流式细胞术的原理和临床讲稿.ppt

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1、关于流式细胞术的原理和临床第一页，讲稿共五十八页哦 概概 述述 流式细胞术（流式细胞术（Flow Cytometry,FCM）是一种自动分是一种自动分析细胞的高技术，其原理是悬浮在液体中的分散细析细胞的高技术，其原理是悬浮在液体中的分散细胞一个个地依次通过测量区，当每一个细胞通过测胞一个个地依次通过测量区，当每一个细胞通过测量区时产生电信号，这些信号可以代表荧光、光散量区时产生电信号，这些信号可以代表荧光、光散射，光吸收或细胞的阻抗等。这些信号可以被测量、射，光吸收或细胞的阻抗等。这些信号可以被测量、存贮、显示，于是细胞的一系列重要的物理特性和存贮、显示，于是细胞的一系列重要的物理特性和生化特

2、性就被快速地、大量地测定。生化特性就被快速地、大量地测定。第二页，讲稿共五十八页哦 上述特性可以是细胞的大小、活性，核上述特性可以是细胞的大小、活性，核酸的数量、酶、抗原等等。仪器还可以酸的数量、酶、抗原等等。仪器还可以根据所规定的参量把指定的细胞亚群从根据所规定的参量把指定的细胞亚群从整个细胞群体中分选出来。整个细胞群体中分选出来。流式细胞术在当前的细胞生物学、免疫流式细胞术在当前的细胞生物学、免疫学、肿瘤学、血液学、遗传学、病理学、学、肿瘤学、血液学、遗传学、病理学、临床检验学等各领域有着十分广泛的用临床检验学等各领域有着十分广泛的用途。途。第三页，讲稿共五十八页哦 流式细胞术是对悬液中的

3、细胞或细胞器进行快速可流式细胞术是对悬液中的细胞或细胞器进行快速可达每秒钟数千个乃至上万个细胞。这样，它就可与达每秒钟数千个乃至上万个细胞。这样，它就可与显微镜相互补充。显微镜术可以研究组织的结构、显微镜相互补充。显微镜术可以研究组织的结构、细胞定位和荧光在细胞中的分布；而多数流式细胞细胞定位和荧光在细胞中的分布；而多数流式细胞术是一种零分辨率的仪器，它只能测量一个细胞的术是一种零分辨率的仪器，它只能测量一个细胞的总核酸，总蛋白等而不能测量细胞中某一特定部位总核酸，总蛋白等而不能测量细胞中某一特定部位的核酸或蛋白，这是它的不足之处。的核酸或蛋白，这是它的不足之处。第四页，讲稿共五十八页哦 由于

4、现代荧光技术和多参数相关测量技由于现代荧光技术和多参数相关测量技术的发展，流式细胞术在细胞群体或组术的发展，流式细胞术在细胞群体或组成群体的亚群进行定量分析时，又具有成群体的亚群进行定量分析时，又具有其他手段无法比拟的优越性。其他手段无法比拟的优越性。用飞点扫描技术或缝隙扫描技术得到了用飞点扫描技术或缝隙扫描技术得到了细胞形态学方面低分辨率的信息，从而细胞形态学方面低分辨率的信息，从而改变了流式细胞仪零分辨率的传统观点。改变了流式细胞仪零分辨率的传统观点。第五页，讲稿共五十八页哦流式细胞仪的结构nFCM是由细胞流动室、光源、聚光装置、信号检测器、电子计算机及高级别仪器具有的细胞分选装置构成。第

5、六页，讲稿共五十八页哦细胞流动室n细胞流动室是FCM的心脏，它是根据流体力学中的层流鞘液原理设计而成，其结构包括石英小室形成的鞘液腔及插入其中的样品管。细胞呈单个排列通过流动室。第七页，讲稿共五十八页哦光源n常用激光器：常用激光器：n氢离子激光器氢离子激光器 488nm兰色激光兰色激光n氩离子激光器氩离子激光器n氪离子激光器氪离子激光器第八页，讲稿共五十八页哦聚光系统和检测系统n透镜、小孔、多种滤片透镜、小孔、多种滤片n检测器、放大器将光信号变成电脉检测器、放大器将光信号变成电脉冲信号冲信号第九页，讲稿共五十八页哦计算机n信号变成数据文件存储、分析信号变成数据文件存储、分析。第十页，讲稿共五十

6、八页哦 流式细胞仪的工作原理流式细胞仪的工作原理 待测细胞被制备成单个细胞的悬液，经待测细胞被制备成单个细胞的悬液，经特异性荧光染料染色后放入样品管中，特异性荧光染料染色后放入样品管中，在气体的压力下进入流动室。流动室内在气体的压力下进入流动室。流动室内充满鞘液，在鞘液的约束下，细胞排成充满鞘液，在鞘液的约束下，细胞排成单列由流动室的喷嘴喷出，成为细胞液单列由流动室的喷嘴喷出，成为细胞液柱。液柱与入射的激光束垂直相交，相柱。液柱与入射的激光束垂直相交，相交点称为测量区。交点称为测量区。第十一页，讲稿共五十八页哦流式细胞仪的工作原理流式细胞仪的工作原理 通过测量区的细胞被激发产生荧光。在通过测量

7、区的细胞被激发产生荧光。在与入射光束和液柱垂直的方向放置光学与入射光束和液柱垂直的方向放置光学系统（透镜、光阑、滤片和检测器等）系统（透镜、光阑、滤片和检测器等）用以收集荧光信号。图中的阻断滤片用用以收集荧光信号。图中的阻断滤片用于阻挡激发光，二色性反射镜用于选择于阻挡激发光，二色性反射镜用于选择被测荧光波长，荧光检测器是光电倍增被测荧光波长，荧光检测器是光电倍增管（管（PMT），），散射光检测器是光电二极散射光检测器是光电二极管，用来收集前向角散射光（管，用来收集前向角散射光（FSC）。）。第十二页，讲稿共五十八页哦细胞分选（细胞分选（cell sorting）的工作原理的工作原理 液滴形成

8、信号的频率约液滴形成信号的频率约30KHz，此信号此信号加在压电晶体上使之产生同频的机械振加在压电晶体上使之产生同频的机械振动，流动室也就随之振动。于是液柱断动，流动室也就随之振动。于是液柱断裂成一连串均匀的液滴，其形成的速度裂成一连串均匀的液滴，其形成的速度为每秒为每秒3万个。细胞通过喷嘴的速度大约万个。细胞通过喷嘴的速度大约每秒每秒2000个以下，如以个以下，如以2000个计算则个计算则平均每平均每15个液滴中有一个液滴包有细胞，个液滴中有一个液滴包有细胞，而其他液滴无细胞。细胞的性质是在进而其他液滴无细胞。细胞的性质是在进入液滴以前已经被测定了的。入液滴以前已经被测定了的。第十三页，讲稿

9、共五十八页哦细胞分选（细胞分选（cell sorting）的工作原理的工作原理 如果其特性与被选定要进行分选的细胞如果其特性与被选定要进行分选的细胞特性相符，则仪器在这个被选定的细胞特性相符，则仪器在这个被选定的细胞刚形成液滴时给整个液柱充以指定的电刚形成液滴时给整个液柱充以指定的电荷。这样，当被选定的细胞形成液滴时荷。这样，当被选定的细胞形成液滴时就带有特定的电荷，未被选定的细胞形就带有特定的电荷，未被选定的细胞形成的细胞液滴及不包含细胞的空白液滴成的细胞液滴及不包含细胞的空白液滴不被充电，也不带电荷。带有电荷的液不被充电，也不带电荷。带有电荷的液滴向下落入指定的收集器内，从而完成滴向下落入

10、指定的收集器内，从而完成了细胞分类收集的目的。了细胞分类收集的目的。第十四页，讲稿共五十八页哦流式细胞仪的流式细胞仪的 分选原理分选原理第十五页，讲稿共五十八页哦 流式细胞仪原理示意图流式细胞仪原理示意图第十六页，讲稿共五十八页哦 散射光的测量散射光的测量n在流式细胞术中，从光的散射信号可以得到在流式细胞术中，从光的散射信号可以得到非常有价值的信息。因为细胞对光的散射是非常有价值的信息。因为细胞对光的散射是细胞在未遭受任何破坏情况下固有的特性，细胞在未遭受任何破坏情况下固有的特性，所以可以用散射光的信号对未染色的活细胞所以可以用散射光的信号对未染色的活细胞进行分析和分选。进行分析和分选。第十七

11、页，讲稿共五十八页哦 细胞在液流中通过测量区时，经激光照细胞在液流中通过测量区时，经激光照射，细胞向空间射，细胞向空间360立体角的所有方立体角的所有方向散射光线，散射的信号与细胞的大小、向散射光线，散射的信号与细胞的大小、形状，质膜和细胞内部的折射率有关。形状，质膜和细胞内部的折射率有关。经过固定和染色的细胞，因折射率有了经过固定和染色的细胞，因折射率有了变化，故其散射状况与未固定或未染色变化，故其散射状况与未固定或未染色的不同。的不同。第十八页，讲稿共五十八页哦 散射光与细胞参量间的关系与散射角、散射光与细胞参量间的关系与散射角、照射光束的形状、收集散射光立体角的照射光束的形状、收集散射光

12、立体角的大小等都有关。在流式细胞术中常被利大小等都有关。在流式细胞术中常被利用的有前向角散射（用的有前向角散射（FSC）和侧向散射和侧向散射（SSC），），前者亦称前者亦称0散射，后者亦称散射，后者亦称90散射。散射。第十九页，讲稿共五十八页哦荧光测量荧光测量 n荧光信号是由对细胞进行染色的特异性荧光信号是由对细胞进行染色的特异性荧光染料受激后发射的。荧光波长与激荧光染料受激后发射的。荧光波长与激发光波长不同且强度较弱，为此就要使发光波长不同且强度较弱，为此就要使用滤片以滤除非荧光信号并使用灵敏的用滤片以滤除非荧光信号并使用灵敏的探测器。下面我们将分别进行讨论。探测器。下面我们将分别进行讨论。

13、第二十页，讲稿共五十八页哦荧光测量荧光测量n激光与普通光线不同；激光是受激辐射，激光与普通光线不同；激光是受激辐射，普通光线是自发辐射。激光基本是沿着普通光线是自发辐射。激光基本是沿着直线传播，发散角很小，通常在直线传播，发散角很小，通常在10-6球球面度量级的立体角内，必要时很容易聚面度量级的立体角内，必要时很容易聚焦到与细胞同一数量级。激光的亮度高，焦到与细胞同一数量级。激光的亮度高，即在单位面积、单位立体角内输出功率即在单位面积、单位立体角内输出功率特别大。激光还具有良好的单色性，这特别大。激光还具有良好的单色性，这些特点都是贡灯所不具备的。些特点都是贡灯所不具备的。第二十一页，讲稿共五

14、十八页哦荧光测量荧光测量n流式细胞术中使用的多为氩离子激光器，流式细胞术中使用的多为氩离子激光器，亦有用氪离子激光器或染料激光器以获亦有用氪离子激光器或染料激光器以获得不同的谱线者。氩离子激光器是一种得不同的谱线者。氩离子激光器是一种气体激光器，其频率稳定性高、相干性气体激光器，其频率稳定性高、相干性好、寿命长。好、寿命长。第二十二页，讲稿共五十八页哦荧光测量荧光测量n氩离子激光器是通过气体放电使氩离子氩离子激光器是通过气体放电使氩离子电离并激发，实现粒子数反转而产生激电离并激发，实现粒子数反转而产生激光，谱线共十余条，其中绿光光，谱线共十余条，其中绿光514nm和和蓝光蓝光488nm两条谱线

15、最强，几乎占总输两条谱线最强，几乎占总输出功率的出功率的80%。由于这种激光在气体放。由于这种激光在气体放电过程中要使氩离子一次电离必须供给电过程中要使氩离子一次电离必须供给相当大的能量，所以要求有几百伏和每相当大的能量，所以要求有几百伏和每平方毫米几个安培的稳定电源。平方毫米几个安培的稳定电源。第二十三页，讲稿共五十八页哦检测器检测器光电倍增管和硅光电二极管光电倍增管和硅光电二极管n对从紫外到可见光的探测，有二类光电对从紫外到可见光的探测，有二类光电器件可供选择：一类是真空光电器件；器件可供选择：一类是真空光电器件；另一类是半导体器件。后者在某些方面另一类是半导体器件。后者在某些方面有一定优

16、点，如在强光照射时过载特性有一定优点，如在强光照射时过载特性较好，但在某些方面则明显地不及真空较好，但在某些方面则明显地不及真空光电器件。下面对光电倍增管和硅光电光电器件。下面对光电倍增管和硅光电二极管作一简单的比较二极管作一简单的比较。第二十四页，讲稿共五十八页哦n在在200900nm谱区光电倍增管有很好谱区光电倍增管有很好的响应，量子效率高，而硅光电管则相的响应，量子效率高，而硅光电管则相当差。光电倍增的时间响应比半导体器当差。光电倍增的时间响应比半导体器件快得多，特殊的光电倍增管上升时间件快得多，特殊的光电倍增管上升时间可仅为可仅为ns数量级，而硅光电管在考虑到数量级，而硅光电管在考虑到

17、分布电容和负载时，实际上升时间可能分布电容和负载时，实际上升时间可能达数达数10US。第二十五页，讲稿共五十八页哦n至于探测器的灵敏阈即探测极限，则与至于探测器的灵敏阈即探测极限，则与信噪比有关。假定信噪比等于信噪比有关。假定信噪比等于1，用光电，用光电倍增管在探测波长为倍增管在探测波长为400nm的谱线时，的谱线时，能测得的最小信号功率约为能测得的最小信号功率约为210-17w，而硅光电管在波长而硅光电管在波长1060nm处能探测到处能探测到的最小功率大于的最小功率大于210-13W，两者相差两者相差四个数量级。四个数量级。第二十六页，讲稿共五十八页哦n光电倍增管的增益可从光电倍增管的增益可

18、从10 3到到10 8连续连续可调，而一般硅光电管没有增益。在光可调，而一般硅光电管没有增益。在光线较弱时光电倍增管有很好的稳定性，线较弱时光电倍增管有很好的稳定性，但是当光线很强时硅光电管就比光电倍但是当光线很强时硅光电管就比光电倍增管稳定多了，所以在探测增管稳定多了，所以在探测FSC时用硅时用硅光电管是合适的。由于荧光比光电管是合适的。由于荧光比SSC较较FSC弱得多，这时探测器灵敏度是主要弱得多，这时探测器灵敏度是主要问题，因而应采用光电倍增管。问题，因而应采用光电倍增管。第二十七页，讲稿共五十八页哦自发荧光 n未染色的细胞受到光照射后所发出的荧未染色的细胞受到光照射后所发出的荧光称自发

19、荧光。用流式细胞计测定细胞光称自发荧光。用流式细胞计测定细胞的特异性荧光染料的荧光时，这种自发的特异性荧光染料的荧光时，这种自发荧光对所欲测定的特异性荧光是一种本荧光对所欲测定的特异性荧光是一种本底信号，自发荧光在多种情况下都会干底信号，自发荧光在多种情况下都会干扰特异性荧光信号，尤其是对低水平结扰特异性荧光信号，尤其是对低水平结合的荧光抗体它能减低染色的和未染色合的荧光抗体它能减低染色的和未染色的细胞间的区别，使我们难以确定细胞的细胞间的区别，使我们难以确定细胞中荧光信号的水平。中荧光信号的水平。第二十八页，讲稿共五十八页哦n自发荧光的强弱与细胞的大小、细胞的自发荧光的强弱与细胞的大小、细胞

20、的类型、激发光的波长、发射光的检测范类型、激发光的波长、发射光的检测范围等都有关系。产生自发荧光的分子可围等都有关系。产生自发荧光的分子可能是正常细胞的组成成分如核黄素、细能是正常细胞的组成成分如核黄素、细胞色素等。这些成分在较大的细胞中含胞色素等。这些成分在较大的细胞中含量较多，相应的自发荧光也就强一些量较多，相应的自发荧光也就强一些。第二十九页，讲稿共五十八页哦n培养的细胞中死细胞比活细胞的自发荧培养的细胞中死细胞比活细胞的自发荧光要强，在某些细胞样品如脾和骨髓中，光要强，在某些细胞样品如脾和骨髓中，除了含有淋巴细胞和其他低自发荧光的除了含有淋巴细胞和其他低自发荧光的细胞外还可能会有一些占

21、不同比例的亮细胞外还可能会有一些占不同比例的亮细胞，它们会干扰用免疫荧光方法本应细胞，它们会干扰用免疫荧光方法本应能检测出来的稀有的、细胞数目较少的能检测出来的稀有的、细胞数目较少的亚群。亚群。第三十页，讲稿共五十八页哦n为减少自发荧光，应选用较亮的荧光染为减少自发荧光，应选用较亮的荧光染料，还应使用与荧光发射光谱相匹配的料，还应使用与荧光发射光谱相匹配的光学品质优良的滤片系统。利用较长波光学品质优良的滤片系统。利用较长波长的光线，如染料激光器的激光做为激长的光线，如染料激光器的激光做为激发光源，也可减弱自发荧光。最后，对发光源，也可减弱自发荧光。最后，对自发荧光还可用电子线路补偿的方法将自发

22、荧光还可用电子线路补偿的方法将自发荧光补偿掉。自发荧光补偿掉。第三十一页，讲稿共五十八页哦细胞群体的细胞群体的DNA直方图直方图n流式细胞计测量的结果可为一数字矩阵，流式细胞计测量的结果可为一数字矩阵，此矩阵可用一个或数个图形来表示。下此矩阵可用一个或数个图形来表示。下面我们讨论一下，一个细胞群体的面我们讨论一下，一个细胞群体的DNA直方图的图形。直方图的图形。第三十二页，讲稿共五十八页哦n设一个指数生长的细胞群体全部细胞都设一个指数生长的细胞群体全部细胞都处于增殖状态，用细胞动力学的语言说，处于增殖状态，用细胞动力学的语言说，就是增殖比是就是增殖比是1。细胞群体经染色后。细胞群体经染色后,由

23、由于每个细胞结合的染料与于每个细胞结合的染料与DNA含量成正含量成正比。由于比。由于G1期细胞的期细胞的DNA含量为含量为2C，G2和和M期细胞期细胞DNA含量为含量为4C，S期细胞期细胞的的DNA含量在含量在2C4C之间。之间。第三十三页，讲稿共五十八页哦n于是，从理论上说，这样一个群体的于是，从理论上说，这样一个群体的DNA直方图应该是：即直方图应该是：即G1期细胞全体都在同期细胞全体都在同一荧光道上一荧光道上63道，道，G2和和M期细胞则位于期细胞则位于2*63=126道处，道处，S期细胞位于期细胞位于63126道之间，由于道之间，由于DNA合成速率不是均一的，合成速率不是均一的，因而在

24、这一段范围内不会是均匀分布。因而在这一段范围内不会是均匀分布。第三十四页，讲稿共五十八页哦第三十五页，讲稿共五十八页哦细胞周期和DNA分布直方图 A细胞周期 B DNA直方图的理论分布C 实际的DNA直方图第三十六页，讲稿共五十八页哦第三十七页，讲稿共五十八页哦流式细胞仪的技术指标流式细胞仪的技术指标 1.荧光分辨率荧光分辨率 是表明仪器测量所能达到是表明仪器测量所能达到的最大精度，通常用变异系数表示。显的最大精度，通常用变异系数表示。显然它与被其测定的标准样品有关。然它与被其测定的标准样品有关。2.荧光灵敏度荧光灵敏度 以能检测到最少的以能检测到最少的FITC分分子来表示，即微球上最少标有多

25、少个子来表示，即微球上最少标有多少个FITC分子时刚好能被检测到，即定义为分子时刚好能被检测到，即定义为荧光灵敏度。荧光灵敏度。第三十八页，讲稿共五十八页哦n3前向角散射光灵敏度前向角散射光灵敏度 以前向角散射以前向角散射光最小能检测到的颗粒直径表示。一般光最小能检测到的颗粒直径表示。一般仪器能检测到的最小的直径在仪器能检测到的最小的直径在0.3um左左右。右。n4前向角散射光分辨率前向角散射光分辨率 以变异系数表以变异系数表示。一般约在示。一般约在2.0%。第三十九页，讲稿共五十八页哦 5分析分析/分选速度分选速度 分析速度可达每秒分析速度可达每秒5000-10000个细胞，分选速度为每秒个

26、细胞，分选速度为每秒5000个细胞通过测量区。个细胞通过测量区。6.分选纯度分选纯度 分选纯度是个比较复杂的分选纯度是个比较复杂的问题，它不但与仪器精度有关，而且与问题，它不但与仪器精度有关，而且与被分选的细胞亚群在整个群体中的相对被分选的细胞亚群在整个群体中的相对位置也有关系。如果被分选的亚群在直位置也有关系。如果被分选的亚群在直方图或二维点图上可清晰地分辨出来且方图或二维点图上可清晰地分辨出来且与其他亚群无重叠，则分选结果的纯度与其他亚群无重叠，则分选结果的纯度就高，反之就低。就高，反之就低。第四十页，讲稿共五十八页哦n7.分选收获率分选收获率 定义为通过测量区应被分定义为通过测量区应被分

27、选的细胞如果有选的细胞如果有100个，实际落到指定个，实际落到指定收集器中的数目为收集器中的数目为95个，此称为收获率个，此称为收获率95%。一般应在。一般应在90%以上。收获率与以上。收获率与分选纯度是呈负相关。分选纯度是呈负相关。除以上除以上7个参数外，还有样品浓度，同个参数外，还有样品浓度，同时可测参数、光源、喷孔尺寸、计算机时可测参数、光源、喷孔尺寸、计算机配置等参数或指标。配置等参数或指标。第四十一页，讲稿共五十八页哦细胞的参量和荧光探针细胞的参量和荧光探针 流式细胞术能够测量细胞的很多参量。流式细胞术能够测量细胞的很多参量。可分为两类：一类是内部参量，指不用可分为两类：一类是内部参

28、量，指不用任何荧光探针标记就可测量的细胞参量；任何荧光探针标记就可测量的细胞参量；另一类是外部参量，指需要外加荧光探另一类是外部参量，指需要外加荧光探针标记的细胞参量。同时又可将细胞参针标记的细胞参量。同时又可将细胞参量分为结构参量和功能参量，结构参量量分为结构参量和功能参量，结构参量描述细胞的形态特征和化学组成，功能描述细胞的形态特征和化学组成，功能参量描述细胞的理化特征。这被称为细参量描述细胞的理化特征。这被称为细胞参量的二维分类。胞参量的二维分类。第四十二页，讲稿共五十八页哦n测量细胞的外部参量必须用荧光探针进测量细胞的外部参量必须用荧光探针进行标记。荧光探针（荧光染料）是探测行标记。荧

29、光探针（荧光染料）是探测细胞内结构的非常灵敏的工具。细胞内结构的非常灵敏的工具。第四十三页，讲稿共五十八页哦常用的荧光素nFITC 异硫氰酸基荧光素异硫氰酸基荧光素 488nPE 藻红蛋白藻红蛋白 545nPI 碘化丙啶碘化丙啶 490nEB 溴化乙啶溴化乙啶 480nAO 丫啶橙丫啶橙 490nTRITC 四甲基若丹明四甲基若丹明 554nTexas Red 德州红德州红 355第四十四页，讲稿共五十八页哦参数参数 结构结构 功能功能 内部 细胞大小、形状，细胞质的颗粒 氧化还原状态 性，色素量，蛋白荧光 外部 DNA量、碱基比例，染色体结构 膜的完整性，通透性，酶 RNA量，总蛋白，碱性蛋

30、白 活性，内吞性，表面电荷，表面糖类。细胞内受体，DNA合成，膜的流动性或微粘度，细 胞质/线粒体膜 电位，膜结合 的钙离子，细胞内PH第四十五页，讲稿共五十八页哦数据分析数据分析一、数据的显示一、数据的显示 通常可分一维单参数直方图、二维点图通常可分一维单参数直方图、二维点图二维等高图和假三维图等几种，以下分二维等高图和假三维图等几种，以下分别讲述。别讲述。第四十六页，讲稿共五十八页哦二维点阵图第四十七页，讲稿共五十八页哦二维点阵图分析外周淋巴细胞亚群二维点阵图分析外周淋巴细胞亚群第四十八页，讲稿共五十八页哦二维点阵图分析外周二维点阵图分析外周T细胞淋巴瘤细胞淋巴瘤第四十九页，讲稿共五十八页

31、哦n1单参数直方图单参数直方图 是用得最多的图形，是用得最多的图形，可用来定性及定量分析。图中的横坐标可用来定性及定量分析。图中的横坐标表示荧光信号或散射光信号强度的相对表示荧光信号或散射光信号强度的相对值，单位为值，单位为“道数道数”。直方图的纵坐标。直方图的纵坐标通常代表细胞出现的频率或相对细胞数，通常代表细胞出现的频率或相对细胞数，绝对细胞数较少使用。绝对细胞数较少使用。第五十页，讲稿共五十八页哦DNA直方图 第五十一页，讲稿共五十八页哦双参数点阵图与直方图 2二维点图 当需要研究两个或更多的测量定量关系时，可采用二维点图的显示方式。第五十二页，讲稿共五十八页哦 二维等高图二维等高图 由类似地图上的等高线组成由类似地图上的等高线组成第五十三页，讲稿共五十八页哦假三维图假三维图 实际上与二维点图相等，只是用计算机技术将它画成实际上与二维点图相等，只是用计算机技术将它画成假三维图。假三维图。第五十四页，讲稿共五十八页哦多维数据的显示 目前我们只能依次显示为，如果数据关系较复杂，可用“一调二”或“二调一”的技术。第五十五页，讲稿共五十八页哦非参数分析 常用于单参数直方图的定量分析。不使用任何数学模型，也没有引入任何变量。也可称为直观分析法。第五十六页，讲稿共五十八页哦 DNA直方图的比较分析 第五十七页，讲稿共五十八页哦感谢大家观看感谢大家观看第五十八页，讲稿共五十八页哦