑于2022年，星期五四种物质颜色反应的对比四种物质颜色反应的对比还原糖还原糖蛋白质蛋白质淀粉淀粉脂肪脂肪18第18页，共18页，编辑于2022年，星期五