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1、关于高中生物基因工程现在学习的是第1页，共63页现在学习的是第2页，共63页现在学习的是第3页，共63页现在学习的是第4页，共63页现在学习的是第5页，共63页现在学习的是第6页，共63页现在学习的是第7页，共63页现在学习的是第8页，共63页现在学习的是第9页，共63页识别序列 大多数限制酶的识别序列由6个核苷酸组成。也有少数限制酶识别序列由4、5、或8个核苷酸组成。现在学习的是第10页，共63页现在学习的是第11页，共63页现在学习的是第12页，共63页现在学习的是第13页，共63页平末端平末端现在学习的是第14页，共63页现在学习的是第15页，共63页现在学习的是第16页，共63页E.c
2、oliDNA连接酶 从大肠杆菌中分离得到的。只能用于粘性末端的连接T4DNA连接酶 从T4噬菌体中分离得到的。既能用于粘性末端的连接，又能用于平末端的连接，但是平末端的连接效率低。现在学习的是第17页，共63页为什么要用运载体？现在学习的是第18页，共63页现在学习的是第19页，共63页现在学习的是第20页，共63页现在学习的是第21页，共63页现在学习的是第22页，共63页原核细胞的基因结构(补充内容）非编码区非编码区编码区编码区上游 编码区下游 与RNA聚合酶结合位点启动子终止子不编码蛋白质。：编码蛋白质,连续不间断编码区非编码区原核细胞的 基因结构调控遗传信息表达,上 游有启动子，下游有
3、终止子现在学习的是第23页，共63页真核细胞的基因结构（补充内容）编码区非编码区非编码区与RNA聚合酶结合位点内含子 外显子 启动子终止子编码区上游 编码区下游 真核细胞的 基因结构编码区非编码区外显子：能编码蛋白质的序列内含子：不能编码蛋白质的序列：有调控作用,上游有启动子，下游有终止子非编码序列：包括非编码区和内含子现在学习的是第24页，共63页原核细胞真核细胞不同点编码区是_的编码区是间隔的、_的相同点都由能够编码蛋白质的_和具有调控作用的_区组成的原核细胞与真核细胞的基因结构比较连续不连续编码区非编码现在学习的是第25页，共63页现在学习的是第26页，共63页供体生物细胞取出DNA用限
4、制酶剪去多余部分目的基因限制酶现在学习的是第27页，共63页1、目的基因的获取1目的基因主要是指_编码蛋白质的结构基因请举出三个以上的例子2获取目的基因的常用方法（1）从基因文库中获取（2）利用PCR技术扩增（3）人工合成现在学习的是第28页，共63页概念：基因文库 （gene library）基因组文库部分基因文库（如cDNA文库）将含有某种生物不同基因的许多DNA片段,导入受体菌的群体中储存,各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因,称为基因文库(gene library)现在学习的是第29页，共63页基因组文库:基因文库中包含了一种生物所有的基因,这种基因文库叫做基因组文库.部分基因文库:
5、基因文库中包含了一种生物的一部分基因,这种基因文库叫做部分基因文库.现在学习的是第30页，共63页基因组文库与部分基因文库的关系现在学习的是第31页，共63页cDNA文库的构建mRNA 反转录cDNA(互补DNA）DNA聚合酶双链DNA反转录法：基因重组反转录酶mRNAcDNA现在学习的是第32页，共63页基因组DNA文库cDNA文库基因组DNA文库与cDNA文库的比较现在学习的是第33页，共63页如何从基因文库中得到所需要的基因？依据：目的基因的有关信息。如：根据基因的核苷酸序列 基因的功能基因在染色体上的位置 基因的转录产物mRNA 基因翻译产物蛋白质 等特性。现在学习的是第34页，共63
6、页利用PCR技术扩增目的基因PCR聚合酶链式反应 是一项生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。通过此技术，可获取大量的目的基因。现在学习的是第35页，共63页现在学习的是第36页，共63页 人工合成人工合成根据已知的氨基酸序列合成DNA 蛋白质的氨基酸序列mRNA的核苷酸序列结构基因的核苷酸序列推测推测目的基因化学合成现在学习的是第37页，共63页3、基因表达载体（重组质粒）的构建（1）用一定的_切割质粒，使其出现一个切口，露出_。（2）用_切断目 的基因，使其产生_ _。（3）将切下的目的基因片段插入质粒的_处，再加入适量_，形成了一个重组 DNA分子（重组质粒）限制酶黏性末端同一种限制
7、酶的黏性末端切口DNA连接酶相同1过程:现在学习的是第38页，共63页2基因表达载体的组成：它们有什么作用？a、目的基因b、启动子c、终止子d、标记基因位于基因的首端,是mRNA结合位点位于基因的末端,终止转录检测目的基因是否导入受体细胞现在学习的是第39页，共63页现在学习的是第40页，共63页质粒目的基因限制酶处理一个切口两个黏性末端两个切口获得目的基因DNA连接酶表达载体同一种过程:现在学习的是第41页，共63页2、基因表达载体的作用a、使目的基因在受体细胞中稳定存在并遗传给子代b、同时使目的基因能表达和发挥作用思考：作为基因工程表达载体，只需含有目的基因就可以完成任务吗？为什么？现在学
8、习的是第42页，共63页现在学习的是第43页，共63页现在学习的是第44页，共63页现在学习的是第45页，共63页1、将目的基因导入植物细胞（1）农杆菌转化法特点:能感染双子叶植物和祼子植物,对单子叶植物无感染能力Ti质粒的TDNA可转移至受体细胞并整合到其染色体上转化过程:Ti质粒目的基因构建表达载体导入植物细胞插入植物细胞染色DNA表达新性状转入农杆菌现在学习的是第46页，共63页（2）基因枪法 基因枪法又称微弹轰击法，是利用压缩气体产生的动力，将包裹在金属颗粒表面的表达载体DNA打入受体细胞中，使目的基因与其整合并表达的方法。现在学习的是第47页，共63页（3）花粉通道法 植物花粉在柱头
9、上萌发后，花粉管要穿过花柱直通胚囊。花粉管通道法就是在植物受粉后，花粉形成的花粉管还未愈合前，剪去柱头，然后，滴加DNA（含目的基因），使目的基因借助花粉管通道进入受体细胞。现在学习的是第48页，共63页2、将目的基因导入动物细胞方法:显微注射技术操作程序:提纯含目的基因表达载体取受精卵显微注射移植到子宫受精卵发育新性状动物现在学习的是第49页，共63页3、将目的基因导入微生物细胞常用法：Ca2+处理常用菌：大肠杆菌微生物作受体细胞原因：繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少过程：Ca2+处理大肠杆菌感受态细胞表达载体与感受态细胞混合感受态细胞吸收DNA现在学习的是第50页，共63页现在学习的是第
10、51页，共63页(四)目的基因的检测与鉴定检测导入检测：目的基因是否导入受体细胞方法DNA分子杂交表达检测转录检测分子杂交翻译检测抗原抗体杂交分子检测法鉴定抗虫鉴定抗病鉴定活性鉴定等个体水平的鉴定现在学习的是第52页，共63页现在学习的是第53页，共63页知识延伸DNA分子杂交技术 该方法是根据碱基互补配对原则，把互补的双链DNA解开，把单股的DNA小片段用同位素、荧光分子或化学发光催化剂等进行标记，之后同被检测的DNA中的同源互补序列杂交，从而检出所要查明的DNA或基因。现在学习的是第54页，共63页现在学习的是第55页，共63页DNA附着在膜上硝化纤维素加探针报告基因（含荧光素分子）变性DNA杂交（如检测SARS病毒等）abcd现在学习的是第56页，共63页复习题1）将目的基因导入受体细胞有哪些方法?(试举例说明)2）简述农杆菌转化法现在学习的是第57页，共63页非编码区非编码区编码区RNA聚合酶结合位点外显子内含子终止子基因的结构启动子原核真核现在学习的是第58页，共63页现在学习的是第59页，共63页现在学习的是第60页，共63页现在学习的是第61页，共63页现在学习的是第62页，共63页感谢大家观看现在学习的是第63页，共63页