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1、第1页，此课件共62页哦1.设计原则：对照性原则：设对照组，应有可比性，分为自体对照和组间对照一致性原则：对照组和试验组除处理因素外，其他因素保持一致第2页，此课件共62页哦重复性原则 同一处理要设多个样本例数，为估计试验误差、降低试验误差、增强代表性，提高实验结果的精确度随机性原则：随机分组客观性原则 实验设计、选择观察指标以及结果判断要客观第3页，此课件共62页哦2.差异的控制：差异的控制：差异的来源：实验者；动物；动物与环境的相互作用实验者带来的差异 实验过程的实施：不准确的测量 第4页，此课件共62页哦u动物固有的差异动物来源不一饲养管理的差别动物生活环境不同动物健康状况第5页，此课件
2、共62页哦u动物与环境相互作用引起的差异群居因素，每个笼盒饲养动物数量动物与实验操作过程之间的相互作用引起饲养操作与实验操作的顺序实验操作引发的动物之间的影响第6页，此课件共62页哦 明确实验所用动物的品种、品系、规格、等级、以及实验的大致时间表 填写动物申领计划表，教研室主任签字生效 填写动物领用表,确定所领动物的品种、品系、规格、数量第7页，此课件共62页哦l小鼠的抓取和固定小鼠的抓取和固定抓取方法抓取方法 图61 小鼠抓取第8页，此课件共62页哦 图 小鼠保定第9页，此课件共62页哦 抓取方法抓取方法 固定方法固定方法:徒手固定徒手固定;固定板固定固定板固定;卵圆钳固定卵圆钳固定第10页
3、，此课件共62页哦抓取方法抓取方法 固定方法固定方法 徒手固定徒手固定固定板固定固定板固定 图 豚鼠抓取和保定第11页，此课件共62页哦抓取方法抓取方法 固定方法固定方法徒手固定徒手固定;盒式固定盒式固定;台式固定台式固定 第12页，此课件共62页哦图 兔抓取和保定第13页，此课件共62页哦抓取方法抓取方法 固定方法固定方法 慢性试验中犬的固定方法慢性试验中犬的固定方法 急性试验中犬的固定方法急性试验中犬的固定方法:头部的固定头部的固定;四肢固定四肢固定 第14页，此课件共62页哦 图 狗嘴捆绑保定的方法第15页，此课件共62页哦 猪的抓取与固定猪的抓取与固定 抓取方法抓取方法固定方法固定方法
4、第16页，此课件共62页哦猴的抓取和固定猴的抓取和固定 抓取方法抓取方法固定方法固定方法 第17页，此课件共62页哦 动物的编号与标记：动物的编号与标记：常用的标记液：常用的标记液：3%5%苦味酸溶液（黄色）苦味酸溶液（黄色）0.5%中性红或碱性品红溶液（红色）中性红或碱性品红溶液（红色）2%硝酸银溶液（咖啡色，涂后需光照硝酸银溶液（咖啡色，涂后需光照10分钟）分钟）煤焦油酒精溶液（黑色）煤焦油酒精溶液（黑色）第18页，此课件共62页哦图 个体染色标记法第19页，此课件共62页哦编号原则：编号原则：先左后右，从前到后。左前肢记为先左后右，从前到后。左前肢记为1 1号号，左侧腹部为，左侧腹部为2
5、 2号，左后肢号，左后肢3 3号，头顶部为号，头顶部为4 4号，腰背部号，腰背部5 5号，尾基部号，尾基部6 6号，右前肢号，右前肢7 7号，号，右侧腹部右侧腹部8 8号，右后肢号，右后肢9 9号。编号超过号。编号超过1010时时，可使用两种不同颜色的溶液，把一种颜，可使用两种不同颜色的溶液，把一种颜色作为个位数，另一种为十位数。色作为个位数，另一种为十位数。第20页，此课件共62页哦 1.剪毛法剪毛法 2.拔毛法拔毛法 3.剃毛法剃毛法 4.脱毛法脱毛法常用的化学药品：常用的化学药品：硫化钡（硫化钡（BaSBaS）、硫化钠（）、硫化钠（NaSNaS）、硫化钙（）、硫化钙（CaSCaS）第21
6、页，此课件共62页哦常用的麻醉剂常用的麻醉剂 1.挥发性麻醉剂挥发性麻醉剂:乙醚、氯仿等乙醚、氯仿等 2.非挥发性麻醉剂：非挥发性麻醉剂：苯巴比妥钠、戊巴比苯巴比妥钠、戊巴比妥钠、硫喷妥钠等巴比妥类的衍生物，盐妥钠、硫喷妥钠等巴比妥类的衍生物，盐酸氯胺酮、水合氯醛等酸氯胺酮、水合氯醛等 3.中药麻醉剂：中药麻醉剂：洋金花、东莨菪碱等洋金花、东莨菪碱等 第22页，此课件共62页哦其他麻醉辅助用试剂：镇痛剂：芬太尼、埃托菲等 镇静剂：氟阿尼酮、乙酚丙嗪等 抗胆碱药：阿托品、格隆溴铵等 肌松剂：筒箭毒碱、泮库溴铵等 其它：-2激动剂美托咪定，对狗、猫、兔及大多数啮齿类动物可产生良好的镇静和镇痛效果第
7、23页，此课件共62页哦动物的麻醉方法动物的麻醉方法1全身麻醉全身麻醉 吸入法吸入法:腹腔和静脉给药麻醉法腹腔和静脉给药麻醉法 2.局部麻醉局部麻醉:盐酸普鲁卡因、盐酸可卡因、利盐酸普鲁卡因、盐酸可卡因、利多卡因多卡因第24页，此课件共62页哦 麻醉注意事项麻醉注意事项:静脉注射必须缓慢，同时观察肌肉紧张性、角膜反射和对皮肤夹捏的反应，当这些活动明显减弱或消失时，停止注射。麻醉时要注意保温。保温方法有：实验桌内装灯，电褥，台灯照射等 作慢性实验时，在寒冷季节，麻醉剂在注射前应加热至动物体温水平。注意保持动物的呼吸道的通畅，麻醉前禁食.第25页，此课件共62页哦 实验动物的给药方法主要分为注射法
8、和实验动物的给药方法主要分为注射法和投入法两种，注射法又分为：皮下注射、肌投入法两种，注射法又分为：皮下注射、肌肉注射、腹腔注射、脑膜下注射、脑内注射肉注射、腹腔注射、脑膜下注射、脑内注射、胸腔内注射、腰椎内注射、静脉注射、关、胸腔内注射、腰椎内注射、静脉注射、关节腔注射和心内注射等方法，投入法可分为节腔注射和心内注射等方法，投入法可分为：鼻腔内投入、胃腔内投入、肠管内投入、：鼻腔内投入、胃腔内投入、肠管内投入、气管内投入以及经口腔投入。气管内投入以及经口腔投入。第26页，此课件共62页哦灌胃（灌胃（i.g）:动物要固定好；头颈部保持平展；要动物要固定好；头颈部保持平展；要沿着口角进针，再顺着
9、食管方向插入胃内；决不可沿着口角进针，再顺着食管方向插入胃内；决不可进针不顺就硬向里插。进针不顺就硬向里插。皮下注射（皮下注射（s.c）:常选用颈背部皮肤。常选用颈背部皮肤。第27页，此课件共62页哦 图 大小鼠的灌胃第28页，此课件共62页哦皮内注射（皮内注射（i.d）:观察皮肤血管的通透性变化及观观察皮肤血管的通透性变化及观察皮内反应，多用于接种、致敏实验等。雄性较雌性察皮内反应，多用于接种、致敏实验等。雄性较雌性皮肤紧密，注射难度大。皮肤紧密，注射难度大。肌肉注射（肌肉注射（i.mi.m）：）：较少应用较少应用 腹腔注射（腹腔注射（i.pi.p）:静脉注射（静脉注射（i.v）：）：一般采
10、用尾静脉注射。小鼠尾部背一般采用尾静脉注射。小鼠尾部背腹各有一根动脉，两侧各有一根静脉。腹各有一根动脉，两侧各有一根静脉。第29页，此课件共62页哦 图 小鼠腹腔注射第30页，此课件共62页哦 图 小鼠尾静脉注射第31页，此课件共62页哦 灌胃灌胃:左手按徒手固定方式固定大鼠左手按徒手固定方式固定大鼠,使大鼠伸开两前使大鼠伸开两前肢肢,手掌握住大鼠背。方法与小鼠相同。手掌握住大鼠背。方法与小鼠相同。皮下注射：皮下注射：常选在左侧下腹部或后腿皮肤处，方法同常选在左侧下腹部或后腿皮肤处，方法同小鼠。小鼠。皮内注射：皮内注射：常选用背部脊柱两侧的皮肤，方法同小鼠。常选用背部脊柱两侧的皮肤，方法同小鼠
11、。第32页，此课件共62页哦肌肉注射：肌肉注射：一般选择股二头肌注射，但应一般选择股二头肌注射，但应避免伤及坐骨神经，否则会导致后肢瘫痪避免伤及坐骨神经，否则会导致后肢瘫痪 腹腔注射：腹腔注射：用左手的大拇指、食指和中指用左手的大拇指、食指和中指从大鼠的前肢和头部后面抓住大鼠，同时从大鼠的前肢和头部后面抓住大鼠，同时用身体抵住大鼠的两后肢使之固定，使腹用身体抵住大鼠的两后肢使之固定，使腹部向上并伸展，注射方法与小鼠相同。部向上并伸展，注射方法与小鼠相同。静脉注射：静脉注射：尾静脉尾静脉第33页，此课件共62页哦经口给药：固体药物的投入液体药物的投入皮下注射：大腿内侧面、背部、肩部等皮下脂肪少的
12、部位皮内注射：脊柱两侧第34页，此课件共62页哦肌肉注射：大腿外侧肌肉腹腔注射静脉注射：耳缘静脉外侧跖静脉第35页，此课件共62页哦灌胃：确保灌胃管插入胃内；药液推完后将残留在灌胃管内的药物用水冲入胃内，确保给药剂量的准确皮内注射：背部脊柱两侧的皮肤皮下注射：背部和腿部皮肤肌肉注射腹腔注射静脉注射：耳缘静脉第36页，此课件共62页哦 图 兔的灌胃第37页，此课件共62页哦 图 兔的耳静脉注射第38页，此课件共62页哦经口给药：液体药物的投入：同兔固体药物的投入皮下注射肌肉注射腹腔注射静脉注射：头静脉、小隐静脉、正中静脉、大隐静脉等第39页，此课件共62页哦 图 狗的小隐静脉注射第40页，此课件
13、共62页哦经口给药：固体药物的投入液体药物的投入皮下注射肌肉注射静脉注射第41页，此课件共62页哦图 猴的后肢皮下静脉注射第42页，此课件共62页哦 猪的给药途径和方法猪的给药途径和方法 灌胃、皮下（耳根）、皮内（耳壳外侧或腹侧）、腹腔注射、静脉注射（耳缘静脉）第43页，此课件共62页哦动物给药量的确定：动物给药量的确定：先用小鼠粗略的探索中毒剂量或致死剂量，然后用小于中毒量的剂量或致死量的若干分之一为应用剂量，一般可取1/10-1/15。植物药粗制剂的剂量多按生药折算 化学药品可参考化学结构相似的已知药物，特别是化学结构和作用都相似的药物的剂量。第44页，此课件共62页哦 确定剂量后，若第一
14、次实验的作用不明显，动物也没有中毒的表现，可加大剂量再次实验。最好同时用几个剂量做实验。用大动物进行实验时，开始的剂量可用给鼠类剂量的1/15-1/2。确定动物给药剂量时，要考虑动物的年龄大小和体质强弱 确定动物给药剂量时，也要考虑因给药途径的不同，所用剂量也不同。第45页，此课件共62页哦实验动物用药量的计算方法 一般按mg/kg体重或g/kg体重计算，应用时须从已知药液的浓度换算出相当于每kg体重应注射的药液量（ml数），以便给药第46页，此课件共62页哦人与动物用药量的换算：动物对药物的耐受性比人大，一般可按此比例：人用药量为1，小鼠、大鼠为25-50，兔、豚鼠为15-20，狗、猫为5-
15、10。第47页，此课件共62页哦 也可采用人与动物的体表面积计算法来换算 人的体表面积计算法：许文生氏公式 体表面积（cm2)=0.0061身高（cm)+0.0218 体重(kg)-0.1529 动物的体表面积计算法：Meeh-Rubner公式 W（体重，g）2/3 A（体表面积，m2)=K 10000 K是常数，大、小鼠为9.1；豚鼠9.8；兔10.1；猫9.8；狗11.2；猴11.8 第48页，此课件共62页哦(一)大小鼠的血液采集方法眶静脉丛（窦）采血（多次重复）：轻压颈部两侧，眼球充分外突眶动脉和眶静脉取血（大量采血）：尽量使动物眼周围皮肤往眼后压，眼球突出充血，弯头镊迅速夹去眼球第4
16、9页，此课件共62页哦尾静脉采血：剪尾或切开尾静脉：将尾巴在热水中浸泡数分钟或用酒精/二甲苯反复擦试针刺尾静脉其它：心脏采血、大血管采血等第50页，此课件共62页哦耳中央动脉采血：兔耳缘静脉采血：兔心脏采血：兔、豚鼠颈动（静）脉采血：背跖静脉采血：豚鼠第51页，此课件共62页哦前后肢皮下浅层静脉采血：颈静脉采血隐动（静）脉采血股动脉采血心脏采血第52页，此课件共62页哦耳大静脉心脏采血(五)猴的血液采集方法前肢头静脉后肢皮下静脉第53页，此课件共62页哦一.原则：尽量减少动物的痛苦，避免产生惊恐、挣扎、喊叫注意实验人员的安全方法容易操作不能影响实验结果尽可能缩短致死时间判断是否死亡时不仅要看呼
17、吸，而且要观察神经反射、肌肉松弛等情况第54页，此课件共62页哦颈椎脱臼法：大、小鼠、豚鼠、兔空气栓塞法：兔、猫、犬放血法：大、小鼠、豚鼠、兔、猫、犬断头法：大、小鼠、沙鼠第55页，此课件共62页哦药物法：药物吸入：大、小鼠、豚鼠等；CO2、CO、乙醚、氯仿等药物注射：兔、犬静脉注射 氯化钾、巴比妥类麻醉剂、DDT等第56页，此课件共62页哦 病理解剖：动物麻醉后固定好，依次打开胸、腹腔，观察脏器形态 病理组织学取材：病理切片、染色及组化用 ：10%甲醛溶液作为固定液 ：取样要有代表性，包括病灶及周围组织 ：组织块大小1-1.5cm，厚度不超过0.2cm ：组织要完整，注意夹捏组织时别弄破，减
18、少人为的组织损伤第57页，此课件共62页哦 :固定液要淹没组织块，最好每个组织块单瓶固定，瓶体上标注好组别、动物编号、组织名称、组织块数量、取材时间等内容。电镜超薄切片取材：4%戊二醛固定 ：用刀片切成1cm3大小的组织块，避免反复切割组织造成人为损伤，取材要迅速，尽快放入固定液中 :固定液要淹没组织块，每个组织块单瓶固定，瓶体上标注好组别、动物编号、组织名称、取材时间等内容。第58页，此课件共62页哦 单性别分笼饲养 性别鉴定：生殖孔与肛门之间的距离，雄性比雌性长 动物个体标记：染色法 各组别笼盒进行标记，按顺序放置 饲养密度：第59页，此课件共62页哦 注意房间的温湿度、通风换气、光照等环
19、境因素 饲养管理：不间断饮食 ：及时更换垫料与笼盒：一般小鼠每周至少更换一次垫料，大鼠一周两次；笼盒与垫料一起更换，并进行清洗与灭菌处理 ：及时添加饲料、更换饮水，饮水原则上整瓶更换，半瓶时倒掉后瓶体清洗灭菌 第60页，此课件共62页哦 ：每日至少进入动物房观察1次，饲养操作与观察尽量固定时间 ：房间每周至少清扫一次，最好用消毒药水进行必要的擦洗。：更换的垫料及废弃物不得随便丢弃，动物尸体单独包装后送至冷库，集中焚烧处理。第61页，此课件共62页哦 动物的品种、品系、规格、性别、数量、分组、来源动物的品种、品系、规格、性别、数量、分组、来源 品种、品系名称要写全，不能用缩写；明确所选用动物的年（月、周）龄、体重（平均数标准差）；性别（单一性别或雌雄各半）；数量（每个实验组几只）；来源（动物供应单位，生产或使用许可证号）如：40只8-10周龄成年健康C57BL/6J小鼠，购自中科院上海实验动物中心（SCXK（沪）2008-1021）。雌雄各半，体重为20.4 1.23g，随机分成4组，每组10只。第62页，此课件共62页哦