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1、分分子子生生物物学学2010实实验验现在学习的是第1页，共33页1. 微量移液器微量移液器现在学习的是第2页，共33页 微量移液器有数字可调式和固定式两种型号，是计量和转移液体的微量移液器有数字可调式和固定式两种型号，是计量和转移液体的专用仪器，其装有直接读数容量计。专用仪器，其装有直接读数容量计。 微量移液器有多种规格，在移液器量程范围内能连续调节读微量移液器有多种规格，在移液器量程范围内能连续调节读数。数。现在学习的是第3页，共33页量液的操作步骤：量液的操作步骤：第一停点第二停点A A 保持微量移液器垂直，将按钮压至第一停点；保持微量移液器垂直，将按钮压至第一停点；B B 微量移液器头尖
2、端浸入溶液，缓慢释放按钮；微量移液器头尖端浸入溶液，缓慢释放按钮；C C 保持微量移液器垂直，将微量移液器头与容器壁接触，慢保持微量移液器垂直，将微量移液器头与容器壁接触，慢 慢压下按钮至第一停点；慢压下按钮至第一停点；D D 压至第二停点把溶液完全释放出；压至第二停点把溶液完全释放出；E E 释放按钮回原状。释放按钮回原状。 现在学习的是第4页，共33页现在学习的是第5页，共33页2. 台式高速离心机台式高速离心机离心机的分类离心机的分类 低速：每分钟几千转低速：每分钟几千转 高速：每分钟高速：每分钟1 3万转万转 超速：每分钟超速：每分钟3万转以上万转以上 现在学习的是第6页，共33页低速
3、：细胞等大分子低速：细胞等大分子 高速：高速：DNADNA，蛋白等，蛋白等 超速超速: : 病毒，蛋白，细胞器等病毒，蛋白，细胞器等基因片段的分离、酶蛋白的沉淀和回收以及其它生物样品的分离制备实基因片段的分离、酶蛋白的沉淀和回收以及其它生物样品的分离制备实验中都离不开低温离心技术验中都离不开低温离心技术 离心机的功能：分离离心机的功能：分离 纯化纯化现在学习的是第7页，共33页台式高速离心机使用步骤台式高速离心机使用步骤现在学习的是第8页，共33页现在学习的是第9页，共33页现在学习的是第10页，共33页3. PCR仪仪现在学习的是第11页，共33页 PCR仪主要应用于基础研究和应用研究等许多
4、领域，如基仪主要应用于基础研究和应用研究等许多领域，如基因分析、序列分析、进化分析、临床诊断、法医学等。因分析、序列分析、进化分析、临床诊断、法医学等。 PCR仪，也称仪，也称DNA热循环仪、基因扩增仪，能使一对热循环仪、基因扩增仪，能使一对寡核苷酸引物结合到正负寡核苷酸引物结合到正负DNA链上的靶序列两侧，从而链上的靶序列两侧，从而酶促合成拷贝数为百万倍的靶序列酶促合成拷贝数为百万倍的靶序列DNA片段，它的每一循片段，它的每一循环包括环包括DNA变性、复性、延伸三个反应。变性、复性、延伸三个反应。现在学习的是第12页，共33页操作程序操作程序: :1 1）开机：打开电源，显示主界面；）开机：
5、打开电源，显示主界面；2 2）创建程序：使用）创建程序：使用”createcreate”输入新程序（包括输入新程序（包括PCRPCR循循 环数，预变性、变性、复性、延伸的时间和温环数，预变性、变性、复性、延伸的时间和温 度），保存程序（包括用户名和方法名）度），保存程序（包括用户名和方法名）; ;3 3）放入样品，盖上盖子）放入样品，盖上盖子; ;4 4）在所建用户名下按）在所建用户名下按“run”run”键，找到设定的程序，键，找到设定的程序， 按按“startstart”键键启动程序启动程序; ;5 5）运行结束后按）运行结束后按“stopstop”键停止运行，取出样品，关闭电键停止运行，
6、取出样品，关闭电源。源。现在学习的是第13页，共33页现在学习的是第14页，共33页4. 电泳图像分析系统电泳图像分析系统现在学习的是第15页，共33页现在学习的是第16页，共33页系统简介：系统简介： 系统可以通过紫外系统可以通过紫外/ /可见光分析装置及透光扫描仪直接获得核可见光分析装置及透光扫描仪直接获得核酸、蛋白质凝胶电泳图像。系统配置有酸、蛋白质凝胶电泳图像。系统配置有SmartViewSmartView生物电泳图像分生物电泳图像分析软件，可以进行密度扫描、密度定量、分子量计算等电泳分析析软件，可以进行密度扫描、密度定量、分子量计算等电泳分析。此外，该系统含有多种图像滤波器，可降低图
7、像的噪音，从而。此外，该系统含有多种图像滤波器，可降低图像的噪音，从而获得较清晰的图像。获得较清晰的图像。现在学习的是第17页，共33页操作步骤：操作步骤：1）将电泳样品放入分析装置中将电泳样品放入分析装置中2）打开电脑，运行打开电脑，运行Smart View 软件，单击软件，单击“Import”键进入键进入 图像获取项目栏，图像获取项目栏，选择选择“获取视频图像获取视频图像”键，进键，进行图像采集行图像采集3）选选 择紫外或可见光源，在图像采集窗口中调节好图像大择紫外或可见光源，在图像采集窗口中调节好图像大 小、亮度及焦距小、亮度及焦距4）单击单击“采集图像采集图像”键，根据图像质量选择好优
8、化摄影时间键，根据图像质量选择好优化摄影时间 （一般情况下在（一般情况下在12秒左右秒左右），即开始采集。，即开始采集。1 1、图像采集、图像采集现在学习的是第18页，共33页现在学习的是第19页，共33页2、图像保存、图像保存 单击单击“System 键键”选择选择“另保存图像为另保存图像为”键，出现一个键，出现一个“图像文件登图像文件登记记”窗口，窗口，输入标题，实验人，实验日期，实验摘要等信息，输入标题，实验人，实验日期，实验摘要等信息，按按“保存保存”键完成图像文件登记键完成图像文件登记，同时出现，同时出现“另保存图像为另保存图像为”窗口，输窗口，输入图像名，保存图像至桌面。入图像名，
9、保存图像至桌面。 3、关闭操作系统、关闭操作系统（1）关闭紫外）关闭紫外/可见光。可见光。（2）退出软件界面。）退出软件界面。（3）关闭紫外与可见分析装置的电源。）关闭紫外与可见分析装置的电源。现在学习的是第20页，共33页注意事项：注意事项：1、 不要戴不要戴“脏脏”手套触摸电脑鼠标、键盘及其它位置；手套触摸电脑鼠标、键盘及其它位置； 2、 不要戴不要戴“脏脏”手套触摸仓门和灯箱电源开关；手套触摸仓门和灯箱电源开关； 3、 不要戴不要戴“脏脏”手套触摸外接电源开关；手套触摸外接电源开关； 4、在图像获取过程中，若通过软件打开紫外、在图像获取过程中，若通过软件打开紫外/可见光，则可见光，则 必
10、须再通过软件关闭，必须再通过软件关闭，若通过紫外与可见分析装置上若通过紫外与可见分析装置上 打开紫外打开紫外/可见光，则从分析装置上关闭，可见光，则从分析装置上关闭，严禁互用，严禁互用， 导致紫外灯长亮。导致紫外灯长亮。现在学习的是第21页，共33页5. 电泳仪电泳仪DYY-12型电脑三恒多用电泳仪（北京六一仪器厂）型电脑三恒多用电泳仪（北京六一仪器厂）现在学习的是第22页，共33页操作程序：操作程序：1）电泳槽的两个电极与电泳仪的直流输出端连接（极）电泳槽的两个电极与电泳仪的直流输出端连接（极 性不要接反）；性不要接反）；2）打开电源，设置参数（选择稳压稳流方式及电压电）打开电源，设置参数（
11、选择稳压稳流方式及电压电 流范围）；流范围）；3）按）按“启动启动”启动程序（输出为高电压，注意安全）；启动程序（输出为高电压，注意安全）；4）电泳结束，按）电泳结束，按“停止停止”键终止程序。键终止程序。现在学习的是第23页，共33页现在学习的是第24页，共33页使用及性能使用及性能：摇床（振荡器）广泛用于对温摇床（振荡器）广泛用于对温度和振荡频率有较高要求的细菌度和振荡频率有较高要求的细菌培养、发酵、杂交、生物化学反培养、发酵、杂交、生物化学反应以及酶和组织研究等。实验室应以及酶和组织研究等。实验室常用的液体摇匀，微生物、细菌常用的液体摇匀，微生物、细菌和细胞培养。和细胞培养。6. 恒温气
12、浴摇床恒温气浴摇床SHK-99-SHK-99-型台式空气恒温摇床型台式空气恒温摇床现在学习的是第25页，共33页操作程序：操作程序：现在学习的是第26页，共33页7. 超净工作台超净工作台使用及性能：使用及性能：超净工作台为分子生物学超净工作台为分子生物学无菌操作提供可能，分为无菌操作提供可能，分为垂直送风和水平送风两种垂直送风和水平送风两种。现在学习的是第27页，共33页 超净台由三相电机作鼓风动力，空气通过由特制超净台由三相电机作鼓风动力，空气通过由特制的微孔泡沫塑料片层叠合组成的的微孔泡沫塑料片层叠合组成的“超级滤清器超级滤清器”后吹后吹送出来，形成连续不断的无尘无菌的超净空气层流送出来
13、，形成连续不断的无尘无菌的超净空气层流，即所谓，即所谓“高效的特殊空气高效的特殊空气”，能够防止附近空气可，能够防止附近空气可能袭扰而引起的污染，同时也不会妨碍采用酒精灯能袭扰而引起的污染，同时也不会妨碍采用酒精灯或本生灯对器械等的灼烧消毒。工作人员就在这样或本生灯对器械等的灼烧消毒。工作人员就在这样的无菌条件下操作，可以保持无菌材料在转移接种的无菌条件下操作，可以保持无菌材料在转移接种过程中不受污染。过程中不受污染。 现在学习的是第28页，共33页台面清洁消毒台面清洁消毒进行无菌操作进行无菌操作清理工作台面清理工作台面紫外消毒紫外消毒3030分钟分钟关闭紫外灯、电源关闭紫外灯、电源操作程序：
14、操作程序：1 1）工作台面上，不要存）工作台面上，不要存 放不必要的物品，以放不必要的物品，以 保持工作区内的洁净保持工作区内的洁净 气流不受干扰。气流不受干扰。操作时一定注意关掉操作时一定注意关掉 紫外灯，防止对实验紫外灯，防止对实验 人员造成伤害。人员造成伤害。注意事项：注意事项：现在学习的是第29页，共33页8. 灭菌锅灭菌锅使用及性能：使用及性能： 细菌和细胞培养以及核酸等有关实验所用的试细菌和细胞培养以及核酸等有关实验所用的试剂、器皿及实验用具，应严格灭菌；剂、器皿及实验用具，应严格灭菌； 对于经过导入对于经过导入DNADNA重组分子的菌株，操作后必须重组分子的菌株，操作后必须进行严
15、格的高压消毒灭活处理进行严格的高压消毒灭活处理 。现在学习的是第30页，共33页1 1）开盖：转动手轮，使锅盖离开密封圈，添加蒸馏水刚没至板上；）开盖：转动手轮，使锅盖离开密封圈，添加蒸馏水刚没至板上；2 2）通电：打开控制面板上电源开关，若水位低则红灯亮；）通电：打开控制面板上电源开关，若水位低则红灯亮； 3 3）堆放物品：需包扎的灭菌物品，体积不宜过大，各包装之间）堆放物品：需包扎的灭菌物品，体积不宜过大，各包装之间留有间隙，利于蒸汽穿透，提高灭菌效果；留有间隙，利于蒸汽穿透，提高灭菌效果； 3 3）密封高压锅：推横梁入立柱内，旋转手轮，压紧锅盖；）密封高压锅：推横梁入立柱内，旋转手轮，压
16、紧锅盖；4 4）灭菌：）灭菌：121121， 20min20min；如为液体，液体必须装在可耐高温的玻璃；如为液体，液体必须装在可耐高温的玻璃器皿中，不宜超过器皿中，不宜超过2/32/3；5 5）灭菌结束，所有东西放入干燥箱干燥，排尽水气。）灭菌结束，所有东西放入干燥箱干燥，排尽水气。操作程序：操作程序：现在学习的是第31页，共33页1 1）如是手动的灭菌锅，灭菌过程中，应注意排）如是手动的灭菌锅，灭菌过程中，应注意排 净锅内冷空气，否则会影响灭菌效果。净锅内冷空气，否则会影响灭菌效果。2 2）灭菌结束后，要等温度降为）灭菌结束后，要等温度降为“0 0”，才可打开灭，才可打开灭 菌锅锅盖；菌锅锅盖；3 3）高压蒸汽灭菌时，须保持高温高压，因此必）高压蒸汽灭菌时，须保持高温高压，因此必 须严格按照操作规程操作，否则易发生意外须严格按照操作规程操作，否则易发生意外 事故。事故。 注意事项：注意事项：现在学习的是第32页，共33页分分子子生生物物学学2010实实验验感谢大家观看感谢大家观看现在学习的是第33页，共33页