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1、关于微生物的分离和纯关于微生物的分离和纯培养课件培养课件第一张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月七、微生物的保藏技术v菌种保藏的原理：菌种保藏的原理：v根据菌种特性及保藏目的的不同，给微生物根据菌种特性及保藏目的的不同，给微生物菌株以特定的条件，使其存活而得以延续。菌株以特定的条件，使其存活而得以延续。例如干燥、低温、缺氧、避光、缺乏营养等例如干燥、低温、缺氧、避光、缺乏营养等条件，使菌株的代谢水平降低，乃至完全停条件，使菌株的代谢水平降低，乃至完全停止，达到半休眠或完全休眠的状态。止，达到半休眠或完全休眠的状态。第二张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月v传代培养保藏传代培养保
2、藏v冷冻保藏冷冻保藏v干燥保藏干燥保藏v纸片保藏纸片保藏v薄膜保藏薄膜保藏v寄主保藏寄主保藏微生物菌株保藏的方法：微生物菌株保藏的方法：第三张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月传代保藏传代保藏斜面、半固体琼脂柱、液体斜面、半固体琼脂柱、液体传代培养保藏传代培养保藏斜面：斜面：可保存数周至数年，可用石蜡或橡皮塞封口，低可保存数周至数年，可用石蜡或橡皮塞封口，低 温延长保存时间温延长保存时间 液体：液体：菌苔制成菌悬液，低温（悬液保藏法）菌苔制成菌悬液，低温（悬液保藏法）缺点：繁琐、易污染、变异丧生原有特性缺点：繁琐、易污染、变异丧生原有特性第四张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月
3、冷冻保藏冷冻保藏液氮保藏、低温冰箱等液氮保藏、低温冰箱等 液氮可达液氮可达196，效果较好效果较好注意：注意：速冻，减少冰晶损伤细胞速冻，减少冰晶损伤细胞冷冻保藏法冷冻保藏法v细胞体积大的要比体积小的对低温更敏感；细胞体积大的要比体积小的对低温更敏感；无细胞壁的比有细胞壁的更敏感。无细胞壁的比有细胞壁的更敏感。第五张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月干燥保藏干燥保藏沙土管保藏、冷冻真空干燥沙土管保藏、冷冻真空干燥 保藏保藏沙土管：产孢子菌。制成孢子悬液，加无菌沙土管，减压抽沙土管：产孢子菌。制成孢子悬液，加无菌沙土管，减压抽干水分，石蜡封口，冰箱保存。干水分，石蜡封口，冰箱保存。冷冻真
4、空干燥：加保护剂样品预先冷冻，真空冰升华去水，低冷冻真空干燥：加保护剂样品预先冷冻，真空冰升华去水，低温保存，保存数十年，目前最普遍、最重要的方法，菌种保藏温保存，保存数十年，目前最普遍、最重要的方法，菌种保藏中心多采用此法。菌种保藏时采用中心多采用此法。菌种保藏时采用不同手段保藏不同手段保藏，防止某种方防止某种方法失败导致菌种丧失法失败导致菌种丧失。干燥保藏法干燥保藏法第六张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月标准菌株的保存使用标准菌株的保存使用v1.1.长期保存的储存菌株以冷冻干燥保藏为主，特殊要求的菌种可长期保存的储存菌株以冷冻干燥保藏为主，特殊要求的菌种可用其它方法进行保存，保存
5、期可长达几年至几十年。用其它方法进行保存，保存期可长达几年至几十年。2.2.半储存菌株以含半储存菌株以含20%20%甘油的肉汤或液体石腊封存的半固体琼脂甘油的肉汤或液体石腊封存的半固体琼脂为主，在为主，在00以下保存，保存期为以下保存，保存期为3 36 6个月。个月。3.3.应用菌株以琼脂斜面为主，在应用菌株以琼脂斜面为主，在44保存，保存期为保存，保存期为1 13 3个月。个月。4.4.菌种的传代不可超过菌种的传代不可超过6 6次。视菌种的特性及使用情况，一般储次。视菌种的特性及使用情况，一般储存菌株每存菌株每5 5年传记代一次，每年传记代一次，每1-21-2年从储存菌株转接至半储存菌株，年
6、从储存菌株转接至半储存菌株，半储存菌株每半储存菌株每3-63-6个月传代一次，每个月传代一次，每1-31-3个月从半储存菌株转接个月从半储存菌株转接接至应用菌株。接至应用菌株。5.5.每次检验用的菌株必须是从应用菌株转接的新鲜菌株。每每次检验用的菌株必须是从应用菌株转接的新鲜菌株。每支应用菌株用两次后必须销毁（支应用菌株用两次后必须销毁（121121，0.1MPa0.1MPa高压灭菌处理高压灭菌处理1515分钟以上）。分钟以上）。第七张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月国内外菌种保藏部分情况国内外菌种保藏部分情况v我国于我国于19791979年年7 7月成立了中国微生物菌种保月成立了中
7、国微生物菌种保藏管理委员会藏管理委员会(CCCCM).(CCCCM).该委员会下设该委员会下设6 6个菌个菌种保藏管理中心种保藏管理中心,其负责单位、代号及保藏其负责单位、代号及保藏菌种的性质如下菌种的性质如下:第八张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月v普通微生物菌种保藏管理中心普通微生物菌种保藏管理中心(CCGMC)-(CCGMC)-中科院中科院微生物所微生物所,北京北京(AS),(AS),真菌、细菌真菌、细菌;中科院武汉病中科院武汉病毒研究所毒研究所,武汉武汉(AS-IV),(AS-IV),病毒。病毒。v农业微生物菌种保藏管理中心农业微生物菌种保藏管理中心(ACCC)-(ACCC)
8、-中国农中国农业科学院土壤肥料研究所业科学院土壤肥料研究所,北京北京(ISF)(ISF)。v工业微生物菌种保藏管理中心工业微生物菌种保藏管理中心(CICC)-(CICC)-轻工业轻工业部食品发酵工业科学研究所部食品发酵工业科学研究所,南京南京(ID),(ID),真菌真菌;卫生部药品生物制品检定所卫生部药品生物制品检定所,北京北京(NICPBP),(NICPBP),细细菌；中国医学科学院病毒研究所菌；中国医学科学院病毒研究所,北京北京(IV),(IV),病毒。病毒。第九张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月v抗菌素菌种保藏管理中心抗菌素菌种保藏管理中心(CACC)-(CACC)-中国医学科
9、中国医学科学院抗菌素研究所北京学院抗菌素研究所北京(IA)(IA)；四川抗菌素工业研；四川抗菌素工业研究所究所,成都成都(SIA),(SIA),新抗菌素菌种新抗菌素菌种;华北制药厂抗华北制药厂抗菌素研究所菌素研究所,石家庄石家庄(IANP),(IANP),生产用抗菌素菌种。生产用抗菌素菌种。v兽医微生物菌种保藏管理中心兽医微生物菌种保藏管理中心(CVCC)-(CVCC)-农业农业部兽医药品监察所部兽医药品监察所,北京北京(CIVBP)(CIVBP)。v 除了上述保藏中心外除了上述保藏中心外,我国从事微生物研究我国从事微生物研究并保藏有一定数量各类专业用微生物菌种的科并保藏有一定数量各类专业用微
10、生物菌种的科研单位、大专院校还有近百所。研单位、大专院校还有近百所。第十张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月v世界世界5555个国家的菌种保藏机构共个国家的菌种保藏机构共352352个个,目前主要目前主要的菌种保藏机构有的菌种保藏机构有:v美国的美国的“美国典型菌种收藏所美国典型菌种收藏所”(ATCC)(ATCC)，保藏方，保藏方式主要采用冷冻干燥和液氮超低温冻结法。式主要采用冷冻干燥和液氮超低温冻结法。v美国美国“农业研究服务部菌种收藏所农业研究服务部菌种收藏所”(ARS)(ARS)设设立在立在“北方地区研究室北方地区研究室”(NRRL);(NRRL);v荷兰荷兰“真菌中心收藏所真菌
11、中心收藏所”(CBS);(CBS);v日本日本“大阪发酵研究所大阪发酵研究所”(IFO);(IFO);v法国法国“里昂巴斯德研究所里昂巴斯德研究所”(IPL);(IPL);v西德西德“柯赫研究所柯赫研究所”(RKI);(RKI);v苏联苏联“苏联科学院微生物研究所苏联科学院微生物研究所”(IM)(IM)。第十一张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月作业作业1 1、名词解释：无菌技术、单细胞分离名词解释：无菌技术、单细胞分离 2 2、一般可用哪些方法获得微生物的纯培养物一般可用哪些方法获得微生物的纯培养物？第十二张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月上节课知识回顾上节课知识回顾v微生
12、物分离纯化方法微生物分离纯化方法v用固体培养基分离、纯培养用固体培养基分离、纯培养v稀释倒平板法稀释倒平板法v涂布平板法涂布平板法v平板划线法平板划线法v稀释摇管法稀释摇管法v用液体培养基分离、纯培养用液体培养基分离、纯培养v单孢子分离单孢子分离v选择培养分离选择培养分离v二元培养物二元培养物第十三张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月第一节微生物的分离和纯培养第一节微生物的分离和纯培养 n n无菌技术无菌技术n n用固体培养基分离纯培养用固体培养基分离纯培养n n用液体培养基分离纯培养用液体培养基分离纯培养 n n单细胞（单孢子）分离单细胞（单孢子）分离 n n选择培养分离选择培养分离
13、 第十四张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月一、无菌技术一、无菌技术 n n无菌技术无菌技术：在分离、转接及培养纯培养(物)时防止其被其他微生物污染的技术。第十五张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月保持无菌的方法保持无菌的方法 n n高压蒸气灭菌高压蒸气灭菌n n高温干热灭菌高温干热灭菌n n棉塞棉塞n n超净工作台等超净工作台等 第十六张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月接种操作接种操作 第十七张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月二、用固体培养基分离纯培养二、用固体培养基分离纯培养 n n菌菌菌菌落落落落：单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定
14、程度可以形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞生长群体。n n菌菌菌菌苔苔苔苔：当当固固体体培培养养基基表表面面众众多多菌菌落落连连成成一一片片时，便成为菌苔。时，便成为菌苔。第十八张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月第十九张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月菌落菌落n n菌落或菌苔是对微生物进行分类和鉴定的重要依据。菌落或菌苔是对微生物进行分类和鉴定的重要依据。菌落或菌苔是对微生物进行分类和鉴定的重要依据。菌落或菌苔是对微生物进行分类和鉴定的重要依据。细菌菌落特征剖面图细菌菌落特征剖面图第二十张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月细菌菌落特征正面图细菌菌落特征正面图菌落
15、菌落第二十一张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月培养平板培养平板n n培养平板（平板）培养平板（平板）：指熔化的固体培养基倒入无菌平皿，冷却凝固后，盛有固体培养基的平皿。第二十二张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月平板分离微生物纯培养技术平板分离微生物纯培养技术 n n稀释倒平板法稀释倒平板法 n n涂布平板法涂布平板法 n n平板划线分离法平板划线分离法 n n稀释摇管法稀释摇管法 第二十三张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月1、稀释倒平板法：、稀释倒平板法：n n无无无无菌菌菌菌水水水水、梯梯梯梯度度度度稀稀稀稀释释释释、5050左左左左右右右右的的的的琼琼琼琼脂脂
16、脂脂培培培培养养养养基基基基、灭灭灭灭过过过过菌菌菌菌的的的的培培培培养皿。注意要稀释得当。养皿。注意要稀释得当。养皿。注意要稀释得当。养皿。注意要稀释得当。n n分离出单个菌落以后，重复上述操作数次，便可得到纯培养。分离出单个菌落以后，重复上述操作数次，便可得到纯培养。分离出单个菌落以后，重复上述操作数次，便可得到纯培养。分离出单个菌落以后，重复上述操作数次，便可得到纯培养。第二十四张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月Pour plate稀释倒平板法稀释倒平板法第二十五张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月涂布平板法涂布平板法Spread platen无菌水、梯度稀释无菌水、梯
17、度稀释n涂布平板涂布平板 第二十六张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月稀释倒平板法和涂布平板法稀释倒平板法和涂布平板法第二十七张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月平板划线分离法平板划线分离法第二十八张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月稀释摇管法稀释摇管法n n用于分离严格厌氧菌。先将一系列盛有无菌琼脂培养基的试用于分离严格厌氧菌。先将一系列盛有无菌琼脂培养基的试管加热使琼脂熔化后冷却并保持在管加热使琼脂熔化后冷却并保持在5050左右，将待分离的材料左右，将待分离的材料用这些试管进行梯度稀释，试管迅速摇动均匀，冷凝后，在琼脂用这些试管进行梯度稀释，试管迅速摇动均匀，冷凝后
18、，在琼脂柱表面倾倒一层灭菌液体石蜡和固体石蜡的混合物，将培养基与柱表面倾倒一层灭菌液体石蜡和固体石蜡的混合物，将培养基与空气隔开。空气隔开。第二十九张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月三、用液体培养基分离纯培养三、用液体培养基分离纯培养 n n用于细胞大的细菌、原生动物和藻类等的纯化分用于细胞大的细菌、原生动物和藻类等的纯化分离。离。n n稀释法稀释法稀释法稀释法：经高度稀释后，同一个稀释度的试管：经高度稀释后，同一个稀释度的试管中大多数（中大多数（95%95%以上）表现不生长，很可能得以上）表现不生长，很可能得到的是纯培养。到的是纯培养。第三十张，PPT共一百零三页，创作于2022年
19、6月四、单细胞（单孢子）分离四、单细胞（单孢子）分离 n n单单单单细细细细胞胞胞胞分分分分离离离离：采采取取显显微微分分离离法法从从混混杂杂群群体体中中直直接接分分离离单个细胞或单个个体进行培养以获得纯培养。单个细胞或单个个体进行培养以获得纯培养。n n单单细细胞胞分分离离法法的的难难度度与与细细胞胞或或个个体体的的大大小小成成反反比比。个个体体较较大大的的可可在在低低倍倍显显微微镜镜下下进进行行，个个体体较较小小的的则则需需采采用用显显微微操操作仪。作仪。第三十一张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月五、选择培养分离五、选择培养分离 n n当某一种微生物所存在的数量与其他微生物当某一
20、种微生物所存在的数量与其他微生物当某一种微生物所存在的数量与其他微生物当某一种微生物所存在的数量与其他微生物相比非常少时，单采用一般的平板稀释方法相比非常少时，单采用一般的平板稀释方法相比非常少时，单采用一般的平板稀释方法相比非常少时，单采用一般的平板稀释方法几乎是不可能分离到该种微生物的，故需采几乎是不可能分离到该种微生物的，故需采几乎是不可能分离到该种微生物的，故需采几乎是不可能分离到该种微生物的，故需采用选择培养分离法用选择培养分离法用选择培养分离法用选择培养分离法。第三十二张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月1、利用选择培养基进行直接分离、利用选择培养基进行直接分离 n n如要
21、分离高温菌，可在高温条件进行培养；如要分离高温菌，可在高温条件进行培养；如要分离高温菌，可在高温条件进行培养；如要分离高温菌，可在高温条件进行培养；要分离某种抗生素抗性菌株，可在加有抗要分离某种抗生素抗性菌株，可在加有抗要分离某种抗生素抗性菌株，可在加有抗要分离某种抗生素抗性菌株，可在加有抗生素的平板上进行分离。生素的平板上进行分离。生素的平板上进行分离。生素的平板上进行分离。第三十三张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月2、富集培养、富集培养n n主主主主要要要要是是是是指指指指利利利利用用用用不不不不同同同同微微微微生生生生物物物物间间间间生生生生命命命命活活活活动动动动特特特特点点
22、点点的的的的不不不不同同同同，制制制制定定定定特特特特定定定定的的的的环环环环境境境境条条条条件件件件，使使使使仅仅仅仅适适适适应应应应于于于于该该该该条条条条件件件件的的的的微微微微生生生生物物物物旺旺旺旺盛盛盛盛生生生生长长长长，从从从从而而而而使使使使其其其其在在在在群群群群落落落落中中中中的的的的数数数数量量量量大大大大大大大大增增增增加加加加，人人人人们们们们能能能能够够够够更更更更容容容容易易易易地地地地从从从从自自自自然然然然界界界界中中中中分离到所需的特定微生物。分离到所需的特定微生物。分离到所需的特定微生物。分离到所需的特定微生物。n n富富富富集集集集条条条条件件件件：物物
23、物物理理理理、化化化化学学学学和和和和生生生生物物物物等等等等。以以以以从从从从土土土土壤壤壤壤中中中中分分分分离离离离能能能能降降降降解解解解酚酚酚酚类类类类化化化化合合合合物物物物对对对对羟羟羟羟基基基基苯甲酸的微生物的实验为例。苯甲酸的微生物的实验为例。苯甲酸的微生物的实验为例。苯甲酸的微生物的实验为例。第三十四张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月六、微生物的保藏技术六、微生物的保藏技术 n n保藏期间微生物不死亡、不污染、不会因发生而丢失保藏期间微生物不死亡、不污染、不会因发生而丢失保藏期间微生物不死亡、不污染、不会因发生而丢失保藏期间微生物不死亡、不污染、不会因发生而丢失重要
24、的生物学性状。重要的生物学性状。重要的生物学性状。重要的生物学性状。n n许多国家都设有相应的菌种保藏机构：许多国家都设有相应的菌种保藏机构：许多国家都设有相应的菌种保藏机构：许多国家都设有相应的菌种保藏机构：n n中国微生物菌种保藏委员会中国微生物菌种保藏委员会中国微生物菌种保藏委员会中国微生物菌种保藏委员会n n美国典型菌种保藏中心美国典型菌种保藏中心美国典型菌种保藏中心美国典型菌种保藏中心n n世界菌种保藏联合会等世界菌种保藏联合会等世界菌种保藏联合会等世界菌种保藏联合会等 第三十五张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月菌种保藏菌种保藏n n菌种保藏菌种保藏菌种保藏菌种保藏：就是根
25、据菌种特性及保藏目的的不：就是根据菌种特性及保藏目的的不同，给微生物菌株以特定的条件，使其存活而同，给微生物菌株以特定的条件，使其存活而得以延续。得以延续。n对于生产中使用的菌种保藏培养基，对于生产中使用的菌种保藏培养基，要求比较丰富的氮源，以防止菌种退要求比较丰富的氮源，以防止菌种退化变质。化变质。第三十六张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月菌种保藏方法菌种保藏方法n n连续移接连续移接连续移接连续移接n n改变条件（干燥、低温、缺氧、缺乏营养等）使菌株的改变条件（干燥、低温、缺氧、缺乏营养等）使菌株的改变条件（干燥、低温、缺氧、缺乏营养等）使菌株的改变条件（干燥、低温、缺氧、缺乏营
26、养等）使菌株的代谢水平降低，乃至完全停止，达到半休眠或完全休眠代谢水平降低，乃至完全停止，达到半休眠或完全休眠代谢水平降低，乃至完全停止，达到半休眠或完全休眠代谢水平降低，乃至完全停止，达到半休眠或完全休眠的状态，而在一定时间内得到保藏，有的可保藏几十年的状态，而在一定时间内得到保藏，有的可保藏几十年的状态，而在一定时间内得到保藏，有的可保藏几十年的状态，而在一定时间内得到保藏，有的可保藏几十年或更长的时间。或更长的时间。或更长的时间。或更长的时间。n n在需要时再通过提供适宜的生长条件使保藏物恢复活力。在需要时再通过提供适宜的生长条件使保藏物恢复活力。在需要时再通过提供适宜的生长条件使保藏物
27、恢复活力。在需要时再通过提供适宜的生长条件使保藏物恢复活力。第三十七张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月1、传代培养保藏、传代培养保藏n n是微生物保存的基本方法。是微生物保存的基本方法。是微生物保存的基本方法。是微生物保存的基本方法。n n琼脂斜面、半固体琼脂柱和液体培养等。琼脂斜面、半固体琼脂柱和液体培养等。琼脂斜面、半固体琼脂柱和液体培养等。琼脂斜面、半固体琼脂柱和液体培养等。n n橡皮塞封口或用石蜡覆盖，并放置低温保存。橡皮塞封口或用石蜡覆盖，并放置低温保存。橡皮塞封口或用石蜡覆盖，并放置低温保存。橡皮塞封口或用石蜡覆盖，并放置低温保存。n n4 4保存。保存。保存。保存。第三
28、十八张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月2、冷冻保藏、冷冻保藏 n n代谢作用停止。代谢作用停止。代谢作用停止。代谢作用停止。n n细胞体积大者要比小者对低温更敏感，而无细胞壁者则比有细胞细胞体积大者要比小者对低温更敏感，而无细胞壁者则比有细胞细胞体积大者要比小者对低温更敏感，而无细胞壁者则比有细胞细胞体积大者要比小者对低温更敏感，而无细胞壁者则比有细胞壁敏感。其原因是低温会使细胞内水分形成冰晶，从而引起细胞，壁敏感。其原因是低温会使细胞内水分形成冰晶，从而引起细胞，壁敏感。其原因是低温会使细胞内水分形成冰晶，从而引起细胞，壁敏感。其原因是低温会使细胞内水分形成冰晶，从而引起细胞，尤其
29、是细胞膜的损伤。尤其是细胞膜的损伤。尤其是细胞膜的损伤。尤其是细胞膜的损伤。n n速冻及快速解冻可减少损伤；还可加一些保护剂，如速冻及快速解冻可减少损伤；还可加一些保护剂，如速冻及快速解冻可减少损伤；还可加一些保护剂，如速冻及快速解冻可减少损伤；还可加一些保护剂，如0.5%0.5%左右左右左右左右的甘油或二甲亚砜可透入细胞，并通过降低强烈的脱水作用而保的甘油或二甲亚砜可透入细胞，并通过降低强烈的脱水作用而保的甘油或二甲亚砜可透入细胞，并通过降低强烈的脱水作用而保的甘油或二甲亚砜可透入细胞，并通过降低强烈的脱水作用而保护细胞；护细胞；护细胞；护细胞；n n大分子物质因此在采用冷冻法保藏菌种时，一
30、般应加入各种保护大分子物质因此在采用冷冻法保藏菌种时，一般应加入各种保护大分子物质因此在采用冷冻法保藏菌种时，一般应加入各种保护大分子物质因此在采用冷冻法保藏菌种时，一般应加入各种保护剂以提高培养物的存活率。剂以提高培养物的存活率。剂以提高培养物的存活率。剂以提高培养物的存活率。第三十九张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月3、干燥保藏法、干燥保藏法 n n沙土管保存和冷冻真空干燥保藏沙土管保存和冷冻真空干燥保藏是最常用的二项微生物干燥保藏是最常用的二项微生物干燥保藏技术。技术。第四十张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月沙土管保存沙土管保存 n n一般将菌种接种至斜面，培养至长出
31、大量的孢子后，一般将菌种接种至斜面，培养至长出大量的孢子后，一般将菌种接种至斜面，培养至长出大量的孢子后，一般将菌种接种至斜面，培养至长出大量的孢子后，洗下孢子制备孢子悬浮液，加入无菌沙土试管中，减洗下孢子制备孢子悬浮液，加入无菌沙土试管中，减洗下孢子制备孢子悬浮液，加入无菌沙土试管中，减洗下孢子制备孢子悬浮液，加入无菌沙土试管中，减压干燥，直至将水分抽干，最后用石蜡、橡胶塞等封压干燥，直至将水分抽干，最后用石蜡、橡胶塞等封压干燥，直至将水分抽干，最后用石蜡、橡胶塞等封压干燥，直至将水分抽干，最后用石蜡、橡胶塞等封闭管口，置冰箱保存。此法主要适用于产孢子的微生闭管口，置冰箱保存。此法主要适用于
32、产孢子的微生闭管口，置冰箱保存。此法主要适用于产孢子的微生闭管口，置冰箱保存。此法主要适用于产孢子的微生物，如芽孢杆菌、放线菌等，保藏时间相对较长。物，如芽孢杆菌、放线菌等，保藏时间相对较长。物，如芽孢杆菌、放线菌等，保藏时间相对较长。物，如芽孢杆菌、放线菌等，保藏时间相对较长。第四十一张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月冷冻真空干燥保藏冷冻真空干燥保藏 n n是将加有保护剂的细胞样品预先冷冻，使其冻结，然后在真是将加有保护剂的细胞样品预先冷冻，使其冻结，然后在真是将加有保护剂的细胞样品预先冷冻，使其冻结，然后在真是将加有保护剂的细胞样品预先冷冻，使其冻结，然后在真空下通过水的升华作用
33、除去水分。达到干燥的样品可在真空空下通过水的升华作用除去水分。达到干燥的样品可在真空空下通过水的升华作用除去水分。达到干燥的样品可在真空空下通过水的升华作用除去水分。达到干燥的样品可在真空或惰性气体的密闭环境中置低温保存，从而使微生物处于干或惰性气体的密闭环境中置低温保存，从而使微生物处于干或惰性气体的密闭环境中置低温保存，从而使微生物处于干或惰性气体的密闭环境中置低温保存，从而使微生物处于干燥、缺氧及低温的状态，生命活动处于休眠，可以达到长期燥、缺氧及低温的状态，生命活动处于休眠，可以达到长期燥、缺氧及低温的状态，生命活动处于休眠，可以达到长期燥、缺氧及低温的状态，生命活动处于休眠，可以达到
34、长期保藏的目的。保藏的目的。保藏的目的。保藏的目的。n n用水升华的方式除去水分，手段比较温和，细胞受损伤的程度相对用水升华的方式除去水分，手段比较温和，细胞受损伤的程度相对用水升华的方式除去水分，手段比较温和，细胞受损伤的程度相对用水升华的方式除去水分，手段比较温和，细胞受损伤的程度相对比较小，存活率及保藏效果均不错，是目前使用最普遍，也是最重比较小，存活率及保藏效果均不错，是目前使用最普遍，也是最重比较小，存活率及保藏效果均不错，是目前使用最普遍，也是最重比较小，存活率及保藏效果均不错，是目前使用最普遍，也是最重要的微生物保藏方法。要的微生物保藏方法。要的微生物保藏方法。要的微生物保藏方法
35、。第四十二张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月第二节显微镜和显微技术第二节显微镜和显微技术 n n显微镜的种类及原理显微镜的种类及原理 n n显微观察样品的制备显微观察样品的制备 第四十三张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月一、显微镜的种类及原理一、显微镜的种类及原理 n n普通光学显微镜普通光学显微镜普通光学显微镜普通光学显微镜n n暗视野显微镜暗视野显微镜暗视野显微镜暗视野显微镜n n相差显微镜相差显微镜相差显微镜相差显微镜n n荧光显微镜荧光显微镜荧光显微镜荧光显微镜n n透射电子显微镜透射电子显微镜透射电子显微镜透射电子显微镜n n扫描电子显微镜扫描电子显微镜扫描电子显
36、微镜扫描电子显微镜n n扫描隧道显微镜扫描隧道显微镜扫描隧道显微镜扫描隧道显微镜 第四十四张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月普通复式光学显微镜n n普通生物显微镜由三部分构成：普通生物显微镜由三部分构成：普通生物显微镜由三部分构成：普通生物显微镜由三部分构成：照明系统：包括光源和聚光器。照明系统：包括光源和聚光器。光学放大系统：由物镜和目镜组成，是显微镜光学放大系统：由物镜和目镜组成，是显微镜光学放大系统：由物镜和目镜组成，是显微镜光学放大系统：由物镜和目镜组成，是显微镜的主体，为了消除球差和色差，目镜和物镜都的主体，为了消除球差和色差，目镜和物镜都的主体，为了消除球差和色差，目镜和
37、物镜都的主体，为了消除球差和色差，目镜和物镜都由复杂的透镜组构成。由复杂的透镜组构成。由复杂的透镜组构成。由复杂的透镜组构成。机械装置：保证光学系统的准确配制，用于固机械装置：保证光学系统的准确配制，用于固机械装置：保证光学系统的准确配制，用于固机械装置：保证光学系统的准确配制，用于固定材料和观察方便。定材料和观察方便。定材料和观察方便。定材料和观察方便。第四十五张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月分辨率分辨率n n重要性能参数。重要性能参数。重要性能参数。重要性能参数。n n显微镜物象是否清楚不仅决定于放大倍数，还显微镜物象是否清楚不仅决定于放大倍数，还与显微镜的分辨率（与显微镜的分
38、辨率（resolutionresolution）有关。）有关。）有关。）有关。n n分辨率分辨率分辨率分辨率是指显微镜（或人的眼睛距目标是指显微镜（或人的眼睛距目标25cm25cm处）处）处）处）能分辨物体最小间隔的能力。能分辨物体最小间隔的能力。能分辨物体最小间隔的能力。能分辨物体最小间隔的能力。n n分辨率的大小决定于光的波长和镜口角以及介分辨率的大小决定于光的波长和镜口角以及介质的折射率。质的折射率。第四十六张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月分辨率n肉眼分辨率一般只有肉眼分辨率一般只有0.25mmn光学显微镜分辨率光学显微镜分辨率0.18mn电子显微镜可达电子显微镜可达0.2n
39、mnR=0.5/sin/2n式中：n=介质折射率；=镜口角（标本对物镜镜口的张角），sin/2=镜口率第四十七张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月二、显微观察样品的制备二、显微观察样品的制备 n n要根据显微镜和样品的特点来制备。主要根据显微镜和样品的特点来制备。主要讲述光学显微镜的制样。要讲述光学显微镜的制样。第四十八张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月1、活体观察、活体观察n n压压压压滴滴滴滴法法法法：将将将将菌菌菌菌悬悬悬悬液液液液滴滴滴滴于于于于载载载载玻玻玻玻片片片片上上上上，加加加加盖盖盖盖盖盖盖盖玻玻玻玻片片片片后后后后立立立立即即即即进进进进行行行行显显显显微
40、微微微镜观察。镜观察。镜观察。镜观察。n n悬悬悬悬滴滴滴滴法法法法：在在在在盖盖盖盖玻玻玻玻片片片片中中中中央央央央加加加加一一一一小小小小滴滴滴滴菌菌菌菌悬悬悬悬液液液液后后后后反反反反转转转转置置置置于于于于特特特特制制制制的的的的凹凹凹凹载载载载玻玻玻玻片片片片上上上上后后后后进进进进行行行行显显显显微微微微镜镜镜镜观观观观察察察察，为为为为防防防防止止止止液液液液滴滴滴滴蒸蒸蒸蒸发发发发变变变变干干干干，一一一一般般般般还还还还应应应应在在在在盖盖盖盖玻玻玻玻片片片片四四四四周周周周加加加加封凡士林。封凡士林。封凡士林。封凡士林。n n菌菌菌菌丝丝丝丝埋埋埋埋片片片片法法法法：将将将
41、将无无无无菌菌菌菌小小小小块块块块玻玻玻玻璃璃璃璃纸纸纸纸铺铺铺铺于于于于平平平平板板板板表表表表面面面面，涂涂涂涂布布布布放放放放线线线线菌菌菌菌或或或或霉霉霉霉菌菌菌菌孢孢孢孢子子子子悬悬悬悬液液液液，经经经经培培培培养养养养，取取取取下下下下玻玻玻玻璃璃璃璃纸纸纸纸置置置置于于于于载载载载玻玻玻玻片片片片上上上上，用用用用显显显显微微微微镜镜镜镜对对对对菌菌菌菌丝丝丝丝的的的的形形形形态态态态进行观察。进行观察。进行观察。进行观察。n n插片法：插片法：插片法：插片法：第四十九张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月2、染色观察、染色观察n n固定的目的：固定的目的：n n杀死细菌并
42、使菌体粘附于坡片上。杀死细菌并使菌体粘附于坡片上。n n增加细菌对染料的亲和力。增加细菌对染料的亲和力。增加细菌对染料的亲和力。增加细菌对染料的亲和力。n n常常用用的的方方法法有有酒酒精精灯灯火火焰焰加加热热和和化化学学固定二种。固定二种。第五十张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月细菌染色法细菌染色法死菌死菌正染色正染色负染色：负染色：简单染色法简单染色法鉴别染色法鉴别染色法 革兰氏染色法革兰氏染色法 抗酸性染色法抗酸性染色法芽芽 孢孢 染染 色色 法法荚膜染色法等荚膜染色法等 活菌活菌:用美蓝或用美蓝或TTC（氯化三苯基四氮唑）等氯化三苯基四氮唑）等 作活菌染色作活菌染色 姬姆萨染
43、色法姬姆萨染色法染色观察染色观察第五十一张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月第三节显微镜下的微生物第三节显微镜下的微生物 n n微生物类群包括细胞型和非细胞型两类，微生物类群包括细胞型和非细胞型两类，这里主要介绍细胞型微生物。这里主要介绍细胞型微生物。n细菌和古生菌细菌和古生菌 n真菌真菌 n藻类藻类 n原生动物原生动物 第五十二张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月一、细菌和古生菌一、细菌和古生菌 n n细菌的形态和排列细菌的形态和排列n n古生菌古生菌n n原核生物的细胞大小原核生物的细胞大小 第五十三张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月1、细菌的形态和排列、细菌的形
44、态和排列球菌球菌(Coccus)杆菌杆菌(Bacillus)螺旋菌螺旋菌(Spirlla)其他形状的细菌其他形状的细菌第五十四张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月第五十五张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月球菌(coccus)单球菌单球菌双球菌双球菌四联球菌四联球菌八叠球菌八叠球菌葡萄球菌葡萄球菌链球菌链球菌第五十六张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月Arrangement of Spherical Bacterial Cellsdiplococci streptococci tetracocci sarcinae staphylococci 第五十七张，PPT共一百零
45、三页，创作于2022年6月.单球菌（显微镜下示意图）单球菌单球菌(single coccus)第五十八张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月.双球菌（显微镜下示意图）双球菌双球菌(double coccus)第五十九张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月Micrococcus aerobic,gram-positive,cell arranges mainly in pairs,or irregular clusters.They are often yellow,orange or red in colour第六十张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月 上：显微镜效果 下：
46、电 镜 照 片 四联球菌四联球菌(Micrococcus lactis)第六十一张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月八叠球菌八叠球菌(Sarcina ureae)八叠球菌（显微镜下示意图）第六十二张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月 葡萄球菌左：电镜照片左：电镜照片右：显微镜下的金黄色葡萄球菌右：显微镜下的金黄色葡萄球菌葡萄球菌葡萄球菌(Staphylococcus aureus)第六十三张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月Staphylococcus-facultatively anaerobic,gram-positive,usually form irregula
47、r clusters,nonmotile,catalase positive but oxidase negative,ferment glucose anaerobically.staphylococcistaphylococci第六十四张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月链球菌链球菌链球菌（显微镜下示意图）第六十五张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月链球菌（电镜照片）链球菌（电镜照片）第六十六张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月Streptococcus -facultatively anaerobic or microaerophilic,catalase neg
48、ative,gram-positive,Cell arranges in pairs or chains,usually nonmotile,A few species are anaerobic rather than facultative.第六十七张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月 电子显微镜下的结核菌电子显微镜下的结核菌 （绿色的就是结核杆菌）（绿色的就是结核杆菌）杆菌杆菌第六十八张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月动物宿主细胞感染杆菌濒临死亡 电镜照片第六十九张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月链杆菌链杆菌第七十张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月链
49、显微镜下的链杆菌显微镜下的链杆菌第七十一张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月螺旋菌（螺旋菌（Spirlla)弧菌(vibrio)螺菌（spirllum）螺旋体(spirochaeta)第七十二张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月Vibrio,Spirillum and Spirochetevibriospirillumspirochete第七十三张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月第七十四张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月显微镜下的螺旋菌第七十五张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月 幽门螺旋菌幽门螺旋菌左：显微数码摄像右：结构示意图第七十六张，PPT共
50、一百零三页，创作于2022年6月放线菌的分布与生活方式放线菌的分布与生活方式放线菌一般分布在含量较低；有机物丰富和呈放线菌一般分布在含量较低；有机物丰富和呈微生物碱性的土壤中。微生物碱性的土壤中。107个个g左右左右能看到：北方春季深层黑土能看到：北方春季深层黑土 地的白丝地的白丝能闻到：泥土特有的能闻到：泥土特有的“泥腥味泥腥味”第七十七张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月第七十八张，PPT共一百零三页，创作于2022年6月Chain of conidiosporesAgar surfaceSubstrate myceliumAerial hyphaeVarious types of