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1、通塞脉微丸化学成分的研究_通塞脉片 摘 要：目的：探讨通塞脉微丸中的化学成分。方法：通过高效液相色谱可将三萜、黄酮及有机酸类等10余种化学成分较好的分别。依据紫外光谱可大致推断其化合物类型，由电喷雾质谱得到各成分的分子量，进而推想出其中主要成分的可能结构。结果：发觉可能有绿原酸、甘草苷、夏拂托苷、甘草素-4-芹糖葡萄糖苷、异甘草素葡萄糖芹糖苷、木犀草苷、安格洛苷C、异甘草苷、木犀草素、异甘草素、甘草糖苷B、甘草酸单铵盐、甘草酸等13个化合物。结论：通过对通塞脉微丸化学成分的解析，为阐明通塞脉微丸的药效物质基础供应有力的证据。 关键词：通塞脉微丸；HPLC/MS；化学成分 中图分类号：R284.
2、1 文献标识码：A文章编号： 1673-7717（2008）11-2355-04 Study on Compounds in Tongsaimai Pellets by HPLC-MS LI Weidong1,2,CAI Baochang1,2,DING Xuansheng3 （1.Nanjing University of Chinese Medicine,Nanjing 210046,Jiangsu,China;2.Jiangsu Key Laboratory of Chinese Medicine Processing,Nanjing 210046,Jiangsu,China;3.Chi
3、na Pharmaceutical University, Nanjing 210046,Jiangsu,China） Abstract：Objective:To study compounds in Tongsaimai Pellets.Methods: A few chemical constituents belong to triterpenes,flavones and phenolic acids are isolated commendably.Their type can be determined by ultraviolet spectrum,their molecular
4、 weight can be obtained by electrospray mass spectroscopy,and their imaginable structure can be deduced.Results:13 compounds in Tongsaimai Pellets were identified by HPLC-MSThey are chlorogenic acid, liquiritin, schaftoside, ligquiritigenin-4-apiosyl-glucoside, licuraside, luteoloside, angoroside C,
5、 isoliquiritin, luteolin, isoliq uiritigenin, licorice-glucoside B, mono-ammonium glycyrrhetate and glcyrrhizic acid. Conclusion: To elucidate pharmacodynamic substantial basis by analyzing chemical constituents in Tongsaimai pellet Key words：Tongsaimai pellet;HPLC/MS;chemical constituents 通塞脉微丸是以黄芪
6、、当归、金银花、玄参、石斛、甘草等6味为药材精制而成的复方制剂，具有清热养阴、活血化瘀的功效，用于血栓闭塞性脉管炎、静脉血栓形成、动脉硬化性闭塞症、脑血栓形成及其后遗症等。 本文采纳高效液相色谱梯度洗脱、串联二极管阵列检测器、ESI负离子模式质谱检测，依据ESI-MS获得的准分子离子的分子量信息，结合紫外光谱、HPLC的保留时间以及参考文献报道共推想出13个化学成分的可能结构，为进一步阐明通塞脉微丸的药效物质基础供应有力的证据。与传统的紫外检测器(UVD)、电化学检测器(ECD)、激光诱导荧光检测器(LIFD)等相比，质谱检测器(MSD)具有信息量更丰富、应用范围更广等优势，目前在中药分析中得
7、到了广泛的认可和越来越多的应用1-2。 1 仪器与试剂 1.1 仪器 Agilent1100LCMS系统含在线真空脱气机，高压二元梯度泵，恒温自动进样器，柱温箱，二级管阵列检测器(DAD)、电喷雾(ES)接口，HPChemstation色谱工作站。 1.2 试剂和样品 乙腈：色谱纯；水：双蒸水；磷酸：分析纯；通塞脉微丸由南京中医药高校药业股份有限公司供应。 1.3 方法与结果 1.3.1 样品的制备 精密称取通塞脉微丸0.5g，加入50%甲醇20mL超声提取30min，滤过，定容至25mL。 1.3.2 色谱条件 色谱柱：Zorbax SB C18(4.6mm150mm，5m)；检测波长：36
8、0nm；进样量：5L。流淌相：A：乙腈，B：1%醋酸；流速：1mL/min；梯度洗脱程序见表1。 1.3.3 质谱条件3柱后分流0.4 mL•min-1进质谱仪，ESI源，毛细管电压；4000；检测方式：ESI(+/-)；扫描范围：1001000；干燥气流速；10mL/min；雾化室压：40psi；传输电压：70V。进样量：20L。 1.3.4试验结果 （1）以乙腈-1%醋酸水溶液为流淌相进行线性梯度洗脱可得到较好的高效液相色谱分别效果，见图1。由于通塞脉微丸中主要的化学成分是三萜皂苷、黄酮和酚酸类等化合物，其分子中的羟基很简单形成稳定的氧负离子，所以用负离子电喷雾电离源作质谱检测
9、所得总离子流图有较好的信噪比，而LC/ ESI (+)/MS的结果作为参考。其ESI (+)和ESI (-)的HPLC/MS总离子流图(TIC)分别见图2和图3。 （2）对通塞脉微丸中的化学成分采纳HPLC-MS分析技术，参考相关文献4-5，推断出13种可能的化合物，其中绿原酸、甘草苷、木犀草素、异甘草素已从通塞脉微丸中分别得到，见图4。13种化合物的ESI-MS图谱见图5 17。分析结果见表2。 本试验对通塞脉微丸进行了HPLC-MS分析，鉴定出13种微丸中可能含有的化学成分。其中绿原酸、甘草苷、木犀草素、异甘草素已从通塞脉微丸中分别得到，其他成分则有待多级质谱（MS/MS）联用所供应的结构
10、信息或与标准品比照后进一步加以确认。 通塞脉微丸HPLC指纹图谱及通塞脉微丸和中药材指纹图谱的相关性探讨表明，组方药材甘草、金银花对通塞脉微丸的贡献较大，这也与本试验的分析结果相吻合。 中药指纹图谱是中药质量标准化探讨的热点，以液相色谱-紫外检测器做指纹图谱探讨是较为成熟和被广泛接受的方法。以HPLC-MS做中药指纹图谱探讨具有应用范围广、信息量丰富、所得总离子流色谱图特征性强等优势，但在方法的重现性等方面不如液相色谱-紫外检测，但其对中药，尤其是中药复方制剂这样具有困难混合物的分析具有独到的优势，信任，LC/DAD/MS联用和多维分别检测技术将在中药成分的快速、微量、高效、自动分析中发挥日益
11、重要的作用。 参考文献 1 王颖，盛龙生，楼凤昌.银杏内酯提取物中微量成分的LC/DAD/ESI/MS分析及结构鉴定J.药学学报，2001，36（8）：606. 2 卢定强，欧阳平凯，陈钧.银杏叶中银杏萜内酯的高效液相色谱-电喷雾电离-质谱分析J.药物分析杂志，2002，22（1）：9. 3 张尊建，李茜，余静，等.脉络宁注射液HPLC/UV/MS指纹图谱探讨J.中成药，2004，26（3）：175. 4 邢国秀，李楠，王童，等.甘草中黄酮类化学成分的探讨进展J.中国中药杂志，2003，28（7）：593. 5 周燕，王明奎，廖循，等.甘草化学成分的高效液相色谱-串联质谱分析J.分析化学，2004，32（2）：174.