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1、阿托伐他汀对肾血管性高血压大鼠心肌纤维化及表达的影响_阿托伐他汀钙片 摘要：目的 探讨阿托伐他汀对肾性高血压大鼠心肌纤维化以及结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响。方法 建立肾性高血压大鼠模型，将试验大鼠24只随机分为3组，每组8只，比照组、高血压组、阿托伐他汀组。术后4周末起先用阿托伐他汀50mg/(ksd)连续灌胃8周。测量大鼠尾动脉收缩压，检测心肌胶原浓度、心肌总胶原容积分数(tCVF)以及免疫组化检测心肌CTGF的表达。结果 高血压组尾动脉收缩压、心肌羟脯氨酸含量、tCVF以及CTGF的表达显著高于比照组(P0.01)；阿托伐他汀组大鼠的心肌羟脯氨酸含量、tCVF和CTGF的表达低于
2、高血压组(P0.01)。结论 阿托伐他汀具有抑制心肌纤维化的作用，其机制可能与下调CTGF的表达有关。 关键词：肾性高血压大鼠；阿托伐他汀；心肌纤维化；结缔组织生长因子 中图分类号：R544.1R255.3文献标识码：A文章编号：1672-1349(2007)12-1218-02 心肌纤维化是高血压常见的严峻并发症，其主要的病理变更为细胞外基质(extracellular matrix，ECM)的大量聚集，心脏中ECM含量最多的是胶原，发生纤维化时胶原过度沉积，各型胶原含量增加、比例失调、空间位置重新排列，进而影响心脏舒缩功能，最终导致心力衰竭的发生。本试验旨在视察阿托伐他汀对肾血管性高血压大
3、鼠心肌纤维化的抑制作用，并探讨其相关机制，为心肌纤维化的预防和治疗供应新的思路和手段。 1 材料与方法 11 动物造模及分组 采纳二肾一夹(2K1C)经典造模法建立肾血管性高血压大鼠模型。健康雄性Wistar大鼠24只，体重180g230g，由山西医科高校生理教研室供应。按随机法将24只大鼠随机分为高血压组、阿托伐他汀组、比照组，每组8只。用10的水合氯醛0.3mL/100g腹腔麻醉，开腹，用内径0.25mm的银夹钳夹高血压组和阿托伐他汀组大鼠左侧肾动脉使其部分狭窄，比照组处理方法相同但不上银夹。术后4周测尾动脉收缩压(SBP)高于150mmHg(1mmHg=0.133kPa)者为高血压模型制
4、备胜利。术后4周末阿托伐他汀组用蒸馏水(1mL)溶解的阿托伐他汀灌胃50mg/(10d)，高血压组和比照组则以等量的蒸馏水灌胃，连续灌胃8周后处死。 12 检测指标及方法 121 收缩压测定 大鼠于40预热15min20min后用RBP l型大鼠尾压心率测定仪(中日友好，临床医学探讨所研制)测量大鼠醒悟状态下尾动脉收缩压。 122 心肌胶原浓度(collagen concentration，Coll) 心脏内的胶原浓度通过测定羟脯氨酸含量表，纤维性胶原平均含13.4的羟脯氨酸。通过样本碱水解法测定羟脯氨酸含量(试剂盒购自南京建成生物工程公司)，然后乘以羟脯氨酸含量系数7.46，算出胶原浓度。
5、123 胶原形态定性及定量分析 取左室中段横截面心肌组织，按常规固定，制片(4m)后，行胶原特异性染色VG染色。在VG染色下，心肌细胞、红细胞呈黄色，胶原呈红色。应用HPlAS-2000型图像分析系统，通过灰度调整来区分胶原与非胶原，测量心肌总胶原容积分数(total,collagenvolumefraction，t-CVF)。 124CTGF免疫组化染色(PV法) 免疫组化图像分析经标准灰度校正后，以平均灰度值表示CTGF含量，平均灰度值越低表示CTGF含量越高。 13 统计学处理 用SPSS11.5进行统计学分析，全部数据以均数上标准差(xs)表示，采纳单因素方差分析和SNK-检验，P0.
6、05为差异有统计学意义。 2 结 果 21 各组大鼠血压状况 3组大鼠手术前体重和基础血压差异无统计学意义。12周试验结束后时，比照组血压为(112.389.96)millHg较术前无明显改变，高血压组大鼠的收缩压为(178.7816.87)mmHg显著高于比照组(P0.01)；阿托伐他汀组赐予阿托伐他汀钙治疗后，血压略有下降为(165.5017.98)mmHg，且与高血压组相比差异无统计学意义(P0.05)。 22 心肌纤维化程度 t-CVF高血压组的心脏间质和血管四周胶原显著增加，并可见瘢痕灶，肌间隙中胶原增多，在VG染色下心肌细胞、红细胞呈黄色，胶原呈红色。分析显示高血压组与比照组比较，
7、t-CVF显著增高(P0.01)，阿托伐他汀组较高血压组心脏间质和血管四周胶原均削减，未见明显瘢痕灶，其t-CVF降低(P0.01)，表明阿托伐他汀抑制了心肌纤维化的发展。心肌胶原浓度，高血压组与比照组比较，胶原浓度显著上升(P0.01)，阿托伐他汀组和高血压组比较胶原浓度降低(P0.01)。详见表1。 23 心肌组织CTGF表达的改变 比照组间质仅少量CFGF表达，高血压组大鼠心肌组织中CTGF表达较比照组上调(P0.01)，主要表现为间质中棕黄色阳性细胞表达增加。在阿托伐他汀治疗8周后，心肌组织中CTGF表达较高血压组下降(P0.01)。详见表1。 3 讨 论 高血压作为一种常见病多发病可
8、引起全身大、中动脉粥样硬化，小动脉管壁增厚、管腔狭窄以及重要脏器如心、脑、肾的损害，对人民健康威逼极大。血压增高时心脏压力负荷增加、儿茶酚胺与血管惊慌素(Ang)等生长因子都可刺激心肌细胞肥大间质纤维化引起心室重构，最终可导致心力衰竭，危及生命。致心肌纤维化的相关机制甚多，其中肾素血管惊慌素醛固酮系统(reininangiotensinaldostemne system，RAAS)扮演了关键角色，该系统的激活可使循环和心肌局部的Ang浓度增加，进而通过释放、激活一系列细胞因子如转化生长因子-(tGF-)、CTGF等，引起细胞外基质(extracellular matrix，ECM)的大量增生和
9、过度积聚，导致心肌纤维化进而影响心脏舒缩功能，最终诱发心力衰竭。本试验结果显示术后8周心肌间质及血管四周胶原增多，总胶原容积分数上升，生化测定亦显示心肌内胶原含量增加。并发觉肾血管性高血压大鼠心肌纤维化组织中CTGF蛋白表达明显上调，与相关探讨结果一样，表明白高血压致心肌纤维化的准确效应，同时也说明CTGF是肾血管性高血压大鼠心肌纤维化过程中的重要细胞因子，它在心肌组织中表达的凹凸可以反映心肌纤维化的程度。在转基因鼠(携带人类肾素及血管惊慌素原基因)的探讨中，Finckenberg等发觉CTGF表达水平的增高伴有TGF-1及I型、型胶原基因表达增高，并发觉Ang所致的高血压可调整CTGF的表达
10、。Kishikawa等发觉低静态压力通过蛋白激酶C途径刺激细胞增殖，而高静态压力通过上调人系膜细胞CTGF的蛋白及表达，增加ECM的合成，这说明高血压可能通过UTGF途径影响脏器纤维化，提示CTGF与高血压的靶器官损害有肯定关系。 CTGF是高度保守的即刻早期基因CNN家族成员之一，分子量为36kD38 kD，其编码的蛋白具明显的丝裂原性和趋化性，可诱导成纤维细胞增殖和分泌细胞外基质，参加调整细胞增生、分化，胚胎发育以及伤口愈合，它与动脉粥样硬化、肝、肺、肾、心等器官纤维化疾病以及创伤修复亲密相关。探讨表明作为致纤维化的重要因子TGF-的下游介质CTGF可能仅介导TGF-的部分生物学效应，主要
11、是在刺激细胞增生和ECM合成，即促进组织器官纤维化方面起重要作用,是一个更具特异性的治疗靶位，开发能抑制CTGF产生和激活的药物，将可能是逆转心肌纤维化的新途径。在本试验对各组大鼠进行了t-CVF、胶原含量的测定，以明确阿托伐他汀对心肌纤维化的治疗作用，结果发觉肾血管性高血压大鼠经阿托伐他汀治疗后，心肌纤维化程度减轻的同时心脏内CTGF表达也明显下调。 他汀类药物显著的心血管爱护作用除得益于其强大的降脂效应外，更与其作用的多效性有关，辛伐他汀可抑制血管惊慌素和去甲肾上腺素诱导的新生鼠心肌细胞生长。在主动脉狭窄和转基因肥厚性心肌病动物模型中，辛伐他汀逆转心肌肥厚和纤维化。西立伐他汀和氟伐他汀亦具有同样的抗心肌纤维化效应。他汀类药物改善左室舒张功能、逆转心肌纤维化可能与降低TGF-等致纤维化因子的浓度有关但详细机制尚未明确。 本试验表明高血压有准确的致心肌纤维化效应,CTGF在此过程中表达上调，可能参加了高血压致心肌纤维化的过程。阿托伐他汀可改善心肌纤维化的程度，其详细机制尚不明确可能与其使CTGF表达下调有关。 作者简介：武新民，现工作于山西医科高校第一医院(邮编：030001)；李茹香(通讯作者)，工作于山西医科高校第一医院。 (本文编辑 王雅洁)