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1、关于血清谷丙转氨酶测定第1页，讲稿共19张，创作于星期三实 验 提 纲 实验实验目的目的1 酶活性酶活性测测定原理定原理与与方法方法2 比色分析法原理比色分析法原理与与公式公式计计算算3 722 722分光光度分光光度计计操作方法操作方法与与注意事注意事项项4 思考思考题题5第2页，讲稿共19张，创作于星期三1实验目的实验目的1 12 23 34 4掌握血清谷丙转氨酶活性测定的原理熟悉血清谷丙转氨酶活性测定的方法熟悉比色分析法了解722分光光度计的使用方法第3页，讲稿共19张，创作于星期三2酶活性测定原理与方法酶活性测定原理与方法酶活性测定原理酶活性测定原理 2,42,4二硝基苯肼二硝基苯肼
2、(黄色黄色)丙酮酸二硝基苯腙丙酮酸二硝基苯腙(红棕色红棕色)NaOHNaOH-酮戊二酸酮戊二酸丙氨酸丙氨酸谷氨酸谷氨酸丙酮酸丙酮酸GPTGPT丙酮酸丙酮酸第4页，讲稿共19张，创作于星期三酶活性测定方法酶活性测定方法2酶活性测定原理与方法酶活性测定原理与方法1 1试管号试管号标准管标准管标准标准空白管空白管测定管测定管测定测定空白管空白管丙酮酸标准液（丙酮酸标准液（mlml）(1ml=100g)(1ml=100g)0.10.1新鲜血清（新鲜血清（mlml）0.10.10.10.1底物液（底物液（3737）（）（mlml）0.50.50.50.50.50.50.1mol/L0.1mol/L磷酸盐
3、缓冲液（磷酸盐缓冲液（mlml）(pH=7.4)(pH=7.4)0.10.1 此前三管置于此前三管置于3737保温保温3030分钟分钟2 2，4-4-二硝基苯肼二硝基苯肼(ml(ml）0.50.50.50.50.50.50.50.5底物液（底物液（mlml）0.50.5充分混合，置于充分混合，置于3737保温保温2020分钟分钟0.4mol/L NaOH0.4mol/L NaOH（mlml）5 55 55 55 52 23 3第5页，讲稿共19张，创作于星期三酶活性测定方法酶活性测定方法2酶活性测定原理与方法酶活性测定原理与方法标准管标准管标准空白管标准空白管测定管测定管测定空白管测定空白管颜
4、色深浅不一颜色深浅不一第6页，讲稿共19张，创作于星期三酶活性测定方法酶活性测定方法2酶活性测定原理与方法酶活性测定原理与方法试管号试管号标准管标准管标准标准空白管空白管测定管测定管测定测定空白管空白管丙酮酸标准液（丙酮酸标准液（mlml）(1ml=100g)(1ml=100g)0.10.1新鲜血清（新鲜血清（mlml）0.10.10.10.1底物液（底物液（3737）（）（mlml）0.50.50.50.50.50.50.1mol/L0.1mol/L磷酸盐缓冲液（磷酸盐缓冲液（mlml）(pH=7.4)(pH=7.4)0.10.1 此前三管置于此前三管置于3737保温保温3030分钟分钟2
5、2，4-4-二硝基苯肼二硝基苯肼(ml(ml）0.50.50.50.50.50.50.50.5底物液（底物液（mlml）0.50.5充分混合，置于充分混合，置于3737保温保温2020分钟分钟0.4mol/L NaOH0.4mol/L NaOH（mlml）5 55 55 55 5第7页，讲稿共19张，创作于星期三酶活性测定方法酶活性测定方法2酶活性测定原理与方法酶活性测定原理与方法标准管标准管标准空白管标准空白管测定管测定管测定空白管测定空白管如何排除干扰如何排除干扰?真正丙酮酸定量真正丙酮酸定量?颜色深浅不一颜色深浅不一:还有其他酮酸的影响还有其他酮酸的影响第8页，讲稿共19张，创作于星期三
6、3比色分析法原理与公式计算比色分析法原理与公式计算比色分析法原理比色分析法原理定义定义通过比较有色物质溶液颜色的深浅，测知该物质浓度通过比较有色物质溶液颜色的深浅，测知该物质浓度的方法。的方法。1 12 2原理原理LambertLambertBeerBeer定律定律第9页，讲稿共19张，创作于星期三3比色分析法原理与公式计算比色分析法原理与公式计算比色分析法公式推导比色分析法公式推导2 2A A标标/A/A测测=C=C标标/C/C测测数学表达式数学表达式A=K C LA=K C L溶溶液液吸吸光光度度溶溶液液吸吸光光系系数数溶溶液液浓浓度度液液层层厚厚度度1 1公式推导公式推导第10页，讲稿共
7、19张，创作于星期三本实验公式计算本实验公式计算3比色分析法原理与公式计算比色分析法原理与公式计算A A标准标准A A标准空白标准空白0.1ml0.1ml血清所产生的丙酮酸血清所产生的丙酮酸gg数数A A测定测定A A测定空白测定空白C C标准标准谷丙转氨酶活性单位的定义：谷丙转氨酶活性单位的定义：1ml1ml血清于血清于3737与底物作用与底物作用3030分钟，产生分钟，产生2.5g2.5g丙酮酸为丙酮酸为1 1个个GPTGPT活性单位。活性单位。活力单位活力单位/ml/ml0.1ml0.1ml血清所产生的丙酮酸血清所产生的丙酮酸gg数数10102.52.51 12 2第11页，讲稿共19张
8、，创作于星期三上述各管静置上述各管静置1010分钟后，使用分钟后，使用722722分光光度计，在分光光度计，在520nm520nm处，以蒸馏处，以蒸馏水校正零点，测定各管相应吸光度值。水校正零点，测定各管相应吸光度值。标准管标准管标准空白管标准空白管测定管测定管测定空白管测定空白管酶活性测定方法酶活性测定方法2酶活性测定原理与方法酶活性测定原理与方法第12页，讲稿共19张，创作于星期三4722722分光光度计使用方法及注意事项分光光度计使用方法及注意事项使用方法接通电源前，检查仪器部件是否完好，工作电压是否正常。将比色杯内放好空白液（蒸馏水）、标准液、标准空白液、测定液、测定空白液，置于比色池
9、中（由下向上的顺序放置）。（见图）1 12 23 34 4盖上暗箱盖，选择 仪器自动校正空白液“A”=0，并由下向上的顺序读取各管“A”（即A标准、A标空、A测定、A测空）。（见图）start接通电源打开暗箱盖，进入光度测量界面。选择 测定的波长（520nm）。（见图）GOTO 第13页，讲稿共19张，创作于星期三4722722分光光度计使用方法及注意事项分光光度计使用方法及注意事项使用方法第14页，讲稿共19张，创作于星期三4722722分光光度计使用方法及注意事项分光光度计使用方法及注意事项使用方法第15页，讲稿共19张，创作于星期三4722722分光光度计使用方法及注意事项分光光度计使用
10、方法及注意事项使用方法第16页，讲稿共19张，创作于星期三注意事项4722722分光光度计使用方法及注意事项分光光度计使用方法及注意事项手持比色杯磨砂面，比色杯光面对准光路。手持比色杯磨砂面，比色杯光面对准光路。比色杯内液体体积占总体积比色杯内液体体积占总体积2/32/3，比色杯外壁不可有液体，则需擦镜纸，比色杯外壁不可有液体，则需擦镜纸沾去。沾去。与比色杯由下向上所放位置对应，仪器所报数据顺序则由与比色杯由下向上所放位置对应，仪器所报数据顺序则由1-51-5。1 12 23 3第17页，讲稿共19张，创作于星期三5思考题思考题1 12 23 3实验操作中第一次实验操作中第一次37 保温保温30分钟和第二次分钟和第二次37 保温保温20分钟，各有什么意义？分钟，各有什么意义？为什么实验中设立标准空白管和测定空白管？空白为什么实验中设立标准空白管和测定空白管？空白管意义是什么？管意义是什么？在理解本实验设计的基础上，设计一个血清谷丙转氨酶的在理解本实验设计的基础上，设计一个血清谷丙转氨酶的实验方案。实验方案。第18页，讲稿共19张，创作于星期三感感谢谢大大家家观观看看第19页，讲稿共19张，创作于星期三