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1、2018年5月下旬刊 摘要：家兔热原检测是保证生物制品质量安全的重要检测项目之 一； 笔者主要针对热原试验中家兔的试验次数、 基础体温及体质量 对试验结果有无影响进行分析。将家兔试验次数、 基础体温以及体 质量， 根据 中华人民共和国药典 2 0 1 5 年版 三部通则 1 1 4 2 热原检 查法中的规定进行分组， 并分别进行数据统计学处理。经统计学分 析， 家兔的试验次数及基础体温对试验结果有一定影响， 家兔的体 质量对试验结果影响不明显。 关键词：热原试验；体质量；试验次数；基础体温 1 试验方法 1 . 1 材料 1 . 1 . 1 实验动物 由新疆疾控动物研究中心提供， 体质量在 1
2、 . 7 k g 3 . 0 k g 普通级新西兰白兔 6 9 9 只。 1 . 1 . 2 试验仪器 所用仪器为上海黄海药检仪器有限公司购买的 W R Y - C 型热原测温仪。 1 . 1 . 3 试验样品 由新疆德源生物工程有限公司生产的人血白蛋 白、 人免疫球蛋白、 人静注免疫球蛋白。 1 . 2 试验方法 1 . 2 . 1 预检体温 选用检疫合格， 体质量1 . 7 k g 3 . 0 k g 的家兔， 每 3 0m i n测量 1次体温， 共测 8次， 体温均在 3 8 . 0 3 9 . 6 ， 并且 8次中最高体温减去最低 体温小于 0 . 4 的家兔才能用于热原试验。血液制
3、 品热原检测用家兔在 5 d 内可重复使用 1 次。 1 . 2 . 2 试验操作 根据药典要求， 家兔在试验前至少禁食 1 h ， 并 放置在家兔固定盒中 1 。从测量体温开始， 每 3 0 m i n 测量 1 次， 共测量 2 次， 以 2 次体温 （之差不得大于 0 . 2 ） 的平均值为该兔的正常体温。家兔的正常体 温在 3 8 . 0 3 9 . 6 ， 同组间家兔正常体温之差在 1 . 0 以内。 供试品在注射前应预热至 3 8 ， 按各样品的 规定剂量进行注射。取符合上述规定的 3 只家兔， 自耳缘静脉缓慢注入规定剂量的供试品溶液， 在 1 5 m i n 以内完成。按照上法每
4、 3 0 m i n测量 1次体 温， 共记录 6 次。 该兔的升高温度为 6 次体温中最高 体温与正常体温之差。如 3 只家兔中有 1 只体温高 于 0 . 6 ， 或 3 只家兔体温升高的总和高于 1 . 3 ， 应 重新取 5 只家兔进行复试。 对于体温升高 0 . 6 以上 家兔， 可在休息 2 周后再进行试验； 若供试品不符合 规定， 则组内家兔应全部淘汰， 不得再用于热原试验。 1 . 2 . 3 数据处理方法 数据统计完成后均进行分析。 1 . 3 结果判定 初试中同组内 3 只家兔升温均小于 0 . 6 ， 且 3 只家兔升温总和不得超过 1 . 3 ； 在复试时， 5 只 家
5、兔中仅允许有 1只体温升高 0 . 6 或 0 . 6 以 上， 并且在初试和复试中 8 只家兔的升温总和小于 或等于 3 . 5 ， 判断供试品符合规定。 当家兔升温为 负值时， 均以 0 计。 2 结果 共统计分析了 6 9 9只家兔的热原检查结果。 根据药典三部热原检查中规定的试验次数、 基础 体温、 家兔体质量进行分组 1 。试验次数分为初次用 兔和二次用兔； 不同基础体温分为 3 组 （3 8 . 5 、 3 8 . 5 3 9 . 0 和3 9 . 0 ） ； 按不同体质量分为 3组 （1 . 7 k g 2 . 1 k g 、 2 . 2 k g 2 . 6 k g和 2 . 7
6、 k g 3 . 0 k g ） 。 分别统计升温小于 0 . 4 、 大于等于 0 . 4 、 大于等于 0 . 6 的家兔数量和所占百分比， 结果见 表 1 、 表 2 和表 3 。 经卡方检验 （s i g 值为 0 . 0 4 0 . 0 5 ） 存在显著性 差异， 说明试验次数的不同对试验结果有影响。数 据表明， 初次用兔升温0 . 6 的家兔所占百分比 （8 . 8 % ） 大于二次用兔升温0 . 6 的家兔所占百分 比 （4 . 0 % ） 。通过比较表明， 初次用兔升温变化更明 显， 说明初次用兔对试验结果影响较大。 经卡方检验 （s i g 值为 0 . 0 2 0 . 0
7、5 ） 存在显著性 差异， 说明基础体温的不同对试验结果有影响。数 据表明， 3 组基础体温 （3 8 . 5 、 3 8 . 5 3 9 . 0 和3 9 . 0 ） 升高0 . 6 数量所占百分比分别为 9 . 3 %、 5 . 4 %和 2 . 0 %， 基础体温越低， 升温0 . 6 的 家兔数量所占百分比越大。 表明家兔基础体温越低， 结果中出现体温升高 0 . 6 的概率就会越大。 经卡方检验数据分析， s i g 值为 0 . 8 9 3 0 . 0 5 ， 无显著性差异。说明家兔不同体质量对试验结果影 响不明显。 3 结论 经表 1 数据分析， 初次用兔升温0 . 6 的家兔
8、家 兔 热 原 检 查 结 果 中 影 响 因 素 的 分 析 誗技术交流 55 2018年5月下旬刊 数量所占百分比大于二次用兔， 初次用兔对试验结 果影响较大。初次使用的家兔对外界刺激较敏感， 易造成检测结果不可靠， 须进行复试 2 。有文献报 道， 二次用家兔对试验人员、 试验环境等外界刺激 适应力比初次用兔有所增强， 情绪也较稳定 3 。因 此， 在进行复测时， 为了避免超敏家兔出现假阳性结 果， 可挑选对环境适应力较强的二次家兔进行试验， 减少试验的不准确性， 保证结果的公平性。 经表 2 数据分析， 家兔基础体温越低， 结果中出 现体温升高 0 . 6 的概率就会越大， 家兔对热原
9、的 敏感性增高的可能性也会越大 4 。 在热原检查中， 由 于家兔不同品种或自身因素等。对热原的敏感性可 相差 1 0 倍， 不合格的样品在多次试验后结果会变为 符合规定， 造成结果的不准确性 5 。因此， 在热原试 验过程中， 碰到不确定及结果接近边缘的样品， 若使 用的家兔基础体温偏低， 会造成检测结果不合格或 样品复试率增加。为提高检查结果的公正可信度， 尽可能在一批供试品检测中选取基础体温不同的 3 组家兔。 在使用基础体温低较的家兔时， 当出现结 果不合格或样品需复试时， 应慎重考虑判定结果 2 。 参考文献 1 国家药典委员会编. 中华人民共和国药典 2 0 1 5 年版三部 M
10、. 2 0 1 5 . 2 谭德江， 杜颖， 任珺， 等 中国药典 与 中国生物制品规程 中 家兔热原检查法的比较 J . 中国药事， 2 0 0 5 ， 1 9（5 ） ： 3 0 4 - 3 0 7 . 3 徐文瑜， 任珺， 杜颖， 等. 家兔性别与体温变化对热原结果检查 的影响 J . 实验动物科学与管理， 2 0 0 6 ， 2 3（3 ） ： 2 2 - 2 5 . 4 秦雅英， 张莹， 万峰. 家兔热原实验中预检对实验结果的影响 J . 畜牧兽医科技信息， 2 0 0 5（9 ） ： 6 5 - 6 6 . 表 1不同使用次数的家兔对试验结果的比较 用兔次数 升温区间 0 . 4
11、/ 只0 . 4 / 只0 . 6 / 只总和 / 只 初次用兔3 0 6（7 7 . 3 % ）5 5（1 3 . 9 % ）3 5（8 . 8 % ）3 9 6 二次用兔2 6 3（8 6 . 8 % ）2 8（9 . 2 % ）1 2（4 . 0 % ）3 0 3 a . 0 单元格 （0 . 0 % ）的期望计数少于 5 。最小期望计数为 2 0 . 3 7 。 值d f渐进 S i g .（双侧 ） P e a r s o n 卡方1 1 . 1 1 1 a 20 . 0 0 4 似然比1 1 . 5 4 220 . 0 0 3 线性和线性组合1 0 . 9 9 110 . 0 0
12、1 有效案例中的 N6 9 9 卡方检验 表 2不同基础体温的家兔对试验结果的比较 基础体温 升温区间 0 . 4 / 只0 . 4 / 只0 . 6 / 只总和 / 只 3 8 . 5 2 4 3（7 5 . 7 % ）4 8（1 5 . 0 % ）3 0（9 . 3 % ）3 2 1 a . 0 单元格 （0 . 0 % ）的期望计数少于 5 。最小期望计数为 6 . 8 6 。 值d f渐进 S i g .（双侧 ） P e a r s o n 卡方1 6 . 4 5 7 a 40 . 0 0 2 似然比1 7 . 9 9 240 . 0 0 1 线性和线性组合1 5 . 7 6 210
13、 . 0 0 0 有效案例中的 N6 9 9 卡方检验 3 8 . 5 3 9 . 0 2 3 2（8 4 . 1 % ）2 9（1 0 . 5 % ）1 5（5 . 4 % ）2 7 6 3 9 . 0 9 4（9 2 . 1 % ）6（5 . 9 % ）2（2 . 0 % ）1 0 2 表 3不同体质量的家兔对试验结果的比较 不同体质量 升温区间 0 . 4 / 只0 . 4 / 只0 . 6 / 只总和 / 只 1 . 7 k g 2 . 1 k g1 3 3（8 1 . 1 % ）1 8（1 1 . 0 % ）1 3（7 . 9 % ）1 6 4 a . 0 单元格 （0 . 0 %
14、）的期望计数少于 5 。最小期望计数为 6 . 3 9 。 值d f渐进 S i g .（双侧 ） P e a r s o n 卡方1 . 1 0 7 a 40 . 8 9 3 似然比1 . 0 8 440 . 8 9 7 线性和线性组合0 . 0 0 310 . 9 5 8 有效案例中的 N6 9 9 卡方检验 2 . 2 k g 2 . 6 k g3 6 1（8 2 . 1 % ）5 2（1 1 . 8 % ）2 7（6 . 1 % ）4 4 0 2 . 7 k g 3 . 0 k g7 5（7 8 . 9 % ）1 3（1 3 . 7 % ）7（7 . 4 % ）9 5 技术交流誗 56