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1、关于关于实验大大肠杆菌培养分离杆菌培养分离第1页，讲稿共26张，创作于星期日一、基础知识：一、基础知识：(一一)微生物微生物 90%以上的微生物是对人类有利的。如抗生素多数来源放线菌以上的微生物是对人类有利的。如抗生素多数来源放线菌和霉菌；酒由酵母菌发酵产生，腐乳由红曲霉和毛霉发酵制成；和霉菌；酒由酵母菌发酵产生，腐乳由红曲霉和毛霉发酵制成；微生物也能消除环境污染，在新能源领域将发挥巨大作用。微生物也能消除环境污染，在新能源领域将发挥巨大作用。病毒、细菌、放线菌、病毒、细菌、放线菌、真菌、原生动物真菌、原生动物第2页，讲稿共26张，创作于星期日第3页，讲稿共26张，创作于星期日一、大肠杆菌的概
2、述一、大肠杆菌的概述第4页，讲稿共26张，创作于星期日菌落：菌落：n单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落结构的子细胞群体，叫做菌落。n菌落是鉴定菌种的重要依据。菌落是鉴定菌种的重要依据。第5页，讲稿共26张，创作于星期日二、培养基二、培养基 培养基（培养液）是培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。液。1.1.培养基的营养物质培养基的营养物质2.2.培养基的类型和用
3、途培养基的类型和用途3.3.配制培养基的原则配制培养基的原则第6页，讲稿共26张，创作于星期日三、无菌技术三、无菌技术1.1.无菌技术的概念无菌技术的概念 对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒；消毒；将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌；将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌；为避免周围微生物污染，实验操作应在酒精灯火焰旁进行；为避免周围微生物污染，实验操作应在酒精灯火焰旁进行；避免已灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。避免已灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。只有胆大心细，操作快捷，熟练、规范地进只有胆大心细，操作快捷，熟练、
4、规范地进行无菌操作，才可能成功地培养微生物。行无菌操作，才可能成功地培养微生物。第7页，讲稿共26张，创作于星期日1 1、煮沸消毒法煮沸消毒法:100100煮沸煮沸5-6min5-6min2 2、化学药剂消毒法、化学药剂消毒法:用用75%75%酒精、新洁尔灭等酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒进行皮肤消毒;氯气消毒水源氯气消毒水源3 3、紫外线消毒、紫外线消毒(1)(1)消毒的方法：消毒的方法：利用化学或物理方法，杀死利用化学或物理方法，杀死大部份大部份致病微生物致病微生物的过程。的过程。第8页，讲稿共26张，创作于星期日（2 2）灭菌的定义：）灭菌的定义：以化学剂或物理方法消灭以化学剂或物理方法消
5、灭所有所有微生物，微生物，包括所有细菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒，包括所有细菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒，而达到而达到完全无菌完全无菌之过程。之过程。第9页，讲稿共26张，创作于星期日1 1、灼烧灭菌、灼烧灭菌2 2、高压蒸气灭菌：、高压蒸气灭菌：100kPa100kPa、121 121 下下维持维持15-30min.15-30min.3 3、过滤灭菌法、过滤灭菌法4 4、紫外光灭菌法紫外光灭菌法5 5、化学灭菌法、化学灭菌法(2)灭菌的方法：灭菌的方法：第10页，讲稿共26张，创作于星期日1.1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物
6、污染外，还有什么目的？生物污染外，还有什么目的？2.2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。需要，请选择合适的方法。（1 1）培养细菌用的培养基与培养皿培养细菌用的培养基与培养皿（2 2）玻棒、试管、烧瓶和吸管玻棒、试管、烧瓶和吸管（3 3）实验操作者的双手实验操作者的双手答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。答：（答：（1）、（）、（2）需要灭菌；（）需要灭菌；（3）需要消毒。）需要消毒。第11页，讲稿共26张，创作于星期日四、实验操作四、实验操作 1.制
7、备制备LB（液体和固体）培养基（用于培养细菌）（液体和固体）培养基（用于培养细菌）第12页，讲稿共26张，创作于星期日1 1计算计算、称量称量2 2溶化溶化3 3调调pHpH：pH7pH76 6操作步骤操作步骤第13页，讲稿共26张，创作于星期日 4 4灭菌灭菌:将将5050mlml培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上棉培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为100100kPakPa、温度为温度为121121，灭菌，灭菌15153030minmin。将培养将培养基用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在基用旧报
8、纸包裹，放入干热灭菌箱内，在160160170 170 下灭菌下灭菌2 2h h。5 5倒平板倒平板:待培养基冷却到待培养基冷却到50 50 左右时，在酒精灯附近倒平板。左右时，在酒精灯附近倒平板。（倒平板操作见课本）（倒平板操作见课本）2 2d d后观察平板，无杂菌污染后观察平板，无杂菌污染才可用来接种才可用来接种.(试管斜面的制作方法类似试管斜面的制作方法类似)6 6无菌检查：无菌检查：将灭菌的培养基放入将灭菌的培养基放入3737的温室中培养的温室中培养24482448小时，以检查灭菌是否彻底。小时，以检查灭菌是否彻底。第14页，讲稿共26张，创作于星期日倒平板技术倒平板技术倒平板技术倒平
9、板技术第15页，讲稿共26张，创作于星期日 1.1.培养基灭菌后，需要冷却到培养基灭菌后，需要冷却到50 50 左右时，才能左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？答：答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。平板了。2.2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。染培养基。第16页，讲稿共26张，
10、创作于星期日2 2、大肠杆菌的扩大培养、大肠杆菌的扩大培养自学课本自学课本自学课本自学课本P23P23P23P23第17页，讲稿共26张，创作于星期日3 3、分离大肠杆菌（除杂）、分离大肠杆菌（除杂）1 1、方法：、方法：平板划线法和稀释涂布平板法平板划线法和稀释涂布平板法 平板划线法平板划线法:通过接种环在琼脂固体培养基通过接种环在琼脂固体培养基表面连续画线的操作表面连续画线的操作,将聚集的菌钟逐步稀释将聚集的菌钟逐步稀释分散到培养基的表面分散到培养基的表面.第18页，讲稿共26张，创作于星期日第19页，讲稿共26张，创作于星期日第20页，讲稿共26张，创作于星期日 1.1.为什么在操作的第
11、一步以及每次划线之前都为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？接种环吗？为什么？答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划次划线的末
12、端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。免细菌污染环境和感染操作者。第21页，讲稿共26张，创作于星期日 2.2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？行划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。答：以免接种环温度太高，杀死菌种。3.3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？
13、么总是从上一次划线的末端开始划线？答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。第22页，讲稿共26张，创作于星期日4.4.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，为什么要将平板倒置？5.5.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养皿盖与皿底之间的
14、部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？微生物吗？为什么？答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。培养基，造成污染。答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。物。第23页，讲稿共26张，创作于星期日第24页，讲稿共26张，创作于星期日玻璃玻璃三角三角刮刀刮刀第25页，讲稿共26张，创作于星期日感感谢谢大大家家观观看看第26页，讲稿共26张，创作于星期日