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1、关于菊花的组织培养第1页，讲稿共32张，创作于星期三课题课题1 1 菊花的组织培养菊花的组织培养第2页，讲稿共32张，创作于星期三第3页，讲稿共32张，创作于星期三1、熟悉植物组织培养的基本过程、熟悉植物组织培养的基本过程2、了解植物组织培养的影响因素、了解植物组织培养的影响因素3、掌握植物组织培养的操作过程、掌握植物组织培养的操作过程 示示 标标第4页，讲稿共32张，创作于星期三什么是细胞分化？细胞分化的原因和结果？什么是细胞分化？细胞分化的原因和结果？什么是细胞分化？细胞分化的原因和结果？什么是细胞分化？细胞分化的原因和结果？.植物组织培养应用的理论基础是什么植物组织培养应用的理论基础是什
2、么?愈伤组织是怎样形成的？有什么特点？愈伤组织是怎样形成的？有什么特点？愈伤组织是怎样形成的？有什么特点？愈伤组织是怎样形成的？有什么特点？组织培养的过程？脱分化、再分化？组织培养的过程？脱分化、再分化？植物组织培养的基本过程植物组织培养的基本过程影响组织培养的因素？影响组织培养的因素？菊花组织培养的过程，及注意的问题？菊花组织培养的过程，及注意的问题？菊花组织培养的过程，及注意的问题？菊花组织培养的过程，及注意的问题？躬躬 学学第5页，讲稿共32张，创作于星期三1、细胞分化、细胞分化2、细胞的全能性、细胞的全能性3、愈伤组织、愈伤组织4、脱分化、脱分化5、再分化、再分化6、外植体、外植体需要
3、了解的几个概念需要了解的几个概念第6页，讲稿共32张，创作于星期三1 1、细胞分化细胞分化细胞分化细胞分化：植物的个体发育过程中，细胞在形态、结构植物的个体发育过程中，细胞在形态、结构植物的个体发育过程中，细胞在形态、结构植物的个体发育过程中，细胞在形态、结构和生理功能上都会出现和生理功能上都会出现和生理功能上都会出现和生理功能上都会出现稳定性的差异稳定性的差异稳定性的差异稳定性的差异，形成这些差异的过程形成这些差异的过程就叫做细胞分化。细胞分化是就叫做细胞分化。细胞分化是基因选择性表达基因选择性表达的结果。的结果。的结果。的结果。2 2、细胞的全能性细胞的全能性：已分化已分化已分化已分化的植
4、物细胞仍然具有发育成为完整的植物细胞仍然具有发育成为完整的植物细胞仍然具有发育成为完整的植物细胞仍然具有发育成为完整个体的潜能。个体的潜能。个体的潜能。个体的潜能。3 3、愈伤组织愈伤组织愈伤组织愈伤组织：由由由由离体离体的植物器官、组织或细胞在一定的培的植物器官、组织或细胞在一定的培养条件下经过养条件下经过脱分化脱分化脱分化脱分化过程形成的组织，就叫愈伤组织，愈过程形成的组织，就叫愈伤组织，愈伤组织的细胞伤组织的细胞排列疏松而无规则排列疏松而无规则排列疏松而无规则排列疏松而无规则，是一种高度液泡化的呈是一种高度液泡化的呈无定形状态的无定形状态的薄壁薄壁薄壁薄壁细胞。细胞。细胞。细胞。4、脱分
5、化脱分化：由由由由高度分化高度分化的植物组织或细胞产生的植物组织或细胞产生愈伤组织愈伤组织愈伤组织愈伤组织的的的的过程，称为脱分化，又叫去分化。过程，称为脱分化，又叫去分化。过程，称为脱分化，又叫去分化。过程，称为脱分化，又叫去分化。5 5、再分化再分化再分化再分化：脱分化产生的：脱分化产生的愈伤组织愈伤组织愈伤组织愈伤组织继续进行培养，继续进行培养，继续进行培养，继续进行培养，又又又又可以可以可以可以重新分化重新分化重新分化重新分化成根或芽等器官，这个过程叫做再分化。成根或芽等器官，这个过程叫做再分化。6、外植体外植体：用于：用于：用于：用于离体离体离体离体培养的植物器官或组织片段。培养的植
6、物器官或组织片段。第7页，讲稿共32张，创作于星期三 愈伤组织：愈伤组织：离体的植物器官、组织或细胞通过脱离体的植物器官、组织或细胞通过脱分化形成的分化形成的疏松而无规则疏松而无规则的，高度液泡化的呈的，高度液泡化的呈无定无定形状态形状态的的,未分化的未分化的薄壁细胞薄壁细胞2-3周，愈伤组织开始形成。周，愈伤组织开始形成。第8页，讲稿共32张，创作于星期三 再分化：再分化：愈伤组织愈伤组织继续培养，继续培养，重新分重新分化成根和芽化成根和芽等器官的过程。等器官的过程。3-5周之后，诱导出的新叶片和芽。周之后，诱导出的新叶片和芽。第9页，讲稿共32张，创作于星期三离体的植物器离体的植物器官、组
7、织、细官、组织、细胞胞脱分化脱分化愈愈伤伤组组织织再分化再分化根根芽芽植植物物体体植物组织培养的基本过程植物组织培养的基本过程第10页，讲稿共32张，创作于星期三（二）影响植物组织培养的因素（二）影响植物组织培养的因素 材料的选择、材料的选择、营养成分、激素、一定的外界因素（温度、空气、无菌环境、适合的PH、适时光照等）。第11页，讲稿共32张，创作于星期三MS固体培养基成分及比例固体培养基成分及比例同微生物培养基相比，同微生物培养基相比，MS培养基的配方有哪些明显的不同？培养基的配方有哪些明显的不同？第12页，讲稿共32张，创作于星期三微生物培养基以有机营养为主。与微生物的培养不同，微生物培
8、养基以有机营养为主。与微生物的培养不同，MS培培养基则需提供大量无机营养，无机盐混合物包括植物生长必养基则需提供大量无机营养，无机盐混合物包括植物生长必须的大量元素和微量元素两大类。须的大量元素和微量元素两大类。阅读课文，思考以下问题阅读课文，思考以下问题1.同微生物培养基相比，同微生物培养基相比，MS培养基的配方有哪些明显的不同？培养基的配方有哪些明显的不同？2、你认为组织培养过程中，成功的关键有哪些？这些步骤的适宜、你认为组织培养过程中，成功的关键有哪些？这些步骤的适宜条件是什么？条件是什么？组织的脱分化及愈伤组织的再分化。组织的脱分化及愈伤组织的再分化。植物组织培养过程中，影响植物细胞脱
9、分化、再分化的最重要植物组织培养过程中，影响植物细胞脱分化、再分化的最重要因素是因素是植物激素植物激素。第13页，讲稿共32张，创作于星期三激素配比对组织培养的影响激素配比对组织培养的影响在培养基中需要添加在培养基中需要添加生长素生长素和和细胞分裂素细胞分裂素等植物激素，其等植物激素，其浓度浓度、使使用的先后顺序用的先后顺序、用量的比例用量的比例等都影响结果。等都影响结果。高高 利于根分化、抑制芽的形成利于根分化、抑制芽的形成生长素生长素/细胞分裂素细胞分裂素 低低 利于芽的形成利于芽的形成适中适中 利于愈伤组织的形成利于愈伤组织的形成 第14页，讲稿共32张，创作于星期三活动活动2：用自己的
10、话把菊花组织培养的操作流程给描述出来用自己的话把菊花组织培养的操作流程给描述出来用自己的话把菊花组织培养的操作流程给描述出来用自己的话把菊花组织培养的操作流程给描述出来?（提（提（提（提示：怎样配制示：怎样配制示：怎样配制示：怎样配制MSMS培养基培养基?外植体消毒应如何进行外植体消毒应如何进行?接接种、培养、移栽时应注意什么问题种、培养、移栽时应注意什么问题?）第15页，讲稿共32张，创作于星期三（一）制备（一）制备MS培养基培养基（二）外植体消毒（二）外植体消毒（三）接种（三）接种（四）培养（四）培养（五）移栽（五）移栽（六）栽培（六）栽培实验操作流程实验操作流程：第16页，讲稿共32张，
11、创作于星期三2、实验具体操作、实验具体操作（1）制备）制备MS固体培养基固体培养基 实验室一般使用实验室一般使用_保存的配制好的培养基母液来保存的配制好的培养基母液来制备制备配制各种母液配制各种母液 配制母液时，大量元素浓缩配制母液时，大量元素浓缩_ _，微量元素浓，微量元素浓缩缩_ _，常温保存常温保存。激素类、维生素类以及用量比。激素类、维生素类以及用量比较小的有机物可以按照较小的有机物可以按照_的质量浓度单独配制母液。的质量浓度单独配制母液。用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍数，用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍数，计算用量计算用量。1mg/ml410倍倍100倍倍第
12、17页，讲稿共32张，创作于星期三配制培养基。配制培养基。2、实验具体操作、实验具体操作（1）.制备制备MS固体培养基固体培养基实验室一般使用实验室一般使用_保存的配制好的培养基母液来保存的配制好的培养基母液来制备制备4植物激素植物激素在菊花组织培养中，可以不添加在菊花组织培养中，可以不添加_，原因，原因是菊花茎段组织培养是菊花茎段组织培养_。比较容易比较容易配制培养液配制培养液调调PHPH培养基的分装培养基的分装 第18页，讲稿共32张，创作于星期三灭菌灭菌将分装好的培养基连同其他器械一起进行将分装好的培养基连同其他器械一起进行_。2、实验具体操作、实验具体操作（1）.制备制备MS固体培养基
13、固体培养基实验室一般使用实验室一般使用_保存的配制好的培养基母液来制保存的配制好的培养基母液来制备备4高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌第19页，讲稿共32张，创作于星期三2、实验具体操作、实验具体操作（2）外植体消毒）外植体消毒 选取菊花茎段时，要取选取菊花茎段时，要取 _。流水流水冲洗冲洗酒精酒精无菌水无菌水氯化汞氯化汞无菌水无菌水消毒流程：消毒流程：浓度浓度_摇动摇动_次次时间时间_s浓度浓度_时间时间_min至少清洗至少清洗_次次漂净漂净_生长旺盛的嫩枝生长旺盛的嫩枝70%23670.1%123消毒消毒液液第20页，讲稿共32张，创作于星期三 不是。对外植体进行表面消毒时，不是。对外植体进行表面
14、消毒时，既要考虑到消毒效果，又要考虑到植物既要考虑到消毒效果，又要考虑到植物的耐受能力。的耐受能力。在外植体消毒过程中，是不是强度越在外植体消毒过程中，是不是强度越大越好，为什么？大越好，为什么？思思 考考第21页，讲稿共32张，创作于星期三2、实验具体操作、实验具体操作（3）接种）接种 前期准备：用前期准备：用_消毒工作台，点燃酒精消毒工作台，点燃酒精灯。所有工作都必须在酒精灯旁进行，器械使用前后都灯。所有工作都必须在酒精灯旁进行，器械使用前后都要用要用_灭菌。灭菌。接种操作：插入外植体时接种操作：插入外植体时_端朝上，每端朝上，每个锥形瓶接种个锥形瓶接种_个外植体。个外植体。70的酒精的酒
15、精火焰灼烧火焰灼烧形态学上形态学上68第22页，讲稿共32张，创作于星期三你打算做几组重复？你打算设置对照实验吗？你打算做几组重复？你打算设置对照实验吗？思思 考考 每种材料或配方至少要做一组以上的重复。设每种材料或配方至少要做一组以上的重复。设置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培养基置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培养基的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养，用的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养，用以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染。以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染。第23页，讲稿共32张，创作于星期三2、实验具体操作、实验具体操作（4）培养）培养 接种后的锥形瓶最好放在接种
16、后的锥形瓶最好放在_中培中培养。培养期间定期进行养。培养期间定期进行_，温度控制在，温度控制在_，并且，并且每天每天用日光灯光照用日光灯光照_h h。无菌箱无菌箱182212消毒消毒了解：了解：光照条件光照条件第24页，讲稿共32张，创作于星期三2、实验具体操作、实验具体操作（5）移栽）移栽 移栽生根的试管苗之前，应先打移栽生根的试管苗之前，应先打开封口膜，在培养间生长几日；开封口膜，在培养间生长几日；然后用流水清洗然后用流水清洗_，将幼苗移植到，将幼苗移植到_等环等环境中生活一段时间，进行壮境中生活一段时间，进行壮苗。最后进行露天栽培。苗。最后进行露天栽培。根部培养基根部培养基消过毒的蛭石或
17、珍珠岩消过毒的蛭石或珍珠岩第25页，讲稿共32张，创作于星期三1、培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌）、培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌）2、外植体的消毒（酒精、氯化汞）、外植体的消毒（酒精、氯化汞）3、接种的无菌操作（酒精、酒精灯、接种的无菌操作（酒精、酒精灯灼烧）灼烧）4、无菌箱中的培养；、无菌箱中的培养；5、移栽到消过毒的环境中生存一段时间。、移栽到消过毒的环境中生存一段时间。在整个操作过程中，是如何来实现无菌环境的？在整个操作过程中，是如何来实现无菌环境的？思思 考考第26页，讲稿共32张，创作于星期三三、三、结果分析与评价结果分析与评价（一）对接种操作中污染情况的分析（一）对接种操作中污染情况的分
18、析（二）是否完成了对植物组织的脱分化和再分化（二）是否完成了对植物组织的脱分化和再分化（三）是否进行了统计、对照与记录（三）是否进行了统计、对照与记录（四）生根苗的移栽是否合格（四）生根苗的移栽是否合格第27页，讲稿共32张，创作于星期三外植体在培养过程中可能会被污染，你认为造成污外植体在培养过程中可能会被污染，你认为造成污染的原因有哪些？染的原因有哪些？污染物如何处理？污染物如何处理？思思 考考第28页，讲稿共32张，创作于星期三1、外植体带菌、外植体带菌2、培养基及接种、培养基及接种器具灭菌不彻底器具灭菌不彻底3、接种操作时带入、接种操作时带入4、环境不清洁、环境不清洁结合录像结合录像外植体灭菌与接种操作外植体灭菌与接种操作，谈谈组织培养污染的主要途，谈谈组织培养污染的主要途径及怎样预防污染？径及怎样预防污染？第29页，讲稿共32张，创作于星期三污染的预防措施污染的预防措施（一）防止外植体带菌（二）保证培养基及接种器具彻底灭菌（三）操作人员严格遵守无菌操作规程（四）保证接种与培养环境清洁第30页，讲稿共32张，创作于星期三试评价下列操作正确与否试评价下列操作正确与否第31页，讲稿共32张，创作于星期三感感谢谢大大家家观观看看第32页，讲稿共32张，创作于星期三