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1、实验五微生物细胞大小和数量的测定第1页，共12页，编辑于2022年，星期五 微生物细胞大小和数量的测定微生物细胞大小和数量的测定目的要求实验材料实验程序思考题第2页，共12页，编辑于2022年，星期五目的要求目的要求学习使用目镜测微尺和镜台测微尺在显学习使用目镜测微尺和镜台测微尺在显微镜下测定微生物大小的方法。微镜下测定微生物大小的方法。学习使用血球记数板测定微生物数量的学习使用血球记数板测定微生物数量的方法。方法。第3页，共12页，编辑于2022年，星期五实验材料实验材料显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、细显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、细菌染色片、血球记数板、酵母菌悬液、菌染色片、血球记数板
2、、酵母菌悬液、盖玻片、无菌滴管、西水纸、擦镜纸、盖玻片、无菌滴管、西水纸、擦镜纸、香柏油、二甲苯。香柏油、二甲苯。第4页，共12页，编辑于2022年，星期五实验程序实验程序测定微生物的大小测定微生物的大小测定微生物数量测定微生物数量第5页，共12页，编辑于2022年，星期五实验程序实验程序（测定微生物的大小）（测定微生物的大小）测定的工具：目镜测微尺测定的工具：目镜测微尺 镜台测微尺镜台测微尺第6页，共12页，编辑于2022年，星期五实验程序实验程序 （测定微生物的大小）（测定微生物的大小）目镜测微尺的校正：在高倍镜下，看清镜台测微尺的刻度后，转动目镜，目镜测微尺的校正：在高倍镜下，看清镜台测
3、微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺与镜台测微尺的刻度平行，移动推动器，使目镜测微尺的使目镜测微尺与镜台测微尺的刻度平行，移动推动器，使目镜测微尺的0点点与镜台测微尺的某一刻度重合，然后，仔细寻找两尺第二个完全重合与镜台测微尺的某一刻度重合，然后，仔细寻找两尺第二个完全重合的刻度。计算两刻度间目镜测微尺的格数和镜台测微尺的格数。由于的刻度。计算两刻度间目镜测微尺的格数和镜台测微尺的格数。由于镜台测微尺的刻度每格长镜台测微尺的刻度每格长10m，所以可得：，所以可得：目镜测微尺每格长度（目镜测微尺每格长度（m）=（镜台测微尺格数（镜台测微尺格数10）/目镜测微尺格目镜测微尺格数数 注意：校正目镜测
4、微注意：校正目镜测微尺必须针对特定的显微镜和附件（特定的接物镜、接目镜、镜筒长度等）尺必须针对特定的显微镜和附件（特定的接物镜、接目镜、镜筒长度等）进行，而且只能在这特定的情况下才可重复使用。进行，而且只能在这特定的情况下才可重复使用。菌体大小的测定：取下镜台测微尺，将细菌染色标本置于载物台上，然后菌体大小的测定：取下镜台测微尺，将细菌染色标本置于载物台上，然后在油镜下用目镜测微尺测量菌体的长和宽。在油镜下用目镜测微尺测量菌体的长和宽。第7页，共12页，编辑于2022年，星期五实验程序实验程序 （测定微生物数量）（测定微生物数量）方法：活菌计数法方法：活菌计数法平板菌落计数法；总菌计数法平板菌
5、落计数法；总菌计数法血球计血球计数板或霍瑟（数板或霍瑟（Peroff Hausser）细菌计数板（二者原理和部件相同，）细菌计数板（二者原理和部件相同，只是厚薄不同而已）。只是厚薄不同而已）。第8页，共12页，编辑于2022年，星期五实验程序实验程序 1 （测定微生物数量）（测定微生物数量）本实验用血球计数板计数酵母菌的数量本实验用血球计数板计数酵母菌的数量 1.取清洁无油的血球计数板，在计数室上面加取清洁无油的血球计数板，在计数室上面加盖玻片。盖玻片。2.取酵母菌液，摇匀，用滴管由盖玻片边缘滴一取酵母菌液，摇匀，用滴管由盖玻片边缘滴一小滴，使菌液自行渗入，计数室内不得有气泡。小滴，使菌液自行
6、渗入，计数室内不得有气泡。3.静止静止5min后，用低倍镜观察并将计数室移至后，用低倍镜观察并将计数室移至视野中央。视野中央。4.在高倍镜下计数：随机计数五个中格的平均值，在高倍镜下计数：随机计数五个中格的平均值，然后求得每个中格的平均值。乘上然后求得每个中格的平均值。乘上16（或（或25）就）就得出一大格中的总菌数，最后再换算到每得出一大格中的总菌数，最后再换算到每mL菌菌液中的含菌数。液中的含菌数。第9页，共12页，编辑于2022年，星期五 实实 验验 程程 序序IV 2 5.计算方法计算方法：6.注意事项：压在方格线上的菌体，以压在底线和右注意事项：压在方格线上的菌体，以压在底线和右侧线
7、上的菌体计入本格内；遇到有芽体的酵母时，若侧线上的菌体计入本格内；遇到有芽体的酵母时，若芽体和母体同等大，就按单个酵母计数。芽体和母体同等大，就按单个酵母计数。7.计数完毕后，血球计数板要立即清洗干净，并用吸水计数完毕后，血球计数板要立即清洗干净，并用吸水纸吸干，最后用擦镜纸擦干净，并放回盒内。纸吸干，最后用擦镜纸擦干净，并放回盒内。（X1+X2+X3+X4+X5）5X 25（或（或16）X 10 X 1000 x 稀释倍数稀释倍数 酵母菌细胞数酵母菌细胞数/mL=第10页，共12页，编辑于2022年，星期五思考题思考题为什么目镜测微尺必须用镜台测微尺来为什么目镜测微尺必须用镜台测微尺来校正？校正？在显微镜下直接测定微生物数量有什么在显微镜下直接测定微生物数量有什么优缺点？优缺点？第11页，共12页，编辑于2022年，星期五实实 验验 五五结结 束束第12页，共12页，编辑于2022年，星期五