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1、第二章抗体检测第二章抗体检测第1页，共39页，编辑于2022年，星期二n n本章规定了HIV抗体的检测方法、程序、结果报告、检测策略及质量控制。适用于各级各类医疗机构、疾病预防控制机构、检验检疫机构、采供血机构及卫生保健机构。可作为对HIV感染者诊断和监测的实验室依据。1 范围第2页，共39页，编辑于2022年，星期二2 规范性引用文件n n艾滋病和艾滋病病毒感染诊断标准艾滋病和艾滋病病毒感染诊断标准（中华人民共和国卫生行业标准，（中华人民共和国卫生行业标准，WS293-2008WS293-2008）n nGuidance for HIV testing in the Western Paci
2、fic Region.WHO Draft 19 July 2008.Guidance for HIV testing in the Western Pacific Region.WHO Draft 19 July 2008.n nStatementStatement from the Surveillance and Survey Working Group and the Laboratory Working from the Surveillance and Survey Working Group and the Laboratory Working Group to the Offic
3、e of the Global AIDS Coordinator.26 Nov.2006.Group to the Office of the Global AIDS Coordinator.26 Nov.2006.n nGuidelines for the use of the BED assay for incidence estimation and surveillance in Guidelines for the use of the BED assay for incidence estimation and surveillance in resource-limited co
4、untries.Atlanta,5 June 2006.resource-limited countries.Atlanta,5 June 2006.n nRevised Guidelines for HIV Counseling,Testing,and Referral.U.S.CDC 2001.Revised Guidelines for HIV Counseling,Testing,and Referral.U.S.CDC 2001.n nCurrent HIV-2 diagnostic strategy overestimates HIV-2 prevalence in China.J
5、ournal of Current HIV-2 diagnostic strategy overestimates HIV-2 prevalence in China.Journal of Medical Virology,2009,81:790-797.Medical Virology,2009,81:790-797.第3页，共39页，编辑于2022年，星期二3 HIV抗体检测实验室要求n n应符合全国艾滋病检测工作管理办法（2006）中对实验室人员、建筑设施和设备等条件的要求。n n实验室的质量保证和实验室安全防护按本规范相关章节规定执行。第4页，共39页，编辑于2022年，星期二4.1
6、HIV抗体检测的目的n n4.1.1 HIV抗体检测可用于诊断、血液筛查、监测等。n n4.1.2 以诊断为目的的检测是为了确定个体以诊断为目的的检测是为了确定个体HIVHIV感染状况，感染状况，包括临床检测、自愿咨询检测、根据特殊需要进行的体包括临床检测、自愿咨询检测、根据特殊需要进行的体检等。检等。n n4.1.3 4.1.3 以血液筛查为目的的检测是为了防止输血传播以血液筛查为目的的检测是为了防止输血传播HIV，包括献血员筛查和原料血浆筛查。n n4.1.4 4.1.4 以监测为目的的检测是为了解不同人群以监测为目的的检测是为了解不同人群HIVHIV感染率及其变化趋势，包括各类高危人群、
7、重点人群和一般人群。第5页，共39页，编辑于2022年，星期二4.2 HIV抗体检测的要点n n4.2.1 根据目的选择检测方法及检测策略。n n4.2.2 严格遵守实验室SOP。n n4.2.3 筛查试验阳性，须作确证试验。n n4.2.4 筛查试验阴性，不应做确证试验。n n4.2.5 筛查及确证试验阳性均应做好咨询工作。第6页，共39页，编辑于2022年，星期二检测策略n n5.以诊断为目的的检测策略以诊断为目的的检测策略 n n6.以监测为目的的检测策略 n n7.以血液筛查为目的的检测策略 第7页，共39页，编辑于2022年，星期二5.以诊断为目的的检测策略n n5.1 5.1 常规
8、常规HIVHIV抗体检测的方法和程序抗体检测的方法和程序n nHIVHIV抗体检测分为筛查试验（包括初筛和复检）和确证试验。抗体检测分为筛查试验（包括初筛和复检）和确证试验。n n5.1.1 5.1.1 筛查试验筛查试验n n5.1.1.1 5.1.1.1 筛查试剂筛查试剂n n必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、在有效期内的试剂，必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、在有效期内的试剂，其中酶联免疫试剂应批批检合格。推荐使用临床质量评估敏感性和其中酶联免疫试剂应批批检合格。推荐使用临床质量评估敏感性和特异性高的试剂。特异性高的试剂。n n5.1.1.2 5.1.1.2 筛查样品筛查样品n
9、 nHIVHIV抗体筛查可采用血清、血浆、滤纸干血斑、唾液和尿液抗体筛查可采用血清、血浆、滤纸干血斑、唾液和尿液样品。样品。第8页，共39页，编辑于2022年，星期二n n5.1.1.3 筛查方法n n（1）酶联免疫吸附试验（ELISA）n n可使用血液、唾液、尿液样品n n包括单纯检测HIV抗体的第三代和可同时检测血液中HIV-1p24抗原和HIV-1/2抗体的第四代试剂n n有效试验的阴性和阳性对照必须符合试剂盒规定。5.以诊断为目的的检测策略第9页，共39页，编辑于2022年，星期二n n（2）化学发光或免疫荧光试验n n采用发光或荧光底物n n既可检测抗体，也可联合检测抗原抗体n n用
10、发光或荧光仪测定结果n n有效试验的阴性和阳性对照必须符合试剂盒规定。5.以诊断为目的的检测策略第10页，共39页，编辑于2022年，星期二n n（3）快速检测（RT）及其它检测试验n n这类试验简便快速，适用于应急检测、门诊急诊检测。一般可在1030分钟内得出结果n n明胶颗粒凝集试验（PA）n n免疫渗滤试验，免疫层析试验n n有效试验的质控带必须显色5.以诊断为目的的检测策略第11页，共39页，编辑于2022年，星期二n n5.1.1.4 筛查程序n n（1）初筛试验n n根据检测目的选用符合要求的筛查试剂对样品进行初筛检测，对呈阴性反应的样品，可出具HIV抗体阴性（-）报告；对呈阳性反
11、应的样品，需要进一步做复检试验5.以诊断为目的的检测策略第12页，共39页，编辑于2022年，星期二n n（2 2）复检试验）复检试验n n对初筛呈阳性反应的样品，应使用原有试剂和另外一种不同对初筛呈阳性反应的样品，应使用原有试剂和另外一种不同原理（或厂家）的试剂，或另外两种不同原理或不同厂家的原理（或厂家）的试剂，或另外两种不同原理或不同厂家的试剂进行复检试验。如果初筛检测使用抗原抗体联合试剂，试剂进行复检试验。如果初筛检测使用抗原抗体联合试剂，则复检必须包括一种抗原抗体联合试剂。则复检必须包括一种抗原抗体联合试剂。n n如两种试剂复检均呈阴性反应，则报告如两种试剂复检均呈阴性反应，则报告H
12、IVHIV抗体阴性（抗体阴性（-）；如）；如均呈阳性反应，或一阴一阳，需送艾滋病确证实验室进行确均呈阳性反应，或一阴一阳，需送艾滋病确证实验室进行确证试验（图证试验（图1 1）。如果抗原抗体联合试剂检测呈阳性反应，）。如果抗原抗体联合试剂检测呈阳性反应，而抗体试剂检测为阴性反应，则应考虑进行而抗体试剂检测为阴性反应，则应考虑进行HIV-1 p24HIV-1 p24抗原或抗原或核酸检测，必要时进行随访。核酸检测，必要时进行随访。n n艾滋病检测筛查实验室复检判定为阳性反应的样品，确证实验室可艾滋病检测筛查实验室复检判定为阳性反应的样品，确证实验室可以直接进行确证试验。以直接进行确证试验。5.以诊
13、断为目的的检测策略第13页，共39页，编辑于2022年，星期二HIV抗体筛查检测流程样本样本阳性反应阳性反应一阴一阳一阴一阳阴性反应阴性反应初筛试验初筛试验均阳性反应均阳性反应复检试验复检试验均阴性反应均阴性反应送确证实验室进行确认检测送确证实验室进行确认检测报告阴性报告阴性筛查试剂筛查试剂原有试剂和另一种不同原理原有试剂和另一种不同原理（或厂家）的试剂（或厂家）的试剂或另外两种不同原理或另外两种不同原理（或厂家）的试剂（或厂家）的试剂 第14页，共39页，编辑于2022年，星期二n n（4）筛查试验结果的报告n nHIV抗体筛查试验用附表1进行报告，阴性反应报告为“HIV抗体阴性（-）”；阳
14、性反应报告为“HIV抗体待复检”。n n（5）筛查试验呈阳性反应样品的转送n n如需送上级实验室进行复检或确证检测，需要详细填写“HIV抗体复检检测单”和“高致病性病原微生物菌(毒)种或样本准运证书5.以诊断为目的的检测策略第15页，共39页，编辑于2022年，星期二n n5.1.2 确证试验n n5.1.2.1 5.1.2.1 确证试剂n n必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、在有效期内的试剂。n n5.1.2.2 5.1.2.2 确证样品n n可采用血清、血浆、滤纸干血斑样品。可采用血清、血浆、滤纸干血斑样品。n n5.1.2.3 5.1.2.3 确证方法n n包括免疫印迹试验（WB）
15、、条带免疫试验、放射免疫）、条带免疫试验、放射免疫沉淀试验（沉淀试验（RIPARIPA）及免疫荧光试验（IFAIFA）等。）等。5.以诊断为目的的检测策略第16页，共39页，编辑于2022年，星期二n n5.1.2.4 确证流程n n使用HIV-1/2混合型试剂进行检测n n如果呈阳性反应，则报告HIV-1抗体阳性（）n n如果呈阴性反应，则报告HIV抗体阴性（）n n如果不是阴性反应，但又不满足阳性判断标准，则报告HIV抗体不确定（）5.以诊断为目的的检测策略第17页，共39页，编辑于2022年，星期二n n对对HIVHIV抗体不确定（抗体不确定（）结果的处理）结果的处理n n4周后随访检测
16、n n如带型没有进展或呈阴性反应，则报告阴性如带型没有进展或呈阴性反应，则报告阴性n n如出现阳性反应，则报告阳性如出现阳性反应，则报告阳性n n如带型有进展，但不满足阳性标准，应继续随访到如带型有进展，但不满足阳性标准，应继续随访到8 8周周n n8周后随访检测n n如带型没有进展或呈阴性反应则报告阴性如带型没有进展或呈阴性反应则报告阴性n n随访期间可根据需要，检测病毒核酸或随访期间可根据需要，检测病毒核酸或p24p24抗原作为抗原作为辅助诊断辅助诊断n n如果出现HIV-2型的特异性指示条带，根据实际情况需用HIV-2型免疫印迹试剂再做HIV-2的抗体确证试验或HIV-2核酸检测态n n
17、疑难样品送国家艾滋病参比实验室进一步分析5.以诊断为目的的检测策略第18页，共39页，编辑于2022年，星期二n n5.1.2.6 HIV5.1.2.6 HIV抗体确证试验结果报告抗体确证试验结果报告n nHIVHIV抗体确证试验结果用附表3 3报告n n符合符合HIV-1抗体阳性判断标准，报告抗体阳性判断标准，报告“HIV-1HIV-1抗体阳性抗体阳性（）（）”，符合，符合HIV-2HIV-2抗体阳性判断标准，报告“HIV-2抗体阳性（）抗体阳性（）”。n n符合符合HIVHIV抗体阴性判断标准，报告抗体阴性判断标准，报告“HIV抗体阴性（）抗体阴性（）”。如怀疑。如怀疑“窗口期”感染，建议
18、进一步做感染，建议进一步做HIV核酸检测，尽早明确诊断。n n符合符合HIV抗体不确定判断标准，报告“HIVHIV抗体不确定（）”，在备注中应注明“4周后复检”。n n5.1.2.7 5.1.2.7 发出确证报告的同时要做好检测后咨询5.以诊断为目的的检测策略第19页，共39页，编辑于2022年，星期二n n5.1.2.8 HIV抗体确证报告由检测者，复核人员和签发人抗体确证报告由检测者，复核人员和签发人员签字后，按原送检程序反馈一式三份（确证实验室一员签字后，按原送检程序反馈一式三份（确证实验室一份、送检单位一份、患者一份）。如确证对象户口不属份、送检单位一份、患者一份）。如确证对象户口不属
19、于本辖区，确证报告应同时抄送感染者户口所在地的省于本辖区，确证报告应同时抄送感染者户口所在地的省艾滋病确证中心实验室。其它系统确证的地方人员，也艾滋病确证中心实验室。其它系统确证的地方人员，也应及时向当地卫生行政部门和省艾滋病确证中心实验室应及时向当地卫生行政部门和省艾滋病确证中心实验室报告。报告。n n5.1.2.9 省艾滋病确证中心实验室难以确证的样品，送国家艾滋病参比实验室确证。同一受检对象的样品在不同实验室得到不一致的确证结果时，由国家艾滋病参比实验室予以仲裁。5.以诊断为目的的检测策略第20页，共39页，编辑于2022年，星期二n n5.2 其它其它HIVHIV抗体检测的方法和程序n
20、 n5.2.1 VCT5.2.1 VCT替代检测策略n n除上述常规检测程序以外，对除上述常规检测程序以外，对HIVHIV高流行地区高危人群的VCT检测，可采用替代策略。n n5.2.1.1 5.2.1.1 使用要求使用要求n n使用替代策略，应在确证中心实验室和确证实验室或以上使用替代策略，应在确证中心实验室和确证实验室或以上实验室指定的筛查实验室进行，用临床试剂质量评估敏感实验室指定的筛查实验室进行，用临床试剂质量评估敏感性和特异性高的筛查试剂检测。使用该策略判断结果，阳性和特异性高的筛查试剂检测。使用该策略判断结果，阳性报告须由确证中心实验室和确证实验室或以上实验室认性报告须由确证中心实
21、验室和确证实验室或以上实验室认可的筛查实验室出具。可的筛查实验室出具。5.以诊断为目的的检测策略第21页，共39页，编辑于2022年，星期二n n5.2.2 HIV感染产妇所生儿童HIV抗体检测策略及流程 n n5.2.2.1 适用范围n nHIV感染产妇所生婴幼儿n n已满18个月的婴幼儿，其母亲HIV感染状态不详，儿童出现HIV相关临床表现，临床怀疑HIV感染的儿童。5.以诊断为目的的检测策略第22页，共39页，编辑于2022年，星期二n n5.2.3 HIV-1新近感染检测n nHIV常规抗体检测方法可以判定感染和未感染状态，新近感染检测方法则用于识别近期感染与既往感染 5.以诊断为目的
22、的检测策略第23页，共39页，编辑于2022年，星期二检测策略n n5.以诊断为目的的检测策略 n n6.以监测为目的的检测策略以监测为目的的检测策略 n n7.以血液筛查为目的的检测策略以血液筛查为目的的检测策略 第24页，共39页，编辑于2022年，星期二n n各级艾滋病检测实验室所在机构每月应填写HIV抗体检测数及阳性人数统计报表（附表6），并于每月10日前完成网络直报。未开展网络直报的单位，由县级疾病预防控制机构收集信息后统一上报。8.艾滋病检测实验室检测信息上报第25页，共39页，编辑于2022年，星期二9.质量控制 抗体检测的统计学室内质量控制抗体检测的统计学室内质量控制试剂盒内部
23、对照n n为试剂盒内提供的阳性和阴性对照血清,用用于判断每次实验的有效性，但不能作为室内于判断每次实验的有效性，但不能作为室内质控品使用质控品使用n n每一次检测临床样品时，必须有试剂盒内部对照，而且只能在同批号的试剂盒中使用。内部对照结果无效，必须重新试验第26页，共39页，编辑于2022年，星期二室内质控品(外部对照，外部质控品)n n非试剂盒组份的外部质控品，包括强阳性、弱阳性和阴非试剂盒组份的外部质控品，包括强阳性、弱阳性和阴性质控血清，可以监控检测的重复性性质控血清，可以监控检测的重复性n n日常检测中可以只设置一个弱阳性质控，以该试剂盒临界值日常检测中可以只设置一个弱阳性质控，以该
24、试剂盒临界值（Cut-offCut-off）的）的2 23 3倍为宜倍为宜(S/Co(S/Co值值=2=23 3）n n外部质控品的作用是，判断该批临床样品检测的有效性，外部质控品的作用是，判断该批临床样品检测的有效性，因此，每次实验必须包含室内质控品，其结果无效，必因此，每次实验必须包含室内质控品，其结果无效，必须重新试验须重新试验n n室内质控品可以是商品或实验室自行制备室内质控品可以是商品或实验室自行制备质量控制 第27页，共39页，编辑于2022年，星期二室内质控品的使用和质量要求n n每一次实验必须使用室内质控品，以便监控实验的重复性每一次实验必须使用室内质控品，以便监控实验的重复性
25、n n同时可以了解各批试剂盒的批间或孔间差异同时可以了解各批试剂盒的批间或孔间差异n n室内质控品的管间或瓶间变异必须小于监测系统预期的变异（cvcv20%20%）n n质控品应稳定、无菌，且不含有影响试剂反应的防腐剂n n一般采用在不同批次检测取得至少20个数据后进行统个数据后进行统计绘图计绘图质量控制 第28页，共39页，编辑于2022年，星期二=1.74 1s=1.49-1.99 =1.49-1.99 2s=1.24-2.24 =1.24-2.24 3s=0.99-2.49=0.99-2.49质控图第29页，共39页，编辑于2022年，星期二n外部对照S/CO值超出2 2s s，系统处于
26、告警告警状态，应予注意，是否可以继续检测需要进一步观察质控图的判定和分析-告警告警第30页，共39页，编辑于2022年，星期二质控图的判定和分析-失控失控n外部对照S/CO值超出3s，系统处于失控失控状态，本次实验结果不能被接受，需查找原因，重新检测第31页，共39页，编辑于2022年，星期二质控图的判定和分析-位移，位移，趋势趋势n连续几个（3-5次）质控对照值都落在均值的一侧称之为位移位移，提示试验条件发生了较大的变化，如使用新批号的试剂盒、使用新的质控品、实验员的更换、孵育温度的改变、仪器故障等n当连续几个（5-7个）质控对照值几乎按一个方向分布时称之为趋势趋势，通常由参数的缓慢改变引起
27、，如试剂失效和移液器逐渐不准确等第32页，共39页，编辑于2022年，星期二第33页，共39页，编辑于2022年，星期二9.1.3.4 质控图的分析及失控处理n n实验室应建立质控图分析及失控情况处理程序。当质控已有计划并恰当地执行时，要求可靠的均值和标准差用于计算质控限，将假失控概率降到最低。n n当出现失控时，对原有外部质控品重复测定或更换新的外部质控品进行测定不是最有效的方法，必须找出问题发生的原因，找出解除问题的方法，并消除原因，防止将来出现同样的问题。第34页，共39页，编辑于2022年，星期二n n出现一次出现一次2s范围的变化时，系统处于告警状态，应予注意，是否可以继续检测需要进
28、一步观察。n n出现下列情况时，应暂停检测查找原因：（1 1）出现一次超出）出现一次超出3s3s范围的变化；范围的变化；（2）连续两次出现同一方向超出）连续两次出现同一方向超出2s2s范围的变化；范围的变化；（3）连续四次出现同一方向的超出）连续四次出现同一方向的超出1s范围的变化；范围的变化；（4）连续）连续10次结果都在次结果都在1s1s范围内，但落在均值线的同一范围内，但落在均值线的同一侧。侧。9.1.3.4 质控图的分析及失控处理第35页，共39页，编辑于2022年，星期二绘制和分析质控图的要点n n（1 1）分析数据时，超出）分析数据时，超出2 2s s或或3 3s s的数据不应删除
29、。的数据不应删除。n n（2 2）由专人负责建立质控图，每月定期召开质控分析会，讨论本）由专人负责建立质控图，每月定期召开质控分析会，讨论本月的质量控制情况。月的质量控制情况。n n（3 3）建议长期和稳定地使用一种质量好的试剂，更换不同厂家）建议长期和稳定地使用一种质量好的试剂，更换不同厂家的试剂后，须重新绘制质控图。改用新批号试剂如外部质控品的试剂后，须重新绘制质控图。改用新批号试剂如外部质控品测定出现较大变化也应重新制作质控图。使用新批号或不同厂测定出现较大变化也应重新制作质控图。使用新批号或不同厂家的试剂家的试剂,必须在质控图上注明使用日期。必须在质控图上注明使用日期。n n（4 4）
30、发现质控结果失控，应填写报告单，上交质量负责人，分析原）发现质控结果失控，应填写报告单，上交质量负责人，分析原因并决定是否发出检测报告。因并决定是否发出检测报告。n n（5 5）使用新批次的外部质控品时，如测定值出现较大变化，须重）使用新批次的外部质控品时，如测定值出现较大变化，须重新绘制质控图。变异系数（新绘制质控图。变异系数（cv cv）小于）小于2020，表示外部质控品处于，表示外部质控品处于稳定状态。稳定状态。第36页，共39页，编辑于2022年，星期二即刻法质控n n在对同一批外部质控血清连续测定3次后，即可次后，即可对第三次检验结果进行质控对第三次检验结果进行质控n n即刻法只能在
31、前2020次内使用，超出即应采用次内使用，超出即应采用 L-JL-J质控图方法第37页，共39页，编辑于2022年，星期二SI值表n nn n3s3sn n2s2sn nn n3s3sn n2s2s3 31.161.161.151.1512122.552.552.292.294 41.491.491.461.4613132.612.612.332.335 51.751.751.671.6714142.662.662.372.376 61.941.941.821.8215152.712.712.412.417 72.102.101.941.9416162.752.752.442.448 82.2
32、22.222.032.0317172.792.792.472.479 92.322.322.112.1118182.822.822.502.5010102.412.412.182.1819192.852.852.532.5311112.482.482.232.2320202.882.882.562.56第38页，共39页，编辑于2022年，星期二抗体检测的快速检测质控n n试剂内对照试剂内对照n n在质控窗口内出现质控带，如实验完成后未呈现红色质控带，在质控窗口内出现质控带，如实验完成后未呈现红色质控带，说明试剂盒内质控无效，该试验结果无效，样品须重检。说明试剂盒内质控无效，该试验结果无效，样
33、品须重检。n n外部质控品对照外部质控品对照n n外部对照质控品，可采用商用质控品或自制质控品。质控品外部对照质控品，可采用商用质控品或自制质控品。质控品应包含抗体阳性样品和阴性样品。自制质控品可使用本室保应包含抗体阳性样品和阴性样品。自制质控品可使用本室保留的阳性样品。不能使用酶联试验的外部质控品。留的阳性样品。不能使用酶联试验的外部质控品。n n开展快速检测的确证实验室须参加中国开展快速检测的确证实验室须参加中国CDCCDC组织的检测能力验组织的检测能力验证，开展快速检测的筛查实验室及检测点须参加省级或地证，开展快速检测的筛查实验室及检测点须参加省级或地市级市级CDCCDC组织的实验室能力验证。组织的实验室能力验证。质量控制 第39页，共39页，编辑于2022年，星期二