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1、金沙叶的药用分析 金沙叶功效 R544.1 A1672-3873（2011）03-0341-01 目的筛选金沙叶抗菌活性部位的最佳分别工艺。方法以没食子酸为检测指标，采纳HPLC测定没食子酸的含量，对金沙叶的提取分别工艺进行探讨。 金沙叶 药用 分析 金沙叶又名假包叶、艾桐、老虎麻，原植物为大戟科金沙叶属植物金沙叶Discocleidion rufescens (Franch.) Pax et Hoffm.，主产于陕西、甘肃、湖北、湖南、川贵等地。民间以根皮入药，具有清热解毒、泄水消积的功效，用于治疗水肿、食积、毒疮、鹅掌风等症。在对其化学成分探讨中发觉，该植物中含有的结构类型包括黄酮类、有机
2、酸类、三萜类和蒽醌类化合物等，其中，没食子酸的含量较高，且该化合物具有抗菌、杀锥虫、抗肿瘤、清除自由基和抗氧化等药理活性。故本探讨以没食子酸含量作为指标，对金沙叶叶中的抗菌活性成分的提取工艺进行初步探讨和探讨。 一、方法与结果 1 、含量测定 1） 色谱条件色谱柱为Dikma Diamonsil C18柱(4.6 mm250 mm，5 m)，流淌相为甲醇-0.1%磷酸水溶液(595)，检测波长为269 nm;流速为1.0 ml•min-1;柱温为25。 2）比照品储备液的制备 精密称取没食子酸比照品21.8 mg，置于50ml的容量瓶中，用甲醇配成浓度为0.436 mg•
3、;ml-1的比照品储备液，备用。 3） 供试品溶液制备取干燥金沙叶叶粗粉1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入蒸馏水20 ml，50下温浸提取8 h，放冷，摇匀，滤过，精密吸取续滤液5 ml至蒸发皿中，蒸干，残渣用甲醇转移并定容至5 ml容量瓶内，摇匀，经0.45 m微孔滤膜过滤，即得供试品溶液。 4） 标准曲线及线性关系考察 精密吸取比照品储备液0.10，0.80，1.60，2.50，3.75，5.00ml，分别置10 ml量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，分别精密吸取上述溶液各10 l，注入高效液相色谱仪，测定峰面积，以没食子酸比照品浓度(mg•ml-1)为横坐标，峰面积积分
4、值为纵坐标，绘制标准曲线，回来方程为Y=3 107X + 508 65(r =0.999 6)，表明没食子酸的浓度在0.0040.218 0 mg•ml-1与峰面积呈良好的线性关系。 5） 精密度试验 精密吸取上述“4）”项浓度为0.109 0 mg•ml-1的比照品溶液，重复进样5次，10 l/次，平均峰面积为386 573，RSD为0.44%，说明仪器精密度良好。 6） 重复性试验 取同批号的金沙叶叶样品5份，依法制备供试品溶液，按拟定的色谱条件进行测定，并按外标法计算，结果测定没食子酸的平均含量为0.427%，RSD为2.17%。 2 、提取工艺首先对提取溶剂和提
5、取方法进行了筛选，并在此基础上采纳正交法对提取工艺进行优选。选取5个对提取率影响较大的因素(粉碎度、液料比、温度、时间和次数)、每个因素选择3个水平进行考察，按L18(37)表支配试验，以没食子酸的含量为试验指标，筛选抗菌部位的最佳提取工艺。 1） 提取溶剂的选择取1 g金沙叶粗粉3份，精密称定，分别置100 ml圆底烧瓶中，各加入蒸馏水、95%乙醇、70%酸性乙醇(用盐酸调pH值为2) 30 ml，置水浴锅中回流提取2 h，提取1次。提取完毕，过滤，精密吸取续滤液5 ml置蒸发皿中，在80水浴中蒸干，用甲醇溶解残余物，转移并定容至5 ml容量瓶中，经微孔滤膜过滤后，按“1、”项下含量测定方法
6、测定其含量，并按以下公式计算没食子酸的产率。 2）提取方法的选择取1g金沙叶粗粉3份，精密称定，置100 ml圆底烧瓶中，依次加入蒸馏水30 ml，分别采纳冷浸法(常温)、温浸法(40)、煎煮法提取，提取时间均为2 h，提取1次。提取完毕，过滤，精密吸取各续滤液5 ml置蒸发皿中，在80水浴中蒸干，用甲醇溶解残余物，转移并定容至5 ml容量瓶中，经微孔滤膜过滤后，按“1、”项下含量测定方法测定其含量，并按“1）”项下公式计算没食子酸的产率(%)。 3）正交试验依据数次预试结果，采纳温浸法(4060)，以水作为溶剂提取金沙叶叶中的抗菌活性部位。为了进一步优选最佳的提取工艺，采纳正交试验L18(3
7、7)设计支配试验，以没食子酸的产率为指标，详细考察药材粉碎度、液料比(gml)、温浸温度、时间及次数5个因素，每个因素选3个水平。 试验结果分析可以看出，在试验考察范围内，各因素对没食子酸含量的影响程度大小次序为：DECAB。提取时间对提取液中没食子酸产率影响最大，液料比对产率的影响最小。从正交试验方差分析可以看出，在试验考察范围内，仅提取时间因素各水平间具有显著性差异。结合实际操作，最终确定以没食子酸为指标的抗菌部位提取的最佳工艺条件是A2B1C2D3E1，即以水作为溶剂，采纳温浸法提取，原料粉碎度为中粉，液料比为201，提取温度为50，提取时间8 h，提取1次。 4）提取物抗菌作用验证采纳
8、扩散法对所得提取物的体外抗菌活性进行检测。以金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌作为供试菌，用打孔器将定量滤纸制成直径6 mm的圆形小纸片，经高压灭菌处理，37烘干后，备用。采纳划线法将供试菌株密集接种于养分琼脂平板，取一张滤纸片蘸取样本，紧贴于已接种过供试菌的平板表面，做好标记。置4下作用12 h，于37，48 h培育后测定抑菌环直径。结果显示，该提取物的抑菌环直径均在810 mm之间，具有肯定的体外抗菌活性。 二、探讨 有文献报道用酸醇提取药材中的多酚类物质，故我们也将这种方法列入至提取溶剂的考察中。结果发觉，酸水提取液中的没食子酸含量较低，表明没食子酸在酸性条件下不稳定，不宜在酸性条件下提取。试验同时也考察了碱性条件下没食子酸的稳定性，取浓度为0.126 7 mg•ml-1的没食子酸比照品甲醇溶液，用4%NaOH调pH为12，密塞后于60下静置0.5 h，测定静置前后没食子酸的含量，结果显示静置后无法测出没食子酸的色谱峰，说明没食子酸在碱性下不稳定，不宜在碱性条件下提取。 在预试和正交试验的基础上，我们初步筛选出金沙叶中抗菌活性部位的提取工艺，通过体外抗菌试验验证，证明其具有肯定的抑菌活性。该方法简便可行，可用于工业生产。 注：本文中所涉及到的图表、注解、公式等内容请以PDF格式阅读原文