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1、高压灭菌锅的使用考前须知高压蒸汽灭菌的原理高压蒸汽灭菌用途广，效率高，是微生物学实验中最常 用的灭菌方法。这种灭菌方法是基于水的沸点随着蒸汽 压力的升高而升高的原理设计的。当蒸汽压力到达 1.05kg/cm2时，水蒸气的温度升高到121C,经15 30min,可全部杀死锅内物品上的各种微生物和它们的抱 子或芽抱。一般培养基、玻璃器皿以及传染性标本和工 作服等都可应用此法灭菌。请注意高压蒸汽灭菌的原理：是基于水的沸点随着蒸汽 压力的升高而升高的原理设计的。压力：100KPa,水蒸气的温度：H5,时间：20min,各种 微生物和它们的袍子 压力：147KPa,水蒸气的温度：121,时间：15-30
2、min,各种微生物和它们的袍子或芽抱压力：156KPa,水蒸气的温度：180,时间：4h,热原质 (Pyrogen)：热原质即菌体中的脂多糖压力：156KPa,水蒸气的温度：25(TC,时间：45min,热原 质(Pyrogen)：热原质即菌体中的脂多糖压力：156KPa,水蒸气的温度：650,时间：lmin,热原 质(Pyrogen)：热原质即菌体中的脂多糖温度越高，需时越短，热穿透能力越强。一般认定 115-121, 3,对培养基的成分不产生破坏。高压蒸汽灭菌使用细节高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌 锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。 待水蒸汽急剧地将锅内
3、的冷空气从排气阀中驱尽，然后关 闭排气阀，继续加热，此时由于蒸气不能溢出，而增加了 灭菌锅内的压力，从而使沸点增高，得到高于loot的温 度。导致菌体蛋白质凝固变性而到达灭菌的目的。在使用 高压蒸汽灭菌锅灭菌时，灭菌锅内冷空气的排除是否完全 极为重要，因为空气的膨胀压大于水蒸汽的膨胀压，所 以，当水蒸汽中含有空气时，在同一压力下，含空气蒸汽 的温度低于饱和蒸汽的温度。所以饱和蒸汽的灭菌更彻 底！一、高压灭菌锅使用前要水加到水位线；二、将需灭菌的培养基、蒸偏水或其它器皿放入灭菌锅 内，关闭锅盖，检查排气阀、平安阀状态(上下排气阀打 开平安阀关合然后加热，方便空气排出，上、下排气阀都 同时处于开启
4、状态待有水蒸汽从上、下阀溢出，此状态保 持7、8分钟后，即排出空气后上排气阀关合，下排气阀 调小，平安阀保持关合状态)；三、翻开电源，检查参数设置是否正确，然后按下 “work”键，灭菌锅开始工作；自动派冷气，到1051 时，底部排气阀门自动关闭，然后压力开始上升；四、压力升至0. 15MPa (121)时，灭菌锅再次自动放 气，然后开始记时，一般培养基灭菌20min,蒸得水灭菌 30min；五、到达规定的灭菌时间后，关闭电源，翻开放气阀缓慢 放气；当压力指针降至0. OOMPa时，放气阀无蒸汽排除 时，方可开启锅盖。六、考前须知1、汽未放尽前，不得开启高压锅；2、如果灭菌后的培养基在锅内不及
5、时拿出，需在蒸汽放 尽后将锅盖翻开，切忌将培养基封闭在锅内过夜。3、压力表指针在0. 05MPa以上时，不能过快放汽，以防 止压力急速下降，液体滚沸，从培养容器中溢出。4、操作过程，请注意平安，小心烫伤。在一个标准大气压下水的沸点是100摄氏度，压力越高, 与之对应压力下的沸点越高，这里是高压蒸汽锅，说明压 力肯定大于一个标准大气压（通常情况下的地外表的大气 压强就认为是一个标准大气压），也就是说高压蒸汽锅肯 定要超过100摄氏度才能沸腾，才能产生蒸汽。至少要等 到水煮沸，排出一分钟左右的蒸汽后再把平安阀关闭，这 样可以使高压蒸汽锅里的压力迅速上升，原来沸腾的水因 为压力的快速上升而停止沸腾，
6、压力大，沸点高，水蒸汽 就变成液体水，而放出大量的汽化潜热，就是高温高压的 目的，从而到达杀菌的目的。在同一温度下，湿热的杀菌 效力比干热大，其原因有三：一是湿热中细菌菌体吸收水分，蛋白质较易凝固，因蛋白 质含水量增加，所需凝固温度降低；二是湿热的穿透力比干热大；三是湿热的蒸汽有潜热存在，每1克水在100时，由气 态变为液态时可放出2. 26kJ （千焦）的热量。这种潜 热，能迅速提高被灭菌物体的温度，从而增加灭菌效力。在使用高压蒸汽灭菌锅灭菌时，灭菌锅内冷空气的排除是 否完全极为重要，因为空气的膨胀压大于水蒸汽的膨胀 压，所以，当水蒸汽中含有空气时，在同一压力下，含空 气蒸汽的温度低于饱和蒸
7、汽的温度。如果压力未降到0 时，翻开排气阀，就会因锅内压力突然下降，使容器内的 培养基由于内外压力不平衡而冲出烧瓶口或试管口，造成 棉塞沾染培养基而发生污染。要100度以上，也就是对应 压力下的沸点后才能使水剧烈沸腾，将锅内空气更多的排 除。高温灭菌操作中常见错误的分析高温灭菌是指用热能杀死微生物。其原理是高温使原 生质中的蛋白质变性、使酶失活，致使微生物死亡。 高温灭菌主要有高压蒸汽灭菌法、干热灭菌法和灼烧 灭菌法几种。如果操作不当，即达不到预期的灭菌效 果。现就常见错误分析如下：1、高压蒸汽灭菌蒸汽灭菌属湿热灭菌，由于湿热灭菌有潜能存在，被灭菌 物体的温度比蒸汽的低，蒸汽在其外表凝结成水，
8、放出潜 能，可迅速提高被灭菌物体的温度。又由于水和水蒸汽比 空气的热容量大、导热快、穿透力强，所以，与干热灭菌 相比，灭菌需要的温度低、时间短。由于高压蒸汽灭菌法 水蒸汽的温度随其所受压力的增加而升高，因而灭菌用的 高温蒸汽都是通过加压获得的。手提式高压灭菌锅操作中常见的错误有：(1)排气不彻底。在升压前应将锅内冷空气排净，因空 气是热不良导体，假设不排净，冷空气就会聚集井滞留在灭 菌锅中消毒筒的中下部，围绕在待灭菌物的周围。在这种 情况下，假假设锅内仅排除一半空气，当压力表指针到达 105Pa时，锅内实际温度仅能到达1122，比要求的 12HC低9。(2之多，将导致灭菌不彻底，可能造成大面积
9、染菌。（自动的高压灭菌锅上下排气阀都要翻开然后加热 排空气）（2）排气软管没有按要求插入灭菌筒的下部，或排气软 管断裂、缺失。灭菌锅内的冷空气是通过排气软管排出 的，上述情况将造成灭菌筒外的蒸汽直接经排气阀排出锅 外，灭菌锅内的空气排放受阻。（3）消毒筒内物品堆积太紧、太满，阻碍蒸汽的流通和 热交换，使容器内升温减慢，造成物体内部杀菌不完全。（4）升温过快。灭菌的时间是以到达要求温度后的持续 时间计算的，但温度的升降过程同样起到杀菌的作用，升 降温度过快会通过影响总的积温而影响灭菌效果。另外， 升温过快，特别是使用外源蒸汽的情况下，会造成被灭菌 物体内部升温滞后于压力表指示温度。（5）灭菌的物
10、体体积（容量）过大。组织培养中或常规 微生物实验中，高温蒸汽灭菌通常要在12UC （即蒸汽压 力为1kg/c nf或5磅/寸2,或0. 105MPa）下保温 15mino这一规定仅适用于试管、三角瓶中小于200ml容 量的。假设体积太大，特别是固体培养基，会造成灭菌不彻 底，应适当延长灭菌时间。（6）任意延长灭菌时间。规定的灭菌温度和时间是经过 科学试验确定的，只要按照正确的灭菌程序是能到达灭菌 目的的。但在实践中常有人为了 “保证彻底灭菌”而任意 延长灭菌时间。这样忽视了杀菌过程中温度对培养基成分 的破坏作用，是得不偿失的。（7）温度不稳定。灭菌过程中温度（压力）忽高忽低， 特别是手提式电能
11、灭菌锅，它没有控温装置，难于控温。 操作者可配置调压变压器，通过调节电压控温。此外，还常遇到灭菌锅内加水太少(应加23L)；容器内装的溶 液量过多(应少于2/3)；平安阀失灵等问题。2、干热灭干热灭菌指在烘箱16(TC温度下，维持2h,消除物体上的 微生物的方法。常见错误有：(1)将灭菌物品(如培养皿)堆摞放置，且堆得过满、 过挤，阻碍空气流通和热量的传递、交换；(2)升温时不翻开箱顶通风孔，影响箱内冷空气及水汽 的排除；(3)高温(8(TC以上)下开箱取物，热蒸汽喷出造成烧 伤及突然降温，使玻璃器皿破裂；(4)温度过高(1801以上)造成包装纸、棉塞焦化，失 去防菌或过滤作用；(5)将不耐热的枪头、离心管、试管帽、滤器等塑料制 品放入烤箱内灭菌，而致熔化。3、灼烧灭即直接利用火焰将微生物灼烧致死。特点：简便、迅速、 彻底。主要用于接种工具及器皿的灭菌。如接种杯、镶 子、剪刀、玻棒、瓶口及其封口用的铝箔的灭菌常见的错 误有：(1)接种工具的灭菌范围不够，如长度不够，灼烧时没 有旋转造成内外侧灭菌不匀；(2)接种工具没有降至常温即用于接种;（3）对玻璃器皿灼烧过度，使棉塞、封口膜焦化或熔 化。