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1、医院感染微生物学检测,前言,随着现代化医学科学的发展，诊断和治疗手法不断提高，新技术、新疗法不断推陈出新，导管、插管、内镜等侵袭性操作不断增加和抗生素的广泛使用等，使医院感染在当前世界各国的医院中均有不同程度的发生，并呈日益增多的趋势。,前言,医院感染的预防与控制是当今医疗机构面临的重大挑战，关系到医疗质量和病人的安全，已成为全球关注的突出的公共卫生课题。医院感染管理是医院管理的重要组成部分，体现医疗机构的管理水平，受到国内外医院管理者和广大医务人员的高度重视和关注。,医院感染的定义,是指住院病人在医院内获得的感染，包括在住院期间发生的感染和在医院内获得出院后发生的感染，但不包括入院前已开始或
2、者入院时已处于潜伏期的感染。医院工作人员在医院内获得的感染也属医院感染。,医院感染的分类,1、内源性感染（自身感染）：指免疫机能低下病人由自身正常菌群引起的感染。即病人在发生医院感染之前已是病原携带者，当机体抵抗力降低时引起自身感染。 2、外源性感染：指由环境或他人处（病人、带菌者、工作人员、探视者、陪护者）获得而引起的直接感染。环境感染由污染的环境（空气、水、医疗用具及其他物品造成的感染。如手术室空气污染造成病人术后切口感染，注射器灭菌不严格引起的乙型肝炎流行等。,医院感染监测内容, 医院空气微生物学监测 物体表面微生物学监测 消毒剂微生物学监测 医务人员手微生物学监测 灭菌效果生物监测 医
3、疗器械消毒效果监测 医疗用水的微生物学检测,空气微生物医院学监测,采样时间,消毒后 操作前 1、采用洁净技术净化空气的房间（） 洁净系统自净后 、操作前 2、未采用洁净技术净化空气的房间（、） 消毒、通风换气后 、操作前 3、怀疑空气与医院感染暴发有关时,监测方法,沉降法 重力沉降（平板沉降法） 浮游菌测定法 撞击式空气微生物采样法 离心式空气微生物采样法 洗刷式空气微生物采样法 过滤空气微生物采样法 温差空气微生物采样法 静电或冲击空气微生物采样法,未用洁净技术净化空气的房间： 平板暴露法采,室内面积 30m2 设内、外、中对角线3点 内、外点距离墙壁1m处 室内面积30m2 设四角及中央共
4、5点 四角距离墙壁1m处,室内面积 30m2,室内面积30m2,采用洁净技术净化空气的房间,1、平板暴露法 2、空气采样器法 参照GB50333-2013（医院洁净手术部建筑技术规范）,手术区：手术台及其周围的区域,级手术室 (手术区百级，周围千级）：手术台两侧边至少各外推0.9m，两端至少各外推0.4m后（包括手术台）的区域 级手术室 (手术区千级，周围万级）： 手术台两侧边至少各外推0.6m，两端至少各外推0.4m后（包括手术台）的区域 级手术室（手术区万级，周围十万级）：手术台四边至少各外推0.4m后（包括手术台）的区域 级手术室（三十万级）：不分手术区和周边区,洁净手术区平板暴露法布点
5、示意图,局部百级 周围千级设置13点,局部千级 周围万级设置9点,局部万级 周围十万级设置7点,局部十万级 周围三十万级设置5点,操作方法,将平皿（直径9cm）放置在采样点处 采样高度距离地面80-150cm 采样时将平皿盖打开、扣放于平板旁,正确操作,错误操作,放置时间 未采用洁净技术净化空气的房间 类环境暴露15min 类环境暴露5min 采用洁净技术净化空气的房间暴露30min,采样后盖好平皿盖子 记录科室、房间、采样人、采样时间 将平皿倒置放于托盘内（附化验单） 采样平皿尽快送至实验室培养 若怀疑与医院感染有关时 进行目标微生物检测,正确放置方法,错误放置方法,平板暴露法采样注意事项,
6、采样前关闭门窗 无人走动的情况下 静止10分钟后采样 布点应尽量避开高效送风口正下方 放置培养皿时 应从最里面的房间或房间的最里面开始布点依次向外、最后人员撤出 收集培养皿时 从最外面的房间或房间的最外面开始、最先布的点最后收,对采样人员的要求,着无菌的工作服、戴口罩、帽子 操作前洗手或手卫生 所带物品清洁后方可带入 手臂及头部不可越过打开的培养皿上方 行动及放置动作要轻 尽量减少对空气流动状态的影响 每次采样人员不得超过2人,医院物体表面 消毒效果的监测,采样时间,消毒后 1、消毒处理后 2、怀疑与医院感染暴发有关时,采样方法,5cm 5cm灭菌规格板 放在被检物体表面 用蘸有0.03mol
7、/L磷酸盐缓冲液（PBS） 或生理盐水的棉拭子1支 在规格板内横竖往返各涂擦5次 并随之转动棉拭子，连续采样4个规格板 面积，被采表面100cm2，取全部面积 被采样表面100cm2，取100cm2 剪去手接触部分将棉拭子投入装有10ml 无菌检测用洗脱液的试管中送检 门把手等小型物体用棉拭子直接涂抹物体表面采样 采样物体表面有消毒剂残留时 采样液应含有相应中和剂,记录(检验申请单）,科室 房间 、何种物体表面、何种消毒剂 采样人 采样时间 采样结束后送至实验室,合格标准,、类区域： 细菌菌落总数5cfu/cm2 类区域： 细菌菌落总数10cfu/cm2 不得检出致病微生物 怀疑与医院感染暴发
8、有关时， 进行目标微生物的检测,消毒液染菌量监测,采样方法,用无菌注射器吸取消毒液1ml 加入9ml相应中和剂中 充分振荡混匀 注明科室、何种消毒剂、开启日期、批号、采样人以及采样日期 采样结束后送至实验室,中和剂,醇类与酚类消毒剂用普通营养肉汤中和。 含氯、碘和过氧化物消毒剂用0.1%硫代硫酸钠中和剂。 洗必泰、季铵盐类消毒剂用含0.3%吐温80和0.3%卵磷脂中和剂。 醛类消毒剂用含0.3%甘氨酸中和剂。 含有表面活性剂的各种复方消毒剂可在中和剂中加入吐温80至3%。,合格标准,灭菌剂染菌量 0cfu/ml 皮肤黏膜消毒剂染菌 10cfu/ml 消毒剂染菌量 100cfu/ml 怀疑与医院
9、感染暴发相关时 进行目标微生物检测,医务人员手卫生 效果的监测 遵循WS/T 313 中华人民共和国卫生部行业标准 医务人员手卫生规范,采样时间,手卫生后 接触病人或诊疗操作之前,采样方法,棉拭子法 被检人员五指并拢 用蘸有含相应中和剂的棉拭子 在双手手指屈面从指根到指尖往返涂擦2次 一只手的涂擦面积约30cm2 并随之转动采样棉拭子 剪去操作者手接触的部分 将棉拭子投入10ml含相应中和液的试管中 化验单书写：将科室、采样地点、被采人、采样人以及采样时间填写清楚，送至细菌室即可,采样步骤用棉拭子蘸取相应中和剂,双手的屈指面，从指跟到指端；往返涂擦2次，同时转动棉签.,将手接触的部分折断，投入
10、10ml含相应中和剂的试管中,合格标准,卫生手消毒： 细菌菌落总数10cfu/cm2 外科手消毒： 细菌菌落总数5cfu/cm2 不得检出致病微生物,压力蒸汽灭菌效果的生物监测,监测时间：每周一次 指示菌株：嗜热脂肪芽胞杆菌 （ATCC7953或SSIK31株） 培养基： 溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培养基,若指示菌片中的细菌未被杀灭 可分解培养基中的葡萄糖产酸 使指示剂溴甲酚紫，由原来的紫色变成黄色，对照管为黄色 灭菌合格仍为淡蓝色 灭菌不合格为黄色,结果判断 灭菌合格：检测管培养阴性 阳性对照管培养阳性 阴性对照管培养阴性 灭菌不合格：检测管培养阳性 阳性对照管培养阳性 阴性对照管培养阴性,将常
11、规生物监测包放在 灭菌器最难灭菌的部位 同时设阴、阳性对照 灭菌周期完成后 立即将生物指示剂取出 将灭菌方法、锅次、灭菌员、器械的去向以及灭菌时间填写清楚送细菌室,医 疗 器 械 消 毒 效 果 监 测,高度危险性医疗器械： 进入正常无菌组织、脉管系统或有无菌体液（如血液）流过，若被微生物污染将导致极高感染危险的器材 如手术器械；穿刺针；腹腔镜；活检钳；牙科手机及其配套器械；心导管；植入物等 消毒水平：达到灭菌 消毒效果：应无菌生长,中度危险性医疗器械： 直接、间接接触粘膜的器材 如胃肠道内镜；气管镜；喉镜；体温表（口腔测温表，肛门测温表）；呼吸机管道；麻醉剂管道；压舌板；肛门直肠压力测量导管
12、等 消毒水平：高水平消毒或中水平消毒 消毒效果：菌落数应20cfu/件、g或100cm2 氧气湿化瓶、吸引器、婴儿暖箱、加温加湿罐等宜采用高水平消毒,低度危险性医疗器械： 仅与完整皮肤接触而不与粘膜接触的器材 如听诊器；血压计袖带；病床围栏、床面以及床头柜、被褥；墙面；痰盂、尿壶、便器等 消毒水平：中水平消毒或低水平消毒或保持日常清洁 消毒效果：菌落数应200cfu/件、g或100cm2,采样时间 在消毒或灭菌处理后 存放有效期内采样,内窥镜消毒灭菌效果的 生物监测,采样时间 消毒灭菌后 使用前,采样方法,监测部位为内镜的内腔面 用无菌注射器抽取10ml含有相应中和剂的洗脱液 从待检内镜的活检
13、口注入内镜（使用蠕动泵） 用无菌试管从活检出口收集注入的液体2h内送检,合格标准,消毒内镜 细菌总数 20 cfu/件 灭菌内镜 无任何细菌检出,呼吸机麻醉机等螺纹管消毒效果生物监测,采样时间 消毒后 使用前,采样方法,用蘸有相应中和剂的长柄棉签,在被检螺纹管内面反复涂擦并同时转动棉签,剪去手接触的部位,将棉签投入10ml含相应中和剂的无菌生理盐水试管,立即送检,医疗用水的 细菌学检测,血液透析相关治疗用水的 细菌学监测,依据YY 0572血液透析和相关治疗用水进行检测 监测时间：初次使用监测应每周监测1次 连续2次监测结果符合要求后 改为每月1次,采样点,透析液进入血液透析器连接处 或尽可能接近此处,采样方法,用75%酒精擦拭采样口 酒精自然风干后打开采样口 在透析液连续流动1min后 用无菌试管接取样本3-4ml,合格标准,YY 0572血液透析和相关治疗用水进行检测。 透析用水细菌总数 100 cfu/ml,谢谢！,