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1、活体染色实验课件本讲稿第一页，共十一页活体染色法显示巨噬细胞活体染色法显示巨噬细胞本讲稿第二页，共十一页 定义：活体染色定义：活体染色(vital staining)(vital staining)一一般是指用无毒或毒性很小的染料般是指用无毒或毒性很小的染料,在不影响在不影响细胞的正常生命活动的前提下而使活细胞细胞的正常生命活动的前提下而使活细胞的某些结构着色的一种实验方法。的某些结构着色的一种实验方法。最早进行活体染色的是最早进行活体染色的是Paul Ehrlich Paul Ehrlich(1885)(1885)他把刚切下的新鲜组织浸泡在亚甲他把刚切下的新鲜组织浸泡在亚甲基蓝基蓝(美蓝美蓝
2、)溶液中溶液中,再用显微镜来观察尚处再用显微镜来观察尚处在生活状态下的活细胞结构。在生活状态下的活细胞结构。本讲稿第三页，共十一页实验目的实验目的 1 1、练习并掌握动物组织活体染色方法。2、学习大鼠肠系膜铺片制作方法。3 3、学习大鼠皮下结缔组织铺片制作方法。、学习大鼠皮下结缔组织铺片制作方法。4 4、了解大鼠肝脏石蜡切片制片方法，观察、了解大鼠肝脏石蜡切片制片方法，观察KupfferKupffer细胞。细胞。本讲稿第四页，共十一页实验原理 要显示巨噬细胞多采用活体染色法，即将一种对要显示巨噬细胞多采用活体染色法，即将一种对动物无毒害或毒性很小的染料，用注射器注入动物体动物无毒害或毒性很小的
3、染料，用注射器注入动物体的腹膜腔或血管内，体内有吞噬能力的细胞会将注入的腹膜腔或血管内，体内有吞噬能力的细胞会将注入的活体染料吞噬入细胞内。然后将动物杀死取材，经固定、浸洗、复染、脱水、透明、封固等手续制成玻固定、浸洗、复染、脱水、透明、封固等手续制成玻片标本。片标本。活体染色一般选用的燃料有台盼蓝、中性红、锂洋红、墨汁等。本讲稿第五页，共十一页实验材料与器材实验材料与器材实验动物实验动物：成年大白鼠：成年大白鼠实验试剂与器材实验试剂与器材：1%1%台盼蓝染液，乙醚，福尔马林，台盼蓝染液，乙醚，福尔马林，酒精（梯度），harris苏木精染液、曙红染液，二甲苏木精染液、曙红染液，二甲苯，中性树胶
4、；手术器械一套，苯，中性树胶；手术器械一套，5ml5ml注射器，载玻注射器，载玻片，盖玻片，卧式染缸，单面刀片。片，盖玻片，卧式染缸，单面刀片。本讲稿第六页，共十一页实验步骤实验步骤1 1、活体注射、活体注射 大白鼠麻醉、称重，按8ml8ml每千克体重动物，注每千克体重动物，注射1%1%的台盼蓝溶液。每天注射一次，注射的台盼蓝溶液。每天注射一次，注射4545天。天。本讲稿第七页，共十一页注射前大鼠注射后大鼠本讲稿第八页，共十一页2、取材 动物断头处死，取皮下结缔组织、肠系膜、肝脏或大网膜为材料。取小块结缔组织或肠系膜，置于载玻片上，用解剖针尽量将其铺平，干燥后浸入上，用解剖针尽量将其铺平，干燥后浸入10%10%福尔马林福尔马林中固定。中固定。3 3、固定、固定 用10%福尔马林固定1224h。本讲稿第九页，共十一页4、浸洗、浸洗 用用70%酒精浸洗数小时，中间更换数次新液，酒精浸洗数小时，中间更换数次新液，再用蒸馏水浸洗片刻，即可进行染色。也可直接进入入70%70%酒精中保存。酒精中保存。5、染色、染色 固定好的铺片进行常规固定好的铺片进行常规HEHE染色（详细过程见石染色（详细过程见石蜡切片制作介绍）。蜡切片制作介绍）。注意：盐酸酒精分色要适度，过量会导致巨噬注意：盐酸酒精分色要适度，过量会导致巨噬细胞脱色。本讲稿第十页，共十一页本讲稿第十一页，共十一页