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1、目目 录录关于核苷酸和核酸第1页，此课件共33页哦一、核酸的化学反应核酸的化学反应 1.脱氨基作用（脱氨，脱氨基作用（脱氨，deamination）次黄嘌呤次黄嘌呤5-甲基胞嘧啶甲基胞嘧啶黄嘌呤黄嘌呤第2页，此课件共33页哦2.脱氧核苷酸的水解脱氧核苷酸的水解 脱嘌呤脱嘌呤第3页，此课件共33页哦3.紫外线和一些化学因子、烷化剂对紫外线和一些化学因子、烷化剂对DNA的损伤的损伤第4页，此课件共33页哦亚硝酸亚硝酸第5页，此课件共33页哦烷化剂：乙基甲烷磺酸（烷化剂：乙基甲烷磺酸（EMS）第6页，此课件共33页哦紫外线诱导胸腺嘧啶二聚体紫外线诱导胸腺嘧啶二聚体第7页，此课件共33页哦4.与嵌合剂
2、的反应与嵌合剂的反应第8页，此课件共33页哦第9页，此课件共33页哦溴乙啶溴乙啶丫啶橙丫啶橙 放线菌素放线菌素D 第10页，此课件共33页哦二、DNA的酶法甲基化（的酶法甲基化（methylation）甲基供体：甲基供体：S腺苷甲硫氨酸腺苷甲硫氨酸 甲基受体：被修饰碱基（甲基受体：被修饰碱基（A、C多于多于G、T）碱基的甲基化修饰不是随机的，而是限于一定的顺序碱基的甲基化修饰不是随机的，而是限于一定的顺序或或DNA的某一区域，在甲基化酶的作用下进行，甲基的某一区域，在甲基化酶的作用下进行，甲基化是可逆的。化是可逆的。甲基化的意义：帮助细胞识别和区分自身甲基化的意义：帮助细胞识别和区分自身DNA
3、和外来和外来DNA；调节基因表达；帮助；调节基因表达；帮助DNA修复等。修复等。第11页，此课件共33页哦第八节第八节 核酸酶和核酸酶和DNA限制性限制性内切酶内切酶第12页，此课件共33页哦一、核酸酶（一、核酸酶（nuclease）能水解核酸的酶为核酸酶能水解核酸的酶为核酸酶 核酸酶都是磷酸二酯酶（核酸酶都是磷酸二酯酶（phosphodiesterases）第13页，此课件共33页哦核酸酶的分类核酸酶的分类 按底物专一性分类：核糖核酸酶按底物专一性分类：核糖核酸酶(RNase)和脱氧核和脱氧核糖核酸酶糖核酸酶(DNase)按作用方式分类：内切核酸酶和外切核酸酶按作用方式分类：内切核酸酶和外切
4、核酸酶 内切核酸酶：从核酸的内部切割核酸链，产生核酸链片内切核酸酶：从核酸的内部切割核酸链，产生核酸链片段。段。外切核酸酶：从核酸链的一端逐个切断磷酸二酯键，释外切核酸酶：从核酸链的一端逐个切断磷酸二酯键，释放单核苷酸。按磷酸二酯键断裂方式：放单核苷酸。按磷酸二酯键断裂方式：3-核酸酶和核酸酶和5-核酸酶核酸酶第14页，此课件共33页哦第15页，此课件共33页哦核酸酶对其底物的作用具有特异性核酸酶对其底物的作用具有特异性第16页，此课件共33页哦第17页，此课件共33页哦二、限制性内切酶（二、限制性内切酶（restriction endonuclease）限制性内切酶是从细菌中分离的一类专门识
5、别和限制性内切酶是从细菌中分离的一类专门识别和水解特定核苷酸序列的内切酶类。这类酶在原核生物水解特定核苷酸序列的内切酶类。这类酶在原核生物体内，用于体内，用于“防御防御”外来外来DNA的入侵，将外来的入侵，将外来DNA以独特的方式切成无感染能力的片段，而自身不受以独特的方式切成无感染能力的片段，而自身不受损害（甲基化作用）损害（甲基化作用）。第18页，此课件共33页哦1.限制性内切酶的分类限制性内切酶的分类、基因工程技术中常用基因工程技术中常用型型第19页，此课件共33页哦不需要不需要ATP参加；参加；不对不对DNA进行甲基化或其它方式修饰。进行甲基化或其它方式修饰。专门识别和切割特定的核苷酸
6、序列，这个专门识别和切割特定的核苷酸序列，这个序列一般含序列一般含46 个核苷酸残基，并具回文结个核苷酸残基，并具回文结构构“落鹤岛上岛落鹤，垂柳岸边岸柳垂落鹤岛上岛落鹤，垂柳岸边岸柳垂”。2.II型限制性内切酶型限制性内切酶 第20页，此课件共33页哦类酶识别序列特点类酶识别序列特点回文结构回文结构palindrome第21页，此课件共33页哦切口（切口（kerf）：粘端，平端）：粘端，平端第22页，此课件共33页哦第23页，此课件共33页哦第24页，此课件共33页哦3.限制性内切酶的种类（约限制性内切酶的种类（约1000多种）多种）第25页，此课件共33页哦Hin d 属属 系系 株株 序
7、序Haemophilus influenzae d株株流感嗜血杆菌流感嗜血杆菌d株的第三种酶株的第三种酶命名命名naming第一个字母取自产生该酶的细菌属（第一个字母取自产生该酶的细菌属（genus）名，用大写；）名，用大写；第二、第三个字母是该细菌的种（第二、第三个字母是该细菌的种（species）名，用小写；）名，用小写；第四个字母代表株（第四个字母代表株（strain）；）；用罗马数字表示发现的先后次序（用罗马数字表示发现的先后次序（sequence）。）。第26页，此课件共33页哦4.限制性内切酶在限制性内切酶在基因重组中的应用基因重组中的应用 第27页，此课件共33页哦第28页，此课
8、件共33页哦第29页，此课件共33页哦三、限制片段的长度和限制图三、限制片段的长度和限制图1.限制片段的长度限制片段的长度识别识别4个核苷酸序列的限制酶产生个核苷酸序列的限制酶产生DNA片段的平片段的平均长度：均长度：256（44）识别识别6个核苷酸序列的限制酶产生个核苷酸序列的限制酶产生DNA片段的平均片段的平均长度：长度：4096（46）第30页，此课件共33页哦2.制性内切酶图谱制性内切酶图谱 限制性图谱是各种限制性内切酶切点在某一限制性图谱是各种限制性内切酶切点在某一DNA分子或分子或DNA片段上的排列，由于各酶切点之间的距片段上的排列，由于各酶切点之间的距离是以碱基对（离是以碱基对（kbp mbp）表示的，所以可计算）表示的，所以可计算出二切点间的绝对距离，因此限制图也称物理图。出二切点间的绝对距离，因此限制图也称物理图。第31页，此课件共33页哦质粒质粒pBR322的限制图的限制图第32页，此课件共33页哦目目 录录感谢大家观看感谢大家观看第33页，此课件共33页哦