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1、现在学习的是第1页，共33页l免疫胶体金技术 是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗 体的一种新型的免疫标记技术。l胶体金标记 实质上是蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程。现在学习的是第2页，共33页现在学习的是第3页，共33页现在学习的是第4页，共33页 现在学习的是第5页，共33页现在学习的是第6页，共33页不足： 金免疫测定中应用的是单份试剂，难于进行质量控制。即使是同一批生产的试剂，也很难保证每个试剂的同一性。因此金免疫测定一般只能用于定性试验。其定量检测和灵敏度的提高还有赖于新原料和新材料的开发与应用。现在学习的是第7页，共33页H2O, 100OCH2AuCl4Cit-C
2、it-Cit-Cit-Turkevich, et. al. Discussions Faraday Soc. 1951, No. 11 55-75.OOOOHOOO现在学习的是第8页，共33页现在学习的是第9页，共33页Add 100 mL of 1.0 % HAuCl4 to a 200 mL Erlenmeyer flask on a stirring hot plate. Add a magnetic stir bar and bring the solution to a boil To the boiling solution, add 1.5 mL of a 1% solution
3、 of trisodium citrate dihydrate, Na3C6H5O7.2H2O Stop heating when a deep red color is obtained. 现在学习的是第10页，共33页现在学习的是第11页，共33页Good gold colloids and bad (unstable) gold colloids . 劣质金外形不均一，且非球形，有凝集现象，颗粒间变异系数较大 现在学习的是第12页，共33页Strongest binding suggested to be the sulfur hinge joining the the two Fc r
4、egions现在学习的是第13页，共33页胶体金颗粒带电情况 抗体和金颗粒的耦联（图出处：IVD Technology） 现在学习的是第14页，共33页现在学习的是第15页，共33页现在学习的是第16页，共33页现在学习的是第17页，共33页现在学习的是第18页，共33页现在学习的是第19页，共33页现在学习的是第20页，共33页现在学习的是第21页，共33页现在学习的是第22页，共33页 现在学习的是第23页，共33页现在学习的是第24页，共33页样本垫可使用化学物质进行浸渍处理，从而减少样本差异，提高试验的灵敏度。通常可以将洗涤剂、粘性增强剂、阻滞剂及盐渗入样本垫然后加以干燥，该工艺可避免
5、使用复杂辨识剂/追迹缓冲液的麻烦，使检测一步完成。现在学习的是第25页，共33页u结合垫(Conjugate pad)： 玻璃纤维、聚酯膜、纤维素滤纸、无纺布等多种材质，多种规格，批间稳定。结合垫的作用主要为： -吸附一定量的金标结合物颗粒；-吸附并持续不断的将样品转移到NC膜上；-保持金标结合物颗粒的稳定性；-保证金标结合物颗粒定量完全释放等。 现在学习的是第26页，共33页u硝酸纤维素膜( Nitrocellulose)： 推荐使用Millipore，MDI，S&S，whatman 等国外公司的硝酸纤维素膜。 NC膜的作用： - 在检测线和对照线条带区域固定抗体；-样品在NC膜上流动并与试
6、剂混合发生免疫反应；-反应在NC膜上显色，读检测结果 NC膜的重要参数： 孔径、对称性、层析速度、表面活性剂、蛋白结合力、强度、表面质量、厚度、批间均一性等。现在学习的是第27页，共33页现在学习的是第28页，共33页现在学习的是第29页，共33页现在学习的是第30页，共33页u片材： 不干胶塑料衬底，片材的质量很大程度上影响了产品的货架期。u吸收垫(Absorbent Pad)： 提供高吸收率、高容量以及相对稳定吸收率的吸收纸； 吸收纸的作用： 主要表现在控制样品的流速，促进虹吸作用以及使试剂跨过膜而不仅仅移到膜上。现在学习的是第31页，共33页胶体金法检测胶体金法检测TB-Ab(双抗原夹心法双抗原夹心法)现在学习的是第32页，共33页感谢大家观看感谢大家观看8/31/2022现在学习的是第33页，共33页