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1、食品微生物学检验霉菌及酵母菌计数方法学验证报告一、验证目的验证GB4789.15-2016食品微生物学检验 霉菌和酵母计数在本实验室的适用性。二、验证方法严格按照GB4789.15-2016进行实验，样品采样方案依据GB4789.1-2016 食品微生物学检验 总则的要求进行，选取三种物质形态不同种类的典型样品进行验证，本实验方法设计如下：样品种类样品名称样品编号实验人员实验方法糕点xxxxxxa、b双人双平行蜂蜜xxxxxxc、a双人双平行汽水xxxxxxc、b双人双平行除上述实验程序外，为保证本次验证的科学性和准确性，本次实验添加阳性对照组，对照组由标准菌株黑曲霉（CICC2487），白假
2、丝酵母（CICC1965）分别或者混合接种培养而成，与样品实验程序同时进行。三、验证设备和试剂1. 冰箱：BCD-212DG/A 海信（北京）电器2. 霉菌培养箱： 上海一恒科学仪器3. 电位pH计：PHS-3C+（精确度0.01） 成都世纪方舟科技有限公司4. 无菌均质器：SCIENTZ-04 宁波新芝生物科技有限公司5. 恒温振荡器：SHA-A 江苏金坛环宇科学仪器厂6. 菌落计数仪：Scan-500 北京五洲东方科技发展有限公司7. 天平:JE-502 上海浦春计量仪器有限公司8. 超净工作台:SW-CJ-2FD 上海博迅实业培养基和试剂：孟加拉红培养基 北京陆桥技术股份有限公司四、验证
3、环境1. 依据消毒与灭菌效果的评价方法与标准GB15981-1995定期对高压蒸汽灭菌锅的灭菌效果进行检测评价并记录；2. 依据无菌室消毒灭菌操作规程定期对对无菌室、生物安全柜、超净台进行清洁消毒灭菌并记录；3. 依据实验室质量控制规范食品微生物检测GB/T27405-2008定期对对无菌室、生物安全柜及超净台进行沉降菌检测并记录；4. 无菌室检验：详见XXXX；五、验证步骤1. 样品的稀释1.1 固体和半固体样品：称取25 g 样品放入盛有225 mL 无菌蒸馏水的均质袋中，用拍击式均质器拍打2min，制成1:10 的样品匀液。1.2 液体样品：以移液枪吸取25 mL 样品至盛有225 mL
4、 无菌蒸馏水的锥形（可在瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10 的样品匀液。1.3 取1 mL 1:10 稀释液注入含有9 mL 无菌水的试管中混匀，此液为1:100 稀释液。1.4 按1.3 操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。1.5 根据对样品污染状况的估计，选择2 个3 个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10 倍递增稀释的同时，每个稀释度分别吸取1 mL 样品匀液于2 个无菌平皿内。同时分别取1 mL样品稀释液加入2个无菌平皿作空白对照，根据样品检测参数的不同分别吸取1 mL单独标准菌液或者混合标准菌液加入两个无菌平皿内作阳性对照。1.6 及时将15
5、 mL20 mL 冷却至46 的孟加拉红培养基倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。2. 培养待琼脂凝固后，将平板倒置，281培养5d，观察并记录。3. 菌落计数严格按照GB4789.15-2010的计数原则和方法进行计数，并按照该标准进行结果处理。六、验证结果实验结果如下表所示，详细实验结果见食品中霉菌及酵母检验原始记录表。表1：霉菌及酵母菌计数测定实验结果统计表组别样品名称和编号实验员实验结果平行误差两组误差一组AXXXXa20CFU/g无明显差异无明显差异a20CFU/g二组b15 CFU/g无明显差异b15 CFU/g一组BXXXXa10CFU/g无明显差异无明显差异a10CFU/g二组c10CFU/g无明显差异c10CFU/g一组CXXXXc1CFU/mL无明显差异无明显差异c1CFU/ mL二组b1CFU/ mL无明显差异b1CFU/ mL经过该方法的双人双平行论证，从表1可看出，糕点-A、蜂蜜-B、汽水-C的平行误差和两组人员误差无明显差异，符合要求（明显误差判定限为1个数量级）。因此可认为GB4789.15-2016食品微生物学检验 霉菌和酵母计数在检测糕点、蜂蜜、汽水的实验中准确可靠，可在本实验室适用，以此类推霉菌酵母参数的其余类型检品均可适用本标准进行检验。3