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1、大肠杆菌的分离鉴定、药敏实验及生化实验,目的要求,熟悉鉴别培养基的原理 了解大肠杆菌的主要生理生化特性,一、鉴别培养,培养基类别,菌种,分离鉴定-麦康凯培养基,原理：在培养基中含有胆盐，可抑制大部分革兰氏阳性菌的生长，培养基含乳糖，大肠杆菌能分离乳糖，使pH下降（中性指示剂5.5-7.5，红-黄）形成红色菌落，而沙门氏菌和志贺氏菌，不能分解乳糖，菌落小且为无色,术式,两试管斜面移植时，左手斜持菌种管和被接种管，管口相齐，管底放在拇指和食指间，松动两管棉塞，将管口进行火焰灭菌，使其靠近火焰，将接种环深入管内，先在无菌生长的培养基上接触使之冷却，再挑取少量的细菌后，拉出接种环，立即伸入另一管斜面培
2、养基上，勿碰到斜面和管壁，直达斜面底部，从底部开始划曲线，向上到斜面顶端，管口火焰灭菌，塞好棉塞，接种完毕。接种环火焰灭菌后，放下接种棒最后在斜面管壁上注明日期、接种者。置370C，温箱培养,结果判定,鲜桃红色或微红色，菌落中心呈深桃红色 圆形，扁平，边缘整齐，表面光滑，湿润,二、药敏试验,方法：取一菌种，用灭菌的接种环致密划线于琼脂表面（可重复来回划线），用无菌镊子，将各种抗菌药物圆纸片，分别贴于培养基表面。各片距离相等，370C，24h后，观察结果。,药敏结果判定,三、生化实验 1糖发酵试验,原理：各种细菌具有不同的酶，有的细菌能分解某些糖类而产酸产气，有的细菌虽能分解某种糖类，但只产酸不
3、产气，有的细菌则不能分解。从而鉴别细菌。 方法：将需要鉴别的细菌纯培养物，分别接种在各种含指示剂的糖发酵管内，将发酵管倒置与370C温箱内培养24h 结果：培养液不变色-无变化（） 培养液变为黄色-产 酸（+） 培养液变黄并有气泡-产酸产气（+）,2 硫化氢试验,原理：某些细菌能分离蛋白质中的含硫氨基酸，生成硫化氢，遇培养基中的铅盐或铁盐，形成黑色的沉淀物。 方法：将需要鉴别的细菌纯培养物，分别接种在硫化氢培养基中，370C温箱内培养24h 结果：培养基变黑为阳性，不产生黑色为阴性。大肠杆菌为阴性，沙门氏菌为阳性,3 硝酸盐还原实验,原理：有些细菌能将培养基中的硝酸盐还原为亚硝酸盐，在酸性条件下，亚硝酸盐与对位氨基苯磺酸起作用后，在与-萘胺反应，生成红色偶氮化合物。 方法：将被检细菌接种于硝酸钠蛋白胨培养基内，370C温箱内培养24h。 结果：再加试剂甲、乙各2滴，在30s内出现红色即为阳性；若无颜色出现，加少量的锌渣，随后出现红色，则是真正的红色,