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1、实验二 小鼠骨髓细胞染色体制备与观察,实验原理,小鼠骨髓细胞始终保持较强的分裂活性,且细胞数量较多。,秋水仙素,可以抑制细胞分裂时的纺锤体形成,使处于增殖状态的细胞停止在中期。注射到动物活体内,可以收集到较多的中期分裂相的骨髓细胞。,实验目的与要求: 1.熟悉小鼠骨髓细胞染色体制备方法。 2.了解小鼠染色体核型。 3.认识秋水仙素对细胞增殖的作用。 器材与试剂 内容与方法 (一)小鼠骨髓细胞染色体制备 预处理,取材,收集细胞,低渗,固定、再固定,滴片,染色,取材前23h,向腹腔内注射秋水仙素。注射浓度随动物种类不同而异。秋水仙素的主要作用是使分裂细胞阻断在有丝分裂中期,增加中期分裂相的比例。,
2、腹腔内注射秋水仙素23小时后,颈椎脱臼处死小鼠。,小白鼠骨骼标本,取出小鼠的后肢股骨,注意不要将股骨剪断,否则容易造成骨髓细胞的流失。,用纱布擦股骨上的肌肉组织,清除干净,注射器抽取生理盐水冲洗骨髓,收集细胞:,暴露骨髓腔, 反复冲洗骨髓腔获得骨髓细胞, 收集到离心管中, 定容至6ml.,滴23滴于玻片上,吹气, 在酒精灯火焰过火8次, 做记号,凉干,染色,滴片:,滴片后,将片子侵入Giemsa染液缸中,1015分钟,弃去染液,水洗,晾干,镜检。,作业与思考题,1、绘制一个你所观察到的小鼠骨髓细胞染色体中期分裂相。 2、本实验中秋水仙素、低渗液、固定液各起什么作用? 3、简述实验中应注意那些关
3、键问题?,(二)染色体标本片观察 1.标本片质量评价 (1)细胞密度合适、均匀; (2)背景干净,细胞核和染色体清晰; (3)有较多的分裂相; (4)染色体分散较好。,细胞密度,染色体分散度,2.染色体形态特征观察,3.染色体计数,(10010),15,16,9,9+16+15=40,10,8,22,22+8+10=40,4.细胞增殖指数统计,细胞增殖指数=,100%,实验三 细胞器的观察,一、中心体 二、高尔基体,一、中心体(410),马蛔虫子宫横切片全貌,中心体(1010),中心体(4010),二、高尔基体(410),脊神经节切片,高尔基体(1010),高尔基体(4010),高尔基体(4010),