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1、现在学习的是第1页，共41页现在学习的是第2页，共41页现在学习的是第3页，共41页现在学习的是第4页，共41页现在学习的是第5页，共41页现在学习的是第6页，共41页现在学习的是第7页，共41页现在学习的是第8页，共41页现在学习的是第9页，共41页现在学习的是第10页，共41页现在学习的是第11页，共41页现在学习的是第12页，共41页现在学习的是第13页，共41页ZFN 由锌指蛋白(ZFP)和 Fok核酸内切酶组成。其中，由 ZFP 构成的 DNA 识别域能识别特异位点并与之结合，而由Fok构成的切割域能执行剪切功能，两者结合可使靶位点的双链DNA 断裂(DSB)。于是，细胞可以通过同源
2、重组(HR)修复机制和非同源末端连接(NHEJ)修复机制来修复 DNA。HR 修复有可能会对靶标位点进行恢复修饰或者插入修饰，而 NHEJ 修复极易发生插入突变或缺失突变。两者都可造成移码突变，因此达到基因敲除的目的。现在学习的是第14页，共41页现在学习的是第15页，共41页现在学习的是第16页，共41页TALENs 包含两个 TALEN 蛋白,每个 TALEN 都是由 TALE array 与 Fok融合而成.其中一个 TALEN 靶向正义链上靶标位点,另一个则靶向反义链上的靶标位点.然后 Fok形成二聚体,在靶向序列中间的 spacer 处切割 DNA,造成双链 DNA 断裂,随后细胞启
3、动 DNA 损伤修复机制.针对不同的TALEN 骨架,其最适宜的spacer长度不同,其长度范围一般为1220 bp.实验结果表明,TALENs在靶向DNA时,第一个碱基为 T 时其结合效果更佳。现在学习的是第17页，共41页现在学习的是第18页，共41页现在学习的是第19页，共41页3.CRISPR/Cas9 基因组编辑技术现在学习的是第20页，共41页CRISPR/Cas 系统由 Cas9 核酸内切酶与sgRNA构成.转录的 sgRNA 折叠成特定的三维结构后与 Cas9 蛋白形成复合体,指导 Cas9 核酸内切酶识别特定靶标位点,在 PAM 序列上游处切割 DNA 造成双链 DNA 断裂
4、,并启动 DNA 损伤修复机制.从不同菌种中分离的 CRISPR/Cas 系统,其 CrRNA(或者是人工构建的sgRNA)靶向序列的长度不同,PAM 序列也可能不同。现在学习的是第21页，共41页现在学习的是第22页，共41页现在学习的是第23页，共41页现在学习的是第24页，共41页现在学习的是第25页，共41页现在学习的是第26页，共41页现在学习的是第27页，共41页现在学习的是第28页，共41页现在学习的是第29页，共41页现在学习的是第30页，共41页现在学习的是第31页，共41页现在学习的是第32页，共41页3.构建模式动物现在学习的是第33页，共41页现在学习的是第34页，共41页现在学习的是第35页，共41页现在学习的是第36页，共41页现在学习的是第37页，共41页现在学习的是第38页，共41页现在学习的是第39页，共41页现在学习的是第40页，共41页感谢大家观看感谢大家观看现在学习的是第41页，共41页