薄层色谱法在药物研究中应用﹎.pdf

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1、个人收集整理仅供参考学习 1 / 14 1 薄层色谱法概述 2 1.1 定义 2 1.2 原理 2b5E2RGbCAP 1.3 特点 2p1EanqFDPw 1.4 定量检测方法 3DXDiTa9E3d 2 TLC 在药物分析方面地应用3RTCrpUDGiT 2.1 中药材地鉴别 35PCzVD7HxA 2.2 植物药成分地鉴别4jLBHrnAILg 2.3 化学药品及复方制剂5xHAQX74J0X 2.4 药品杂质检验 6LDAYtRyKfE 2.5 中药指纹图谱分析6Zzz6ZB2Ltk 2.6 在定量分析中得应用 13 7dvzfvkwMI1 2.6.1 薄层色谱定量方法 7rqyn14

2、ZNXI 2.6.2 薄层色谱在定量分析中得应用8EmxvxOtOco 3 薄层色谱新技术及其应用8SixE2yXPq5 3.1 高效薄层色谱（ HPTLC）86ewMyirQFL 3.2 假相薄层色谱 9kavU42VRUs 3.3 反相薄层色谱 ( RPTLC)10y6v3ALoS89 3.4 薄层扫描法 17 11M2ub6vSTnP 4 总结 120YujCfmUCw 个人收集整理仅供参考学习 2 / 14 薄层色谱在药物分析中地应用 薄层色谱 ( Thin Layer Chromatography，TLC) 在药物，尤其在植物药成分地 定性和定量分析方面早已有了非常广泛地应用.随着科

3、学技术地发展以及新材料 地应用，使其得到了很大发展，出现了许多新技术，如高效薄层色谱、假相薄 层色谱、反相薄层色谱、微乳薄层色谱在中药药物分析中已有一定地应用.TLC 在规范化、仪器化方面均取得了长足地进步，在大批量样品及某些特殊样品地 快速分析中，显示了分析容量大、可采用特征专属地显色剂以及极低地溶剂消 耗等优势 .近年来 TLC 广泛应用于有机化合物地分析鉴定、植物药有效部位地分 离精制、有机合成、结构分析、生物测定等，尤其在研究开发植物药有效部位 和中成药质量控制中，是用于定性、定量分析地最简便地科学方法.但TLC亦有 其缺陷，其色谱结果易受铺板质量、点样技术、展开剂配制、层析环境中展开

4、 剂地饱和度、环境温湿度等因素地影响，有时难于重复；显色又受均匀性、灵 敏度、稳定性等影响，这均使测定结果偏差较大 1 .最近几年围绕着测定过程地 标准化和自动化，薄层色谱技术有了全新地发展，扩大了 TLC技术在中药药物 定性定量分析中地应用 .eUts8ZQVRd 1 薄层色谱法概述 1.1 定义 薄层色谱法（ TLC）系将适宜地固定相涂布于玻璃板、塑料或铝基片上, 成 一均匀薄层 .待点样，展开后 , 根据比移值 (Rf) 与适宜地对照物按同法所得地色 谱图地比移值 (Rf ) 作对比，用以进行药品地鉴别、杂质检查或含量测定地方 法.sQsAEJkW5T 1.2 原理 薄层色谱法是一种吸附

5、薄层色谱分离法，它利用各成分对同一吸附剂吸附 能力不同，使在移动相(溶剂 ) 流过固定相 (吸附剂 ) 地过程中，连续地产生吸 附、解吸附、再吸附、再解吸附, 从而达到各成分地互相分离地目地.GMsIasNXkA 1.3 特点 薄层色谱法是快速分离和定性分析少量物质地一种很重要地实验技术，也 个人收集整理仅供参考学习 3 / 14 用于跟踪反应进程，它可以同时分离多个样品，分析成本低，对样品预处理要 求低，对固相、展开剂地选择自由度大，适用于含有不易从分离介质脱附或含 有悬浮微粒或需要色谱后衍生化处理地样品分析.TLC 法是一种快速、灵敏、高 效地分离微量物质地方法，是最简单地色谱技术之一，具

6、有操作方便，设备简 单， 分离效率高，专属性好，分析速度快，色谱参数易调整等特点，在药物分 析中应用较为广泛 .TIrRGchYzg 1.4 定量检测方法 （1）吸收测定法对在可见及紫外光区有吸收地化合物可用钨灯和氖灯在 20-800nm 范围进行透射和反射吸收法测定.7EqZcWLZNX （2）荧光测定法化合物本身或者经过色谱前和色谱后衍生化生成对紫外有 吸收并能放出更长波长地化合物适用荧光法测量, 荧光法灵敏度高 .lzq7IGf02E （3）荧光淬灭法本身无色、又无特征紫外吸收或荧光，并且不易衍生地化 合物可采用荧光淬灭法测量，使用含有荧光剂地薄层板 2.zvpgeqJ1hk 2 TLC

7、 在药物分析方面地应用 2.1 中药材地鉴别 用薄层色谱进行指证性鉴别，它们之间地关系是共性与个性地关系.制备试 药生药 -共性化合物 -共性特征 (指示性地 ) 薄层色谱个性化合物个性特征(Rf值、 颜色)薄层色谱为生药提供了一个可信地“ 身份 ” ，它可以提供分子水平上地鉴别 作用， 从而确定是不是认定地生药，是不是道地地生药，是不是已失效地生药. 中华人民共和国药典 2005 版一部规定，人参和西洋参地鉴别必须使用薄层色谱 法.取人参及西洋参粉末各19，制成供试品溶液；另取它们地对照药材19，同法 制成对照药材试液，再取人参单体皂普Rbl 、Re、Rgl、Rf 和拟人参皂昔 Fll 制

8、成对照品溶液，于同一硅胶G薄层板上进行色谱层析，规定供试品谱中，在与 对照药材色谱及对照品色谱相应地位置上，在日光及紫外光(365nm) 下，分别 显相同颜色地斑点或荧光斑点.在这里我们可以看到，人参分子特征是人参皂营 单体，其伪品异类不具备这种分子个性特征, 而且同属不同种地人参和西洋参分 子特征亦不同，人参特含皂普Rf， 而西洋参则特含拟人参皂昔Fl l . 这在某种程 度上给我们规定了人参特征谱系.这种分子地不同、谱系地不同，就区别了药材 个人收集整理仅供参考学习 4 / 14 地异同 3 .黄玉清 4 采用TLC 鉴别牡丹皮及其伪品芍药根皮，取牡丹皮、芍药根 皮粉各 1g， 用乙醚提取

9、后挥发，残渣加丙酮溶解，作为供试液；另取丹皮酚、 芍药苷分别加丙酮溶解制成对照液，分别点于同一硅胶G 板上, 以环己烷 - 乙酸 乙酯( 3：1) 为展开剂 .展开后，晾干，喷以2%三氯化铁乙醇溶液，牡丹皮供试 液与丹皮酚对照液位置上显相同地紫色斑点，芍药根皮供试液与芍药苷对照液 相应地位置上显相同地蓝色斑点.NrpoJac3v1 在中成药及其复方制剂方面，赵志军等 5 建立了益康胶囊地 T LC 鉴别方 法，对方中组成药物人参、黄芪、何首乌、丹参及甲基橙皮苷进行鉴别.结果， 斑点清晰，分离效果好，专属性强，阳性对照无干扰.金阳 6 研究破壁灵芝孢子 粉胶囊地 TLC 鉴别方法 , 通过对集中

10、提取及展开系统地比较，对破壁灵芝孢子 粉地鉴别选择 GF254 板，用石油醚 ( 60 90) - 甲酸乙酯 - 甲酸( 15：5：1) 地 上层溶液为展开剂 .结果，鉴别效果好，能很好地把破壁灵芝孢子粉和灵芝区别 开来.1nowfTG4KI 2.2 植物药成分地鉴别 TLC 法在植物药成分鉴别方面地应用已极为广泛.印度M.S.大学地 Murthy 等 7 在2008 年首次报道了关于莕菜属植物Nymp hoides macrospermum Vasudevan 中 桦木酸 (betulinic acid)地TLC检测方法，该方法将2.5g N. macrospermum 根粗粉 用25mL甲

11、醇溶液水浴加热回流提取30min，同法提取 4 次后合并提取液，滤 过、离心后制成一定浓度地甲醇溶液.将该样品溶液与桦木酸甲醇对照液同时在 TLC 硅胶G60 F254 预制板上点样，用环己烷2醋酸乙酯 2冰醋酸 (7 3 0. 03) 溶剂系统展开，30 min 后取出吹干，用茴香醛2硫酸溶剂喷淋，110 加热 3 min 显色，斑点在紫外 2可见光下检视，结果显示分离效果良好，Rf = 0. 60.该 方法在桦木酸地检测方面以快速、简便、准确地特点优于其他方法.fjnFLDa5Zo 新德里生物技术研究所地 Ram 等 8 在对多种药用植物地研究中建立了一种 甲羟戊酸 (mevalonica

12、cid) 地快速 TLC 检测方法 ,实验对象包括黄花蒿Artemisi a annua L.、补骨脂 Psoralia corylifolia L . 、长春花 Vinca rosea L . 、催眠睡茄 Withani asomnifera (L.) Dunal、黄叶假杜鹃 Barleria prionitis L . 等药用植物地 叶，方法采用硅胶 G60 F254预制板，展开系统选用苯2丙酮(3:2) ，先将薄层板 在甲醇中浸泡 1 h 去除杂质，干燥后备用.粉碎地植物叶片用色谱纯醋酸乙酯提 个人收集整理仅供参考学习 5 / 14 取，与对照品醋酸乙酯溶液同时点样展开，室温30 ，相对

13、湿度 55 %，衍生试 剂为0. 05 mL/ mL 茴香醛醋酸溶液 -乙醇-97 %硫酸(10:85:5) ，110 下加热 5 min 显色.该方法简单、快速、灵敏度高.布达佩斯地 Ligor 等研究了多种茶叶中活性 物质黄酮类地 TLC 检测方法 ,提出将经典液相萃取提取方法(LE) 和超临界液体萃 取法(SFE) 作比较，并用 TLC 法检测在不同提取方法下活性成分地量.tfnNhnE6e5 2.3 化学药品及复方制剂 近年来 TLC 法以其快速、简便、准确地特点，在化学药物成分地研究中仍 有很多应用 .波兰J agiellonian 大学地 Starek 等利用 TLC 法对抗炎药吡

14、罗昔康地多 种剂型及其降解产物进行了研究测定，其中，胶囊和注射剂用丙酮溶解，片剂 在0. 5 mol/ L地盐酸溶液中水浴加热至 60 ，再制成丙酮溶液 .该方法地展开系 统为醋酸乙酯 -甲苯 -氨基丁烷 (2 :2:1)，紫外吸收法测定检测波长360nm.研究结 果表明，吡罗昔康地稳定性良好，不易降解，且在碱性环境下比酸性环境更稳 定，其降解产物为嘧啶 -2-胺和2-甲基-2 ,3-二氢-4 H-1 ,2-苯并噻唑 -1 ,1 ,4-三酮.该 方法稳定可靠，快速准确，可用于该类药物地分析鉴定.HbmVN777sL 波兰Jagiellonian 大学地 Ekiert 等 用TLC测定唑类抗真菌

15、剂，这是抗真菌唑 类药物成分检测地新方法，目前鲜有报道.该实验对酮康唑、联苯苄唑、氟康唑 和伊曲康唑 4 种抗真菌剂进行了测定，前3 种用甲醇溶解定量，伊曲康唑用氯仿 溶解，并制成甲醇溶液.经选择 TLC 板用硅胶 60F254 荧光板，展开系统选用正 己烷-醋酸乙酯 -甲醇 -水-冰醋酸 (42:40:15:2:1)，UV检测波长 260nm.该法准确简 便，专属性强，可作为抗菌素类药物TLC 法研究地参考 .V7l4jRB8Hs 药品地亲脂性是指某分子或分子地一部分对类脂环境地亲和性，有机化合 物地亲脂性可以影响它们地吸收、分布、代谢和排泄等，所以药品地亲脂性研 究对于药品地生物利用度地预

16、测有着重要意义.传统地亲脂性研究是用液-液分配 地方法测定，比较费时繁琐，反相TLC 法亲脂性研究方法地引入解决了这一问 题.Hamryt 8等用RP2TLC 方法研究了 12 个精神类药物地亲脂性 .选用Merck C18 硅胶F254HPTLC 薄层板 (10 cm 10 cm)，考察了多种流动相组合，结果表明最 好地流动相为：甲醇 -水-0. 01 mol/L SDS-10%醋酸盐缓冲液 (pH 4.75) 、醇-水- 1 %氨水、乙腈 -水-1%氨水和二氧六环 -水-1%氨水；而 Cserely等用相对于反相 TLC 板便宜地石蜡油涂层地硅胶板研究了12 种血管紧张素转化酶抑制剂(AC

17、E) 个人收集整理仅供参考学习 6 / 14 地亲脂性，其薄层板地制备方法为：TLC 硅胶板用 10%石蜡地正己烷溶液连续 展开18 h ，以石蜡油饱和 TLC 硅胶颗粒涂层，板经干燥后在48 h 内使用，流动 相则选择不同比例地乙腈-水-氢氧化铵溶液，用样品地Rf 值计算相应地亲脂 性.83lcPA59W9 2.4 药品杂质检验 有关物质检查通常采用色谱法，可根据有关物质地性质选用专属性好，灵 敏度高地薄层色谱，高效液相色谱(HPLC ) 及气相色谱 (GC ) 法.薄层色谱法设备 简单，操作简便，但因影响重现性和精密度地因素较多，可用作一般有关物质 检查 .采用反相薄层色谱法，建立了阿德福

18、韦酷有关物质检查法.以反相高效 F254 薄层板 (HPTLC RP18 F254) 为吸附剂，以甲醇一水 (3 :1)为展开剂，在紫 外光灯 254nm下检视，阿德福韦醋与其有关物质地分离状况良好，检测灵敏度 高，最小检测限为 0.1微克.采用薄层色谱法，建立了雌三醇栓中有关物质地检查 方法，以硅胶 G 板为吸附剂，以氯仿-甲醇 -丙酮-冰醋酸 (9 :0.5 :0.5 :0.5)为展开 剂，展开后，晾干，喷以30%硫酸乙醇液，在 100加热至斑点清晰 .结果3 种有 关物质与原药完全分离，Rf 值适中，最低检出量为 0.2 p g，且重复性好 .采用薄 层色谱法检查复方氨酚烷胺颗粒中地有关

19、物质(对氯苯乙酞胺 )，使用 0.5% 梭甲 基纤维素钠 (CMC ) GF 254 硅胶板，以氯仿 -丙酮-甲苯(13 :5 :2) 为展开剂，紫外 光灯254nm 下检视，结果检出对氯苯乙酞胺杂质斑点与其它主药成分斑点分离 良好, 空白样品溶液地斑点对杂质斑点无干扰，重现性好，f 值适中，能有效检 出有关物质 2 .mZkklkzaaP 2.5 中药指纹图谱分析 中药指纹图谱可有效反映中药成分地复杂性，表征中药质量.其作为中药质 量标准地一个方面，广泛用于鉴别样品地真伪或产地，有效成分研究等方面 10. 色谱法是中药指纹图谱地主流，主要有GC、HPLC、T LC 等.TLC 因其便宜、 快

20、速、开放性、灵活性等优点，用于中药指纹图谱分析.TLC 地一大优势是提供 直观形象地可见光或荧光图像，特征图像直观，专属性好，判断速度快，非常 适合基层日常分析与现场检验使用.广藿香主要含萜类、黄酮类、醇、酸、铜、 醛类等化合物，广藿香不同提取部位具有不同地药物效应.袁旭江等 11研究不同 产地广藿香药材薄层色谱指纹图谱地差别，取不同产地广藿香样品6 个，采用 T 个人收集整理仅供参考学习 7 / 14 LC 检测其化学成分 .结果，不同产地广藿香挥发油部位中成分薄层色谱行为相 似，不同产地广藿香甲醇提取部位与石油醚提取部位成分则存在明显差异.薄层 扫描仪具有原位扫描功能, 通过测量薄层色谱

21、Rf 值，原位紫外 - 可见吸收光谱， 结合板上化学特征反应形成薄层扫描中药指纹图谱.崔淑芬等 12 使用薄层扫描 法测定不同品种和产地地甘草并建立了指纹图谱，可快速判断药材品质，有效 控制甘草质量 .AVktR43bpw 2.6 在定量分析中得应用 9 2.6.1 薄层色谱定量方法 混合物在薄层上经过展开及用适当方法定位后可获得一个或多个斑点，根 据斑点地颜色和在薄层上地位置( Rf 值) 可对样品进行定性分析，此外对斑点 还能进行半定量或定量分析.常用地定量方法有目测法、斑点面积法、洗脱测定 法和薄层扫描法等 .ORjBnOwcEd 目测法是将试液与一系列不同浓度地标准溶液并排点样于同一薄

22、层上，层 析展开后比较各斑点地大小及颜色地深浅，可藉以估计某一组分地大概含量.目 测法只是一种半定量方法，它只能作初略地定量，如在进行大批未知量地样品 测定前，可用该法估计样品中欲测组分含量，为正式定量提供合理地点样量.斑 点面积法薄层上斑点地面积与含量之间存在一定关系，因此测量斑点面积可以 定量；斑点面积和含量之间地关系曾有不少报道，概括起来有以下几种不同地 线性关系，即lgw-A 呈线性关系，lgw-A 呈线性关系，lgw-lgA 呈线性关 系.2MiJTy0dTT 究竟哪一种线性关系适合所测定地试样，需通过试验来确定.斑点面积地测 量可用面积测量仪，也可用剪纸称重法和数格法等.利用斑点面

23、积法进行定量， 仪器设备比较简单，但对层析操作要求较为严格，误差为5% 15%，常作为半 定量分析方法；洗脱测定法是目前较常用地定量测定法，该方法是先将被测组 分地斑点位置确定，将斑点取下，用溶剂将被测组分洗脱下来，收集洗脱液并 用适当地方法，如紫外吸光光度法、比色法、电化学方法等进行检测.洗脱测定 法虽然操作步骤较多，但只要仔细操作，结果还是比较准确地，因此在没有薄 层扫描仪地实验室，用洗脱测定法还是可以解决定量问题地；薄层扫描法用于 定量地薄层色谱仪称为薄层色谱扫描仪，用这种仪器对薄层上被分离地物质进 个人收集整理仅供参考学习 8 / 14 行直接定量地方法称为薄层扫描法.即以一定波长和一

24、定强度地光束扫描分离后 地各个斑点，用仪器测量通过斑点或被斑点反射地光束强度地变化以达到定量 地目地 .测量方式可分为透射光测定法、反射光测定法以及透射光和反射光同时 测定法 .扫描所用光线可分为可见光、紫外光及荧光三种.定量方法可用外标法、 内标法和归一化法 .薄层扫描法定量简单快速，斑点吸收峰地描绘和吸光度地积 分值可自动记录，每小时可完成60 个试样地测定，一般测定一个试样只需几分 钟，而且测定地灵敏度和准确度都较高, 检出灵敏度为 10-6 10-9g, 误差约为 3%.gIiSpiue7A 2.6.2 薄层色谱在定量分析中得应用 薄层色谱由于对被分离物质地性质没有限制，可同时进行多个

25、样品地分 离， 并可重复测定，可以扫描或彩色摄影永久保存；又由于吸附剂地高效化、 定量分析地仪器化和自动化，提高了薄层色谱地分辨率及重现性，因此气相色 谱和高效液相色谱并不能完全代替薄层色谱，在实际工作中薄层色谱仍是被广 泛应用地一种方法 .uEh0U1Yfmh 3 薄层色谱新技术及其应用 薄层色谱法 (TLC) 是较早应用于中药快速分离和定性分析少量物料地一种 非常重要地技术 .由于其操作简便、色谱结果直观、显色方法可选性大，兼具分 离鉴定双重功能，还可作为HPLC 选择色谱体系，预测分离地先导技术.而涉及 地设备价格低廉，故应用较为广泛.但 TLC 亦有其缺陷，其色谱结果易受铺板质 量、点

26、样技术、展开剂配制、层析环境中展开剂地饱和度、环境温湿度等因素 地影响，有时难于重复；显色又受均匀性、灵敏度、稳定性等影响，这均使测 定结果偏差较大 .最近几年围绕着测定过程地标准化和自动化，薄层色谱技术有 了全新地发展，扩大了TLC技术在中药药物定性定量分析中地应用 14 .IAg9qLsgBX 3.1 高效薄层色谱（ HPTLC） HPTLC地薄板是由较细颗粒地吸附剂用喷雾法制成地.点样采用新地装置， 可以自动或半自动完成，在同一块板上点样数增加.展开方式除了同普通 TLC一 样地直线展开外，还可采用圆心式展开和向心式展开.由于改进了点样技术, 板 技术, 提高了检测灵敏度， HPTLC地

27、分离能力大大提高，比普通TLC提高3倍.同 个人收集整理仅供参考学习 9 / 14 时又保存了 TLC 在敞开式床上进行分离地优点，可逐步展开，同步检测，并不 存在中毒问题 .用HPTLC不仅可以定性，还可用于定量分析.对生物体内药物分 析，抗菌素发酵成分分析，药物制剂分析及植物药中有效成分地分析有独特地 优势 15.WwghWvVhPE TLC 常用于分析测定生物碱、黄酮类物质.HPTLC 法对这类物质地分离效果 更好，且扩大了物质分析地空间.最近几年 , HPTLC 法用于中药药物地分析报导 数量大大增加 .杨小明等用反相高效薄层色谱：从银杏叶地石油醚提取物中分离 获得了纯度较高地聚戊烯醇

28、同系物地混台物；张尊听等以高效薄层色谱扫描法 测定野葛根中游离葛根索及总葛根索含量；伍庆用高效薄层色谱法建立了快速 测定知母药材中菝葜皂苷元地方法；米莉莉等用高效薄层色谱扫描法对天然虫 草与人工虫草菌丝体中核苷类有效成分进行含量测定，同时建立了不同虫草样 品地荧光淬灭薄层色谱指纹图谱；梁小洁等用高效薄层色谱法建立仙方玉容膏 中黄芪甲苷含量地测定方法；梁乾德等综合运用高效薄层色谱(HPTLC)、高效 液相色谱 (HPLC) 、电喷雾离子化质谱 (ESI- MS) 3 种方法对四物汤地cl，c2， c3 部位及四味单药相应部位进行分析和比较；库尔班江等用硅胶G254 高效薄 层色谱法双波长法对葛根

29、中地有效成分葛根素；对玉泉丸中葛根素和大豆苷元 地含量进行了同时测定；对葛根芩连胶囊中葛根素和大豆苷元地含量进行了同 时测定； 对心可舒片中葛根索地含量进行了测定；对不同厂家正青风痛宁片中 青藤碱 (Sinomenine) 地含量进行了测定；对冠心通脉灵片中葛根素和大豆苷元 地含量进行了测定 .asfpsfpi4k 这些不同实验结果均显示用HPTLC法测定中药药物中地成分，斑点与上下 斑点距离较远，清晰， 圆整，无托尾，稳定性和重现性好，板间误差小，分离 效率高，快速方便， 可以作 为 中药 质 量控制 和含量测定地依据 和分析方 法.ooeyYZTjj1 3.2 假相薄层色谱 假相TLC所使

30、用地地流动相不是有机溶剂，而是低浓度地表面活性剂及环 糊精地水溶液，固定剂一般为聚酰胺薄膜.其中以表面活性剂和其他溶剂组成地 束胶溶液，以其选择性溶解力，梯度洗脱光学检测方面地独到之处，以及流动 相地简单、无毒、不燃烧、价格低廉、处理方便，引起了人们普遍地兴趣.假相 个人收集整理仅供参考学习 10 / 14 TLC能使一些不溶于水地物质及芳烃异构体得到较好地分离，还可用于药物中 微量杂质地限量检查及体内药物分析 16 .BkeGuInkxI 以聚酰胺为固定剂，表面活性剂地胶束溶液为流动相地假相薄层色谱技术 已成功地应用于中药药物地分离鉴定.林辉概等分别以不同浓度地表面活性剂 SDS，SDBS，

31、TrionX 100，OP，Tween 80，TPC，CTAB，CPC，Zeph地胶 束溶液和 TrionX - 100与SDS， SD2BS，TPC，CTAB 等混合胶束溶液为展开 剂，研究了槲皮素、桑色素和芦丁地胶束薄层色谱行为，拟出了以4% Zeph-乙 酰丙酮 -水( 5:1. 5:5)溶液为流动相，聚酰胺为固定剂地三种黄酮地分离体系, 并 对槐花试样中地黄酮进行分离和鉴定, 得到了良好地效果.杜林等分别用 CTAT ( 溴化十六烷基三甲铵 ) 和SDS ( 十二烷基硫酸钠 )作展开剂对苦参散中各个组分 进行了分离鉴定，发现在一定地溶液浓度下, 两种表面活性剂地胶束溶液都可以 分离出单

32、体成分，且 CTAT 胶束溶液展开效果优于 SDS胶束溶液 .戈早川等以 2% CPC- 醋酸乙酯 ( 9:1)胶束溶液为展开剂，在聚酰胺薄膜上成功地分离了黄连及 其制剂种地小檗碱、巴马汀和药根碱，并建立了同时测定四种成分地胶束薄层 扫描法 .梁淑芳等以十二烷基硫酸钠( SDS)-正庚烷 -正丁醇 -水微乳液作为展开 剂，通过聚酰胺薄层色谱，考察了微乳液类型对沙棘黄酮分辨率地影响，结果 显示含水量 70% 地微乳液作为展开剂，检测灵敏度显著提高，分辨效果理想， 为沙棘黄酮地简便正确分离建立了新型地色谱方法.PgdO0sRlMo 3.3 反相薄层色谱 ( RPTLC) 在薄层色谱中，当流动相地极

33、性大于固定相地极性时，就形成反相TLC， 一般反相 TLC地固定相是化学键合相，虽然制备稍复杂，但其斑点扩散小，广 泛用于多种药品地分离，特别适合于组分复杂地混合物地分离.化学键合相硅胶 地硅烷化程度也可为分离提供选择性.可根据样品性质选择适当固定相材料，实 现最佳分离效果.RPTCL 主要用于极性成分复杂地样品，又可用来考察摸索 HPLC地分离条件 .3cdXwckm15 对于含有极性成分地中药地分析鉴定，RPTCL法无疑具有相当地优势.张子 忠等以甲基键合硅胶 CF254板，甲醇 : 水(7:3)为展开剂，对北沙参地成分进行测 定，测出了 8个主要谱峰，并对欧前胡素成分进行了定性，同时测定

34、了色谱参 数，结果表明 RPTCL法能简便、快速、高效地分离北沙参中地欧前胡素，该板 个人收集整理仅供参考学习 11 / 14 性能良好；用 BC18F254板，乙腈 2水(1B1)作展开剂，展开 8 cm 反相薄层色谱扫 描法分离并检测蟾酥中地8个成分，其中脂蟾毒配基地定性、定量方法已被建立. 并用此法测定了 3个蟾酥样品中脂蟾毒配基地含量，平均回收率为103. 8%，变 异系数 (CV)小于 2，比现有其它方法重视性好，分离效率高，操作简便；对不同 产地、不同时间采收地蔓荆于中牡荆素和对羟基苯甲酸进行了反相薄层色谱定 量分析比较考察了多种因素对分析地影响，同时优化了实验条件，用于蔓荆于 中

35、 上 述 两 成 分 地 分 析 ， 简 便 重 现 牲 好 平 均 回 收 率 分 别 为 93. 9%， 91. 2%.h8c52WOngM 3.4 薄层扫描法 17 薄层扫描法 ( TLC Scanning method) 亦称薄层光密度法 ( TLC Densitometr y) . 它是薄层色谱技术与光密度计和微型电子计算机结合起来地一种新型仪器分析 方法.应用薄层扫描仪( 或称薄层光密度计 ) 可同时对各种复杂地样品进行分离 和测定 .鉴于其简便快速、灵敏准确、专属性好，因此在生命科学中得到广泛地 应用.现已被国内外药典所采用.v4bdyGious 薄层色谱法在各国已公认为法定方法

36、，但作为定量测定地薄层扫描法，虽 然早在 50 年代初就已进行研究，但进展较慢.直至 70 年代后应用了Kubelka- Munk 理论推导出反射吸收度与浓度地函数关系才得以成功地解决.虽然当浓度 增加至一定程度时不成线性，且与薄层板地性质有关，但是随着电子计算机发 展与应用，在薄层光密度计内装有线性化器，由微型电子计算机地程序控制， 通过01 吸收度单位之间曲线上地 7 个点进行校正，使 Kubelk 理论曲线中地非 线性化数据转变为线性值，使之符合Beer s 定律，即可定量测定 .J0bm4qMpJ9 蛋白质多肽地基本组成为氨基酸，在临床医学中占有重要位置.林敏等用 CS-930 薄层扫

37、描仪测定了人血丙种球蛋白地纯度，作者在醋酸纤维膜上点样 2L( - 球蛋白 120 g) ，经电泳染色后洗净滤膜并用滤纸吸干，选用波长595nm 进行测定 .按归一化计算纯度，结果为97. 0% 97. 8%，平均回收率为 100. 7% ( n= 5) .Nor folk 等用高效薄层色谱 ( HPTLC) 硅胶板、纤维素板、 C-18 键合硅胶 板分离了血淋巴液中地18 种氨基酸，并用薄层扫描光密度计测定了其中地丙氨 酸和天冬氨酸 .Dehtiar等定量测定了发酵肉汤中赖氨酸、苏氨酸、丝氨酸和钴氨 酸( VitB12) ；Das 等用薄层扫描法测定了从甘蔗中提取地蛋白质氨基酸，实验 将样品

38、水解后，用 dansyl:Cl 衍生化，采用硅胶 HPTLC 板点样后，以 5%EDT A- 个人收集整理仅供参考学习 12 / 14 乙醇-二乙醚 ( 5: 10: 35)流动相展开后测定 .XVauA9grYP 左旋咪唑是抗癌药之一王建华等用薄层扫描法测定72 例鼻咽癌患者尿中左 旋咪唑地含量 .实验采用碱性硅胶 GF254板，流动相为氯仿 -甲苯-丙酮 ( 7: 5: 2) . 尿样经碱化用乙酸乙酯提取，浓缩后点样.用CS-930 薄层扫描仪以盐酸普鲁卡因 为内标，在波长 236nm 处测定，其线性范围在 5200nmolL -1.平均回收率： 96. 9% ( n= 5) ，最低检出浓

39、度： 3. 05nmolml -1，尿样检出浓度 : 58.1nmolml-1， 为指导临床用药提供了参考.bR9C6TJscw 4 总结 传统TLC技术由于精密度和重现性均较差，曾一度被其他快速发展起来地 分离分析技术所取代，然而20 世纪80年代以来，随着薄层在色谱板、点样技 术、展开技术方面地发展，薄层色谱地规范化和仪器化程度大大提高.加之直 观、经济、简便地特点，将在中药多样品地分析中发挥更大地作用.pN9LBDdtrd 参考文献： 1 吕武清 , 龙新华 . 中成药中地药材薄层色谱鉴M. 北京 : 人民卫生出版社 , 1997: 2.DJ8T7nHuGT 2 冯雅赋 . 薄层色谱法在

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44、, and design. Copyright is personal ownership. LOZMkIqI0w 用户可将本文地内容或服务用于个人学习、研究或欣赏，以及 其他非商业性或非盈利性用途，但同时应遵守著作权法及其他相关 法律地规定，不得侵犯本网站及相关权利人地合法权利. 除此以外， 将本文任何内容或服务用于其他用途时，须征得本人及相关权利人 地书面许可，并支付报酬.ZKZUQsUJed Users may use the contents or services of this article for personal study, research or appreciation

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