第19章平面色谱法.ppt

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1、第19章平面色谱法现在学习的是第1页，共43页第一节第一节 概述概述平面色谱法（平面色谱法（PC）：）：在平面上进行分离在平面上进行分离n纸色谱法纸色谱法 n薄层色谱法薄层色谱法现在学习的是第2页，共43页一、平面色谱法的特点一、平面色谱法的特点固定相一次使用，样品预处理简单，固定相一次使用，样品预处理简单，现在学习的是第3页，共43页二、平面色谱的主要技术参数二、平面色谱的主要技术参数平面色谱定性参数及相平衡参数平面色谱定性参数及相平衡参数比移值比移值 相对比移值相对比移值平面色谱分离评价参数平面色谱分离评价参数分离度分离度平面色谱板效参数平面色谱板效参数理论塔板数理论塔板数 理论塔板高度理

2、论塔板高度现在学习的是第4页，共43页1、平面色谱定性参数及相平衡参数关系、平面色谱定性参数及相平衡参数关系0 LLRif原点到溶剂前沿距离离原点到组分斑点中心距比移值：比移值：溶质移动距离与溶质移动距离与流动相移动距离之比流动相移动距离之比定性参数定性参数现在学习的是第5页，共43页l讨论讨论l Rf与与K有关，即与组分性质、平面板和展开剂的性质有关，即与组分性质、平面板和展开剂的性质有关有关 K大，大，Rf小小l色谱条件一定，色谱条件一定，Rf只与组分性质有关，是平面色谱基本定只与组分性质有关，是平面色谱基本定性参数，说明组分保留行为性参数，说明组分保留行为lRf范围：范围：0 Rf 1

3、Rf=0.20.8（常用）；（常用）；0.30.5（最佳）（最佳）kVKVVRsmmf11相平衡参数相平衡参数ff1RRk现在学习的是第6页，共43页相对比移值相对比移值Rs 讨论讨论参考物与被测组分在完全参考物与被测组分在完全相同条件下展开；可消除相同条件下展开；可消除系统误差，提高重现性和系统误差，提高重现性和可靠性可靠性相对比移值相对比移值Rs与组分、参与组分、参考物性质及色谱条件有关考物性质及色谱条件有关，范围可以大于或小于，范围可以大于或小于121LLRRRffs距离原点到参考物斑点中心离原点到组分斑点中心距（参）（组）参比物参比物i被测物被测物s原点原点L2L1现在学习的是第7页，

4、共43页2、平面色谱分离评价参数、平面色谱分离评价参数分离度：分离度：两相邻斑点中心距离与两斑点平均宽两相邻斑点中心距离与两斑点平均宽度（直径）的比值度（直径）的比值212WWdR相临两斑点间距离越大，斑点越集中，相临两斑点间距离越大，斑点越集中，分离度越大，分离效率越高分离度越大，分离效率越高当当R1.5时，相临斑点可达到基线时，相临斑点可达到基线分离分离现在学习的是第8页，共43页TLC分离度与比移值的关系分离度与比移值的关系Rf=0.3 时时 分离度分离度R最大最大Rf=0.20.5时时 分离度分离度R变化不大变化不大Rf 0.1或或Rf 0.7时时 分离度分离度R急剧下降急剧下降 现在

5、学习的是第9页，共43页3、平面色谱板效参数、平面色谱板效参数2)(16WLn nLH0理论塔板高度理论塔板高度L为原点距斑点中心的距离为原点距斑点中心的距离W为组分斑点的宽度为组分斑点的宽度L0为原点距溶剂前沿的距离为原点距溶剂前沿的距离理论塔板数理论塔板数W 越小，越小，n 越大，越大，H 值越小，板效越高值越小，板效越高现在学习的是第10页，共43页三、平面色谱法操作流程图三、平面色谱法操作流程图活化活化现在学习的是第11页，共43页一、概述一、概述1定义：定义：将固定相均匀涂布在表面光滑的平板上，形将固定相均匀涂布在表面光滑的平板上，形成薄层而进行色谱分离和分析的方法。成薄层而进行色谱

6、分离和分析的方法。第二节、薄层色谱法第二节、薄层色谱法 TLCTLC2分离机制分离机制 吸附薄层色谱吸附薄层色谱 分配薄层色谱分配薄层色谱 空间排阻薄层色谱空间排阻薄层色谱 胶束薄层色谱胶束薄层色谱现在学习的是第12页，共43页二、吸附薄层色谱材料二、吸附薄层色谱材料氧化铝、硅胶氧化铝、硅胶纤维素纤维素、聚酰胺聚酰胺（一）固定相（一）固定相吸附剂吸附剂现在学习的是第13页，共43页p吸附的原因吸附的原因 氢键作用氢键作用吸附活性中心吸附活性中心硅胶含水量硅胶含水量%05152538活性级活性级吸附强弱：吸附强弱：五级五级;级数高级数高,含水量大含水量大,吸附力弱吸附力弱现在学习的是第14页，共

7、43页1）物质极性）物质极性，吸附能力，吸附能力 强极性吸附中心，不易洗脱强极性吸附中心，不易洗脱2）吸水）吸水占用活性位点占用活性位点失活失活p105110OC烘干烘干30min(活化活化)，吸附力最大，吸附力最大 p500OC烘干烘干(不可逆失水不可逆失水)无吸附力无吸附力硅胶具微酸性，分析酸性或中性物质硅胶具微酸性，分析酸性或中性物质 现在学习的是第15页，共43页p碱性（碱性（pH 910）:分离碱性及中性化合物。如生分离碱性及中性化合物。如生物碱等。物碱等。p酸性（酸性（pH 45）:用于分离酸性中性物质。如酸性用于分离酸性中性物质。如酸性色素、氨基酸等。色素、氨基酸等。p中性（中性

8、（pH 7.5）:用途最广，适于分析酸性碱性和中性用途最广，适于分析酸性碱性和中性物质，如生物碱、挥发油、甾体等。物质，如生物碱、挥发油、甾体等。现在学习的是第16页，共43页p吸附的原因吸附的原因氢键。氢键。p吸附强弱：吸附强弱：五级，级数高，含水量大，吸附力弱五级，级数高，含水量大，吸附力弱 氧化铝含水量氧化铝含水量%0361015活性级活性级现在学习的是第17页，共43页p 常用的是聚己内酰胺，商名为锦纶、尼龙常用的是聚己内酰胺，商名为锦纶、尼龙-6、卡普隆、卡普隆等。等。p 吸附的原因吸附的原因氢键氢键 聚酰胺分子内存在着许多酰胺基，可与酚、酸、醌聚酰胺分子内存在着许多酰胺基，可与酚、

9、酸、醌等形成氢键等形成氢键 氢键能力氢键能力强，组分越后出柱强，组分越后出柱现在学习的是第18页，共43页疏水改性硅胶疏水改性硅胶（非极性键合相）（非极性键合相）4.4.改性硅胶改性硅胶 借化学反应方法将有机分子以共价键连接在硅醇基上借化学反应方法将有机分子以共价键连接在硅醇基上，称化学键合固定相。，称化学键合固定相。亲水改性硅胶亲水改性硅胶（极性键合相）（极性键合相）介于极性和疏水改性吸附剂间的色谱选择性介于极性和疏水改性吸附剂间的色谱选择性反相色谱采用高含水溶剂，需低疏水改性硅胶反相色谱采用高含水溶剂，需低疏水改性硅胶现在学习的是第19页，共43页玻板：玻板：5cm10cm、10cm20c

10、m、20cm20cm（二）载板（二）载板 具一定机械强度，化学惰性，耐一定温度、表面平整具一定机械强度，化学惰性，耐一定温度、表面平整、厚度均匀、价格便宜、厚度均匀、价格便宜光滑、平整、洗净后不附水珠、干燥光滑、平整、洗净后不附水珠、干燥二、吸附薄层色谱材料二、吸附薄层色谱材料现在学习的是第20页，共43页含粘结剂固定相：含粘结剂固定相：硅胶硅胶G含含13%15%煅石膏煅石膏 制备硅胶制备硅胶G含含30%煅石膏煅石膏 氧化铝氧化铝G含含9%煅石膏煅石膏不含粘结剂固定相：硅胶不含粘结剂固定相：硅胶H（三）粘结剂（三）粘结剂 加强固定相颗粒的附着力，增加薄层板的润湿性加强固定相颗粒的附着力，增加薄

11、层板的润湿性1）无机粘结剂：煅石膏）无机粘结剂：煅石膏二、吸附薄层色谱材料二、吸附薄层色谱材料现在学习的是第21页，共43页2）有机粘结剂：）有机粘结剂：羧甲基纤维素钠（羧甲基纤维素钠（CMC）0.8%CMC溶液配匀浆涂铺的薄层板强度高，色谱分离性能好注意：不适合浓硫酸显色，易霉变降解注意：不适合浓硫酸显色，易霉变降解（三）粘结剂（三）粘结剂二、吸附薄层色谱材料二、吸附薄层色谱材料现在学习的是第22页，共43页作用：作用：适当波长激发光照射下可以产生均匀的荧光背适当波长激发光照射下可以产生均匀的荧光背景，清晰显示化合物的暗斑景，清晰显示化合物的暗斑短波荧光指示剂：短波荧光指示剂：254nm 锰

12、激活的硅酸锌；钠荧光素，阴极绿锰激活的硅酸锌；钠荧光素，阴极绿长波荧光指示剂：长波荧光指示剂：365nm 银激活的硫化锌、硫化镉；彩蓝银激活的硫化锌、硫化镉；彩蓝（四）荧光指示剂（四）荧光指示剂二、吸附薄层色谱材料二、吸附薄层色谱材料现在学习的是第23页，共43页 硅胶硅胶H不含粘合剂 硅胶硅胶G硅胶和煅石膏混合而成 硅胶硅胶HF254不含粘结剂，含荧光指示剂荧光指示剂 254 nm呈现强绿色荧光背景呈现强绿色荧光背景 硅胶硅胶GF254同时含粘结剂和荧光指示剂荧光指示剂 254 nm呈现强绿色荧光背景呈现强绿色荧光背景硅胶硅胶HF254+365不含粘结剂，含荧光剂荧光剂 254 nm和和35

13、6 nm呈现荧光背景呈现荧光背景现在学习的是第24页，共43页 被分离物质的极性被分离物质的极性 展开剂的极性展开剂的极性 吸附剂的活度吸附剂的活度选择根据选择根据三、吸附剂和流动相的选择：三、吸附剂和流动相的选择：现在学习的是第25页，共43页1、被分离物质的极性、被分离物质的极性烷烃烷烃 烯烃烯烃 醚醚 硝基化合物硝基化合物 二甲胺二甲胺 酯酯 酮酮 醛醛 胺胺 酰胺酰胺 醇醇 酚酚 羧酸羧酸三、吸附剂和流动相的选择：三、吸附剂和流动相的选择：现在学习的是第26页，共43页n 三、吸附剂和流动相的选择：三、吸附剂和流动相的选择：现在学习的是第27页，共43页极性化合物极性化合物选用吸附活性

14、小的（活度级别大的）薄选用吸附活性小的（活度级别大的）薄层板，极性大的强洗脱剂展开层板，极性大的强洗脱剂展开非极性化合物非极性化合物选用吸附活性大的（活度级别小的）选用吸附活性大的（活度级别小的）薄层板，极性小的强洗脱剂展开薄层板，极性小的强洗脱剂展开以感兴趣以感兴趣Rf值是否在值是否在0.30.5间为衡量标准间为衡量标准三、吸附剂和流动相的选择：三、吸附剂和流动相的选择：3、薄层板活度级别选择、薄层板活度级别选择现在学习的是第28页，共43页4、TLC色谱条件选择原则色谱条件选择原则三、吸附剂和流动相的选择：三、吸附剂和流动相的选择：现在学习的是第29页，共43页四、薄层色谱操作过程四、薄层

15、色谱操作过程现在学习的是第30页，共43页四、薄层色谱操作过程四、薄层色谱操作过程p1 1、薄层制备（铺板）、薄层制备（铺板）1份吸附剂份吸附剂+3份粘合剂份粘合剂+水水 调成糊状，均匀涂布薄层板调成糊状，均匀涂布薄层板硅胶硅胶G：自含粘合剂，仅加水。自含粘合剂，仅加水。硅胶硅胶H：不含粘合剂。需另加粘合剂。不含粘合剂。需另加粘合剂。现在学习的是第31页，共43页 薄层放置薄层放置110烘烘30min，干燥器中备用，干燥器中备用 吸附剂活性越高，活性级别越低；吸附剂活性越高，活性级别越低；最好二级或三级最好二级或三级 不可将刚涂布好的薄层板立即烘烤活化不可将刚涂布好的薄层板立即烘烤活化2 2、

16、活化、活化四、薄层色谱操作过程四、薄层色谱操作过程现在学习的是第32页，共43页3 3、点样、点样溶解试样的溶剂尽量避免用水溶解试样的溶剂尽量避免用水配置试样浓度约为配置试样浓度约为0.01%0.1%点样点样四、薄层色谱操作过程四、薄层色谱操作过程点样装置：点样装置：容量毛细管；自动薄层色谱点样仪容量毛细管；自动薄层色谱点样仪现在学习的是第33页，共43页点样原点应小而圆，距板边缘点样原点应小而圆，距板边缘2cm 多次点样（每次挥干后），防多次点样（每次挥干后），防止边缘效应止边缘效应 点样量勿超载，防止拖尾点样量勿超载，防止拖尾 点样勿伤及薄层表面点样勿伤及薄层表面现在学习的是第34页，共4

17、3页展开过程：展开过程：展开室预先用展开剂饱和，平衡系统展开室预先用展开剂饱和，平衡系统 点样薄板一端浸入展开剂展开（距边缘点样薄板一端浸入展开剂展开（距边缘0.51 cm）挥尽溶剂挥尽溶剂 展开室通常为圆形或长方形玻璃缸，缸上具有展开室通常为圆形或长方形玻璃缸，缸上具有磨口玻璃盖，应能密闭。磨口玻璃盖，应能密闭。四、薄层色谱操作过程四、薄层色谱操作过程现在学习的是第35页，共43页光学检出法：直接观察、荧光显示技术光学检出法：直接观察、荧光显示技术试剂显色法：喷雾显色法，浸渍显色法试剂显色法：喷雾显色法，浸渍显色法四、薄层色谱操作过程四、薄层色谱操作过程n薄层色谱常用通用型显色剂薄层色谱常用

18、通用型显色剂 碘蒸气法碘蒸气法 10%硫酸乙醇溶液硫酸乙醇溶液 0.05%荧光黄甲醇溶液荧光黄甲醇溶液现在学习的是第36页，共43页日光，紫外光，显色剂显示日光，紫外光，显色剂显示测出测出Rf值值 相同条件下展开，与已知标准物质对照进行定相同条件下展开，与已知标准物质对照进行定性鉴别。性鉴别。四、薄层色谱操作过程四、薄层色谱操作过程现在学习的是第37页，共43页四、薄层色谱操作过程四、薄层色谱操作过程洗脱方法：洗脱方法：显色后取下斑点，用溶剂定量洗脱，收集洗脱显色后取下斑点，用溶剂定量洗脱，收集洗脱液以适当的方法进行定量测定。液以适当的方法进行定量测定。目视比较法：目视比较法：显色后比较标准系

19、列与样品的斑点颜色或面显色后比较标准系列与样品的斑点颜色或面积大小。积大小。薄层扫描法：薄层扫描法：显色后用薄层扫描仪扫描定量。显色后用薄层扫描仪扫描定量。现在学习的是第38页，共43页1、薄层扫描法检测茶碱中毒者血清中茶碱浓度、薄层扫描法检测茶碱中毒者血清中茶碱浓度2、TLC同时测定同时测定10种精神安定药物血药浓度种精神安定药物血药浓度3、异烟肼中毒快速检验、异烟肼中毒快速检验4、尿液中利福平的测定、尿液中利福平的测定5、薄层扫描法测定血浆中的度冷丁、薄层扫描法测定血浆中的度冷丁五、薄层色谱的应用五、薄层色谱的应用 中草药和中成药的鉴别及成分分析中草药和中成药的鉴别及成分分析 判断合成反应

20、进行的程度判断合成反应进行的程度 药物的纯度和杂质限量试验药物的纯度和杂质限量试验 临床药物分析临床药物分析现在学习的是第39页，共43页2010版药典（二部）采用版药典（二部）采用TLC的品种数量，共的品种数量，共435个个TLC品种数量品种数量硅胶硅胶G254个品种个品种硅胶硅胶G254148个品种个品种硅胶硅胶H15个品种个品种硅胶硅胶HF25412个品种个品种硅藻土硅藻土2个品种个品种微晶纤维素微晶纤维素3个品种个品种氧化铝氧化铝1个品种个品种现在学习的是第40页，共43页2005年版收载薄层色谱定性鉴别年版收载薄层色谱定性鉴别1507项项2010年版新增薄层色谱定性鉴别年版新增薄层色

21、谱定性鉴别2494项项味连 雅连 云连三种黄连的薄层色谱图像种黄连的薄层色谱图像现在学习的是第41页，共43页北五味子与南五味子的薄层色谱鉴别北五味子Fructus Schisandriae chineses南五味子FructusSchisandriae sphenantheraeReferenceggschisandrin（五味子乙素）（五味子乙素）Schizandrin（五味子甲素）（五味子甲素）Schisantherin (Gomisin C)（五味子酯甲）（五味子酯甲）Schisandrin(五味子醇甲）五味子醇甲）现在学习的是第42页，共43页白芷异欧前胡素异欧前胡素欧前胡素欧前胡素 1 2 3 s 4 5 61白芷（浙江）白芷（浙江）2白芷（磐安）白芷（磐安）3白芷（杭州）白芷（杭州）4白芷对照药材白芷对照药材5、6白芷（四川遂宁）白芷（四川遂宁）现在学习的是第43页，共43页