病理检验技术(1)(28页).doc

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1、-病理检验技术(1)-第 28 页荧光原位杂交 FISH用DNA探针与组织切片上互补的DNA杂交，通过观察荧光信号在染色体上的位置和颜色来反映相应基因的情况 。第一章 病理检验技术概述病理学的作用： 1、研究疾病的病因、发病机制，认识 疾病的发生发展规律 2、为临床诊断疾病、治疗疾病、分析预 后提供依据等。病理检验的定义： -在临床医疗实践中，通过对患者病变组织或细胞进行检查，以协助临床诊断疾病的方法称为病理检验。一、病理检验的主要任务（一）确定疾病的诊断（二）为临床选择治疗方案提供依据（三）提供有关预后因素的信息。（最正确、最可靠、最后的诊断）（四）了解疾病的发展及分析疗效（五）为科学研究积

2、累资料（六）为提高临床诊断水平服务二、病理检验分类（一）细胞学检验（脱落细胞、细针穿刺吸取）（二）组织学检验-最后的诊断 活体组织检验、手术标本检验、手术中病理检验（三）尸体剖验病理学技术： 在病理学临床及科学研究工作中使用的各种技术方法统称为病理学技术。病理检验技术的质量和水平是临床病理诊断工作中至关重要的因素。“技术是病理学之母。”第二节、病理检验技术常规工作收发工作协助取材和尸体剖检工作制作制作切片及细胞学涂片病理资料管理及检索药品、物资的管理及仪器维护大体标本的收集和制作第六章 组织制片技术 P39常规石蜡切片制作程序组织固定取材固定脱水透明浸蜡包埋切片染色封片观察第一节 组织块的处理

3、（一）组织切片制作过程中的各种操作： 1、取材与固定：合理取材、及时固定； 2、洗涤、脱水、透明； 4、浸蜡、包埋； 5、切片、贴片（展片、捞片）和染色： 6、封片：长期保存。一、取材： -按照病理检查的目的和要求，切取适当大小和数量的组织块，用于制作组织切片的过程。 注意事项： 部位、大小、形状、方向二、固定和固定液 固定：将组织浸入某些化学试剂，使组织细胞内的物质尽量保持在生活状态时的形态结构和位置过程。（一）固定目的： （1）防止组织、细胞的自溶与腐败； （2）凝固或沉淀细胞内物质； （3）增加组织硬度，便于制片； （4）产生不同的折光率，有利于染色后观察辨认。（二）固 定 方 法：1、

4、浸泡固定法：病理外检一般均用此法；2、注射、灌注法：体积过大或整个脏器或尸体的固定；3、微波固定法：应用于临床病理快速诊断，微波固定组织温度至关重要。微波固定介质可用 生理盐水或10%甲醛。4、蒸汽固定法：为了固定组织中可溶性物质、 血液、细胞涂片等；（三）固定液的特性：1、渗透力强，迅速渗入组织内部2、不会使组织过度收缩或膨胀3、能硬化组织，保持细胞形态和位置4、使组织对染料产生亲和力，产生折光率 （四）组织固定注意事项：1、及时固定2、固定容器宜大3、固定液应足量：固定组织体积的10-20倍4、防止组织变形5、确定恰当的固定时间（五）组织固定液常用固定液： 1、4%甲醛（福尔马林）：配置为

5、市售的40%甲醛1份加水9份混合即成； 2、酒精（乙醇）：高浓度组织硬化显著，先用80%固定数小时，再用95%固定； 3、中性缓冲甲醛液：可提高免疫组化阳性率。 4、酒精-甲醛液（A-F固定液）： 5、Zenker固定液：1、4%甲醛（福尔马林）：久置能产生白色沉淀（三聚甲醛），容易氧化变成甲酸，严重影响细胞核着色。 固定陈旧多血脏器如肝脾，易产生黑色色素，叫甲醛色素。2、酒精（乙醇）： 高浓度组织硬化显著，先用80%固定数小时，再用95%固定； 50%以上浓度的乙醇可溶解脂肪和类脂质，也可以溶解血色素和损害其他色素。中性甲醛液配置：40%甲醛150-200ml，蒸馏水800-850ml，磷酸

6、二氢钠4g，磷酸氢二钠13g。 常用的固定液或标本保存液，是免疫组化最常用的固定液。选择性固定液：1、丙酮：广泛用于组织化学中酶的固定；2、戊二醛固定液：广泛用于电镜标本的固定，应采用缓冲液配制固定液3、醋酸：不能保存糖，也不能固定脂肪及类脂，5%醋酸pH23可抑制细菌和酶的活性；4、苦味酸：强酸，易燃易爆，酒精溶液可固定糖类；5、氯化汞：只宜固定薄片组织，2mm3mm厚的组织需固定618小时；6、重铬酸钾：固定高尔基体、线粒体，对酸性染料着色良好；7、锇酸：浓度为1%2%水溶液用于电镜制片；骨组织脱钙液： 在脱钙前，先将骨或钙化组织锯成4mm5mm厚的簿片，按常规充分固定，然后进行脱钙。组织

7、脱钙的方法及应用：（一）酸性溶液脱钙： 1、脱钙液配制：（1）5%10%硝酸水溶液：浓硝酸5ml10ml，蒸馏水加至100ml；（2）硝酸甲醛液：浓硝酸10ml，10%福尔马林90ml；（3）Schridde液：浓硝酸20ml，10%福尔马林100ml。对组织无明显损害，迅速、安全；（4）5%10%甲酸水溶液：甲酸5ml10ml，蒸馏水加至100ml（5）甲酸酒精液：脱钙速度较硝酸慢，但破坏组织也轻。（6）Plank-Rychlo液：脱钙比5%硝酸液快3倍。Jenkins混合酸脱钙液、盐酸氯化钠液、枸橼酸钠、甲酸脱钙液等2、脱钙方法：骨片悬于脱钙液中，敞开瓶口，每日更换一次新液，最好早晚各一次

8、。（二）螯合剂脱钙：速度很慢，但对组织成分几乎没有损害。用于免疫组化染色较理想。1、脱钙液配制：取乙二胺四乙酸二钠（EDTA）25g，溶解于200ml蒸馏水中，氢氧化钠（NaOH）调整pH至7.0（大约加2.5g NaOH）。EDTA与钙可形成一种可溶性非离子化的复合物。2、脱钙法：将骨片浸入脱钙液中，每周更换一次新液。一般致密骨脱钙需要68周，含有少量骨渣的组织约需一周。（三）电解脱钙法： 此法即在脱钙液中通过电流，电解加速脱钙。1、电解脱钙液配制： 25%盐酸50ml，25%甲酸200ml，蒸馏水750ml；2、脱钙方法：直径30cm电解槽内盛大量电解液，将骨组织放在一个四周多孔的塑料小容

9、器内放入电解液内，此容器通入白金丝或钨丝作阳极，在电解液内再放一白金丝或钨丝作阴极，通入6V直流电，电流强度1A2A，调节两电极的距离来控制。电解液温度不超3045，一般26小时即可脱尽。脱钙后的处理1、脱钙后的组织经流水冲洗412小时，除去残留的脱钙剂；2、修去锯面的薄层组织，切成适当大小的组织块，进行常规脱水、透明、浸蜡及包埋；3、用酸性液脱钙后的组织，苏木素染色时间应适当延长，在伊红中的时间应该缩短；4、脱钙后组织切片在染色中较易脱落，充分烤片，染色前滴加2%5%的火棉胶液，以使之粘贴牢固。三、 洗涤、脱水、透明（一）组织的洗涤1、洗涤的目的：防止组织中留有较多的固定液而影响脱水剂；2、

10、洗涤的方法： （1）固定剂以水配制者：常用的固定剂是甲醛溶液（10%福尔马林溶液），用流水冲洗。大组织冲洗24小时，小组织冲洗24小时。（2）固定剂含酒精者：一般不用冲洗，如需要冲洗必须用与固定剂中的酒精浓度相近或略低的酒精冲洗 。（二）组 织 脱 水1、脱水的目的及原则：用某些溶剂逐渐将组织内吸收的水分置换出来，以利于透明剂和石蜡或火棉胶的渗入。2、脱水剂的种类及特征： 特征：能与水在任何比例下混合；能与透明剂在任何比例下混合；单纯脱水剂：脱水后再经二甲苯透明才浸蜡； 酒精：最常见的脱水剂。脱水能力强，但易使组织收缩、脆。单纯脱水剂：脱水后再经二甲苯透明才浸蜡；丙酮：脱水强，组织收缩严重，价

11、格高。异丙醇：可代替无水酒精使用。价格贵。脱水兼透明剂：脱水后即可直接浸蜡。正丁醇：为脱水剂兼有透明剂作用。用于植物标本的处理效果较好。叔丁醇：脱水兼透明。电镜标本制作时常用作中间脱水剂。（三）组织透明或媒浸 目的是使石蜡能浸入组织块便于包埋。1、二甲苯：最常用的透明剂，有毒、易挥发，透明力强，但组织易收缩变脆，小块组织以30分钟。2、苯和甲苯：组织收缩小、不易变脆。3、氯仿：即三氯甲烷。易发挥，透明力比二甲苯差，时间长，多用于大块组织的透明。4、香柏油：为柏树树脂，收缩小，透明时间长，常用于染色后切片的透明。四、组织浸蜡（透蜡） P48（一）浸蜡的目的和方法：除去组织中的透明剂而代之以石蜡，

12、以便切片。（二）浸蜡剂的种类：1、石蜡：经5658石蜡浸蜡的组织包埋，有利于组织切片的连续性，对蜡块资料保存可靠，一般为3-4小时。2、火棉胶：目前使用火棉胶浸入组织较少，多用于染色前的覆盖液。3、碳蜡；4、明胶。五、组 织 包 埋 P49（一）石蜡包埋法：为最常用的包埋法。1、常规石蜡包埋法:包埋过程、包埋面的选择；2、体液标本一般不做包埋和切片。（二）快速石蜡包埋法：1、操作过程：全程均加热，2030分钟完成。（1）取材、固定：薄片1cm0.5cm0.3cm,在快速固定液（95%酒精、40%甲醛、冰醋酸）内加热煮沸12分钟。（2）脱水：组织厚度不超1.5mm，加入丙酮5 8ml，煮沸56分

13、钟。（3）透明：加二甲苯加热12分钟。（4）包埋：石蜡包埋冰水冷却硬化。3、碳蜡包埋法：即聚乙烯二醇。包埋熔点为38和52左右的分子量为1500和4000两种。适用于脂肪及脂类组织的制片。4、明胶包埋法：5、石蜡半薄切片包埋法：常根据组织类型进行脱水、透明和浸蜡。6、树脂包埋法：适用于不脱钙骨髓活检组织、肝、肾穿刺活检和淋巴结组织等。第二节 切片器具与切片一、切片机：制作组织切片的主要仪器设备。（一）切片机的种类及使用：1、石蜡切片机：能将石蜡包埋的组织切出一定厚薄的切片。分为旋转式、滑动式、摆动式等。最常用的为旋转式。2、冷冻切片机：多为恒冷箱切片机用于组织化学、免疫组化及病理诊断。 3、火

14、棉胶切片机：多用于眼球、内耳、脊髓和脑的切片，切片厚度可达20m50。二、组织切片刀 P58（一）切片刀的种类： 其长度一般有 4cm、8cm、14cm、18cm、20cm、24cm等。1、平凹型：一侧为直线，另一侧为凹度，大凹度刀适用于火棉胶切片，小凹度刀适于石蜡切片。2、双平型：刀身两侧均无凹度，两面是平面。适用于冷冻切片和轮转式切片机的石蜡切片。3、双凹型：刀身两侧均有凹度，适用于轮转式石蜡切片。4、一次性刀片：需配置专用刀架。（二）刀背套与刀柄：刀背套供磨刀时用，刀背套有金属和塑料两种。刀柄有木制及塑料制两种。（三）磨刀与被刀：1、手工磨刀法：磨刀前用软布试净磨刀石面尘垢；装上刀背和刀

15、柄，滴磨刀油于磨刀石上；右手紧握刀柄，左手紧按刀背另一端，刀刃向前，逐渐推动刀片至磨刀的一端，从右到左全部磨完。2、被刀：用被刀皮革被刀，与磨刀的动作相反；三、石蜡切片制作 P60（一）切片前的准备： 修整蜡块，然后置于冷水或冰箱中冷却，以增加硬度； 准备毛笔、眼科弯镊子； 载玻片均匀涂上薄层蛋清甘油，占2/3； 接通摊片机电源，调节摊片（4248） 烤片（60-70左右）的温度；（二）快速石蜡切片 P63 快速石蜡切片时，组织取材应薄，厚度一般不超过2mm，组织固定后要重新修正至1.5mm左右厚度，以利脱水，将组织块埋入预制的蜡块内，冷却硬化后方可切片（取材、脱水、透明浸蜡、包埋见）。 切片

16、捞至载波片上，用酒精灯略加烘烤，再入二甲苯脱蜡，经95%酒精后即刻入水水化，随后即可进行常规快速苏木素伊红染色。（三）冷冻切片制作 P64 组织经过冷冻后，其内的水分结冰，使组织变硬，有利于切成薄片。一、设备要求：（一）冷冻切片机：一般由转轮式切片机或推拉式切片机加上制冷装置而成：1、二氧化碳制冷器；2、半导体制冷器；（二）恒冷箱冷冻却片机：利用压缩机通过制冷剂循环制冷。冰冻切片机二、制作过程（一）取材、固定：选取有代表性的组织制片，厚度12mm。一般病理急诊、组织化学显示酶和免疫病理学进行荧光抗体研究等，多数都用新鲜组织直接冷冻，切片后再进行固定、染色或直接染色或孵化。采用二氧化碳冷冻设备制

17、作须先固定。（二）冷冻切片方法：1、恒温箱冷冻切片法（1）开机预冷：切片前23小时，所需温度如下： 各种新鲜组织冷冻切片参考温度（）脑、淋巴结、肝、肾、脾、睾丸 -12-16肌肉、肾上腺、甲状腺、子宫、卵巢 -18-22乳腺、皮肤、前列腺 -22-28 （2）放入、速冻、修整组织，待恒冷箱内温度降至要求温度后，将组织用OT包埋，再速冻12分钟，装于机样本夹上，修平； （3）调节抗卷板，以与刀刃平行对齐；（4）切片：所需厚度为4m8m，用毛笔展平，贴于洁净玻片上，晾干或吹干后染色；（5）切片后处理：清洁保养。2、半导体冷冻切片法3、二氧化碳冷冻切片法（三）冷冻切片粘片法1、蛋白甘油粘片法： 按石

18、蜡切片的粘片法处理，但温度不宜超过40。烤干后即取出，70%酒精和自来水洗后即可染色。2、Lillie明胶粘片法：切片放入1%明胶水溶液数分钟，捞到载玻片上，5%甲醛水溶液固定5分钟，水洗10分钟，即可染色。3、酒精明胶粘片法：切片浸入0.1%或0.75%明胶溶液（用40%酒精配制）数分钟，用载玻片捞起后，室温干燥，入氯仿1分钟，经95%和75%酒精洗去氯仿，再经蒸馏水洗后即可染色。三、注意事项1、冷冻切片的组织不用固定；2、组织尽可能新鲜，不能用湿的盐水纱布包裹和放入10冰箱内缓慢冷却，否则组织内水分可逐渐析出形成水晶，造成组织结构破坏；3、冷冻包埋剂应适量；4、组织太小，不能做冷冻切片；5

19、、冷冻时间太久的组织不能马上切片，以免损伤切片刀；6、一般来说骨组织和钙化组织不能做冷冻切片。观察第七章组织切片染色技术第一节 病理切片染色概述 P68一、概念：用染液对组织切片进行处理，使组织中的不同成分被染上相应的颜色，产生不同的折射率，以利于显微镜观察和分析。三、染色的原理 染色就是染色剂和组织细胞相结合的过程。（一）染色的化学反应：组织细胞的酸性物质与碱性染料的阳离子相结合，碱性物质与酸性染料的阴离子相结合。具有酸性的细胞核被碱性苏木素液所染色，碱性的胞质与酸性染料伊红所染色。（二）染色的物理作用：1、渗透作用：染料进入组织；2、吸附作用：把另一种物质的分子、原子、离子集中在界面上的过

20、程；3、吸收作用（溶解作用）。三、常用染料概述：（一）染料的性质：有色的无机物或有机化合物1、发色团：能使染料分子产生颜色的基团，叫发色团；2、助色团：能使染料分子颜色加深，并与被染物质分子形成亲和力的基团。（二）染料的分类：1、据染料来源：天然、合成染料和无机化合物2、根据染料化学反应：酸性、碱性和中性染料3、据染色对象：（1）组织染料： 1）结缔组织和肌纤维染料：有胶原纤维、网状纤维、弹力纤维和肌原纤维等染料； 2）神经组织的染料：尼氏体、神经轴突、神经髓鞘、神经胶质细胞等染料；（2）细胞染料：细胞核、细胞质染料等 常用染色剂简介见附录一。五、常用染色术语的概念一、普通染色：最常应用的是苏

21、木素-伊红染色法，简称HE染色。二、特殊染色：特染是为了显示特定的组织结构或其他的特殊成分。三、单一染色：选用一种染料染色。四、复染色：用两种不同性质的染料染色方法。五、多种染色法：用两种以上染料的染色法。第三节 染色前后的处理 P74一、染色前的处理：1、脱蜡至水：必须经过二甲苯脱蜡、各级酒精（100%、95%、85%、75%）至水洗的过程。2、脱汞盐结晶：切片在脱蜡后用0.2%0.5%碘酒精处理515分钟，使汞盐沉淀物溶解。3、脱甲醛色素：在切片脱蜡至水后，用Verocay液（1%氢氧化钾水溶液1ml，80%酒精100ml）处理10分钟，然后流水冲洗5分钟再常规染色。（二）染色后的处理：1

22、、分化作用：必须用1%盐酸酒精脱去所吸附的染料。2、蓝化作用：分化后，用碱性水使细胞核变成蓝色。3、染色后的脱水：低度到高度酒精逐步脱水。4、染色后的透明：透明剂用二甲苯。三、封固：1、封固剂：（1）甘油明胶封固剂 配制方法：明胶10g，蒸馏水60ml，甘油70ml，石炭酸0.25g。（用前将甘油明胶置于温箱内融化后即可封片）。（2）中性树胶（二甲苯树胶液）：属油性封固剂，组织切片需彻底脱水、透明。优良封固剂，可直接封片。七、染色的注意事项（1）具备实验室基本设备和染色准备工作（2）正确完成固定、脱水、透明、脱蜡步骤；（3）染色过程中，既要按书本的方法进行操作，又要根据实际情况进行灵活运用。第

23、八章 组织切片常规染色技术第一节 常规染色的概念一、染色原理（一）苏木素染色原理：苏木红和铝结合形成带正电的 蓝色色精，带负电的细胞核与带正电的蓝色色精以离子键或氢键结合而被染色。苏木素在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。（二）伊红染色原理：伊红Y是一种化学合成的酸性染料。在伊红Y染料液中加入醋酸，使胞质中蛋白质带正电荷，可被带负电的伊红染料染色，从而使细胞质及红细胞等染成红色或粉红色，与蓝色的细胞核形成鲜明的对比。二、染液的配制 P80（一）苏木素液：从苏木素的树中提炼的天然染料。1、Harris苏木素液：最常用。 苏木素 1g 蒸馏水 200ml 硫酸铝钾 20g配置方法见书81页。

24、染色34分钟。保存时间为一年。（二）伊红染液：0.5%伊红酒精染液:醇溶伊红Y0.5g，95%酒精100ml。染色时间13分钟。水溶性伊红酒精液：沉淀酸化伊红Y酒精液： 2、Mayer苏木素改良配法：（1）A液：苏木素2g，无水酒精40ml加热溶解；（2）B液：硫酸铝钾100g，蒸馏水600ml，稍加热使硫酸铝钾在水中溶解，再将A与B液混合2分钟。用蒸馏水补足600ml，加入400mg碘酸钠充分混匀，苏木素染液呈紫红色即可。染色时间为1020分钟。 3、Ehrlich苏木素液：苏木素2g，无水酒精100ml，甘油100ml，硫酸铝钾15g，蒸馏水100ml，冰醋酸10ml。（染色时间为1020

25、分钟）。 4、Gill改良苏木素液：苏木素2g，无水酒精250ml，硫酸铝钾17.6g，蒸馏水750ml，碘酸钠0.2g,冰醋酸20ml。染色时间为5分钟。 （三）0.5%1%盐酸酒精分化液：盐酸 0.5ml1ml, 75%酒精99ml。此液用一段时间后需要延长时间或更换液体，新液体分化时间要短。（四）蓝化液：“蓝化”是指苏木素液染细胞核后，通过盐酸酒精分化，切片由酸性转入弱碱性液体，使之变蓝的过程。 1、50温水2、稀氨水（1%氢氧化铵液）3 蒸馏水 100ml，氨水1ml。三、染色方法 P83（一）人工操作苏木素-伊红染色方法：1、脱蜡至水：（1）二甲苯脱蜡（脱蜡2-5分钟）；（2）二甲苯

26、（2-5分钟）；（3）无水酒精（1-2分钟）；（4）95%酒精1分钟；（5）85%酒精1分钟；（6）75%酒精1分钟；（7）自来水洗2分钟；2、苏木素染色：苏木素液染色5-10分钟；自来水洗1分钟；3、分化返蓝：0.5%1%盐酸酒精分化数秒至30分钟呈紫红色；自来水1分钟；用温水(50)蓝化515分钟(或稀氨水蓝化30秒，自来水洗510分钟)；4、伊红染色：水溶性伊红可直接入伊红液，1分钟；自来水洗1分钟；5、脱水、透明：（1）85%酒精（20秒）；（2）95%酒精（1分钟）；（3）无水酒精（1分钟）；（4）二甲苯（12分钟）；（5）二甲苯（12分钟）。6、封固：（1）用中性树胶封片；（2）附

27、贴标签可书写病理编号。（二）冷冻切片HE染色： 冷冻切片贴片后，用95%酒精和冰醋酸5ml的混合液固定1分钟，自来水洗30秒1分钟，HE染色。（三）快速石蜡切片染色：脱蜡至水、HE染色第三节 染色中常见问题及注意事项 P85 HE染色结果： 细胞核被苏木素染成明显的蓝色； 细胞质被伊红染成红色。第九章 组织切片特殊染色 P87为了显示特定的组织结构或组织细胞特殊成分，采用特定的染料和方法对组织切片进行染色。第一节 结缔组织染色 P88一、 胶原纤维染色Van Gieson染色法（简称VG染色）（书上无）1、染料配制：（1）铁苏木素液：见Masson三色染色（2）Van Gieson苦味酸酸性品

28、液： 甲液：1.22%苦味酸饱和水溶液90ml， 乙液 ： 1%酸性品红水溶液10ml。 两液提前配制，临用前混合使用。2、染色步骤：（1）切片脱蜡至水 （2）蒸馏水洗（3）Weigert铁苏木素液染510分钟（4）自来水洗2分钟（5）据情况可用0.5%盐酸酒精分化（6）自来水洗至变蓝再用蒸馏水洗（7）Van Gieson液染色35分钟（8）去染液，用95%酒精分化脱水（9）无水酒精脱水 （10）二甲苯透明（11）中性树胶封固。3、染色结果：胶原纤维红色,肌纤维黄色,细胞核黑色.4、胶原纤维染色的应用 P88（1）对梭形细胞肿瘤来源、性质提供诊断和鉴别诊断的依据； （2）显示各种组织、器官病变

29、时的修复情况与纤维化程度，如肝穿组织中纤维组织的含量与分布的观察； （3）鉴定心肌坏死后疤痕的形成； （4）鉴别心内膜弹力纤维增生症与心内膜心肌纤维化。三、 网状纤维染色Gomori银染法: P921、染液配制：银氨溶液：甲液：硝酸银10.2g,蒸馏水100ml；乙液:氢氧化纳3.1g,蒸馏水100ml2、染色步骤：（1）切片脱蜡至水（2）高锰酸钾氧化液（高锰酸钾0.5g,蒸馏水95ml,再加3%硫酸5ml)5分钟(3)水洗1分钟(4)2%草酸漂白2分钟,水洗2分钟(5)2%硫酸铁铵媒染2分钟(6)蒸馏水充分洗(7)氨银溶液染色1分钟(8)蒸馏水洗3次(9)20%福尔马林液还原5分钟(10)蒸

30、馏水洗2次(11)入0.2%氯化金液中调色2分钟,蒸馏水洗2次(12)2%硫代硫酸钠固定2分钟,自来水、蒸馏水洗（13）必要时用VG或伊红复染（14）无水酒精脱水（15）二甲苯透明（16）中性树脂封固。3、染色结果：网状纤维呈黑色，胶原纤维呈红色。4、网状纤维染色的应用（1）区分上皮性与非上皮性肿瘤；（2）区分血管内皮瘤与血管外皮瘤；（3）判断原位癌与早期浸润癌；（4）观察肝脏病变处的网状支架塌陷或增生的情况，判断病变性质、程度及发展与转归。四、多色染色： P93（一）Masson三色染色法： P931、染液配制：（1）丽春红酸性品红液：丽春红0.7g，酸性品红0.3g，冰醋酸1ml，蒸馏水9

31、9ml（先配好醋酸溶液后，分别溶解丽春红或酸性品红）；亮绿液：亮绿1.0g，冰醋酸1ml，蒸馏水99ml。（2）苯胺蓝液：苯胺蓝2g，冰醋酸2ml，蒸馏水加至100ml。（3）Weigert铁苏木素液：甲液：苏木素1g，95%酒精或无水酒精100ml；乙液：29%三氯化铁水溶液4ml，纯盐酸1ml，蒸馏水95ml（临用前取甲、乙两液混合即可，24小时内使用有效。）2、Masson三色的染色步骤：（1）切片脱蜡至蒸馏水；（2）Weigert铁苏木素染色510分钟；（3）流水稍洗；（4）盐酸酒精分化；（5）流水冲洗数分钟；（6）丽春红酸性品红液染色5分钟；（7）蒸馏水稍冲洗；（8）1%磷钼酸水溶液

32、处理5分钟，镜下见肌肉纤维呈红色，胶原纤维呈淡红色即可；（9）不经水而直接用苯胺蓝液或亮绿液染5分钟；（10）1%冰醋酸处理1分钟；（11）95%酒精、无水酒精脱水；（12）二甲苯透明；（13）中性树胶封固。3、染色结果：胶原纤维呈蓝色（用苯胺蓝染）或绿色（用亮绿染），肌纤维、细胞质呈红色，细胞核呈蓝褐色。（二）Mallory三色染色法 P941、染液配制：（1）0.5%酸性品红水溶液；（2）苯胺蓝橙黄G液：苯胺蓝0.5g，橙黄G 2g，磷钨酸1g，蒸馏水100ml。（先将1%的磷钨酸溶液配好，一半用于溶解苯胺蓝，另一半用于溶解橙黄G，加热溶解，冷却后分别过滤，可长期保存。临用前将两液混合）。

33、（3）重铬酸钾液；2、染色步骤：（1）切片脱蜡至水；（2）Zenker固定液固定1小时；（3）充分水洗；（4）0.5%碘酒精处理510分钟；（5）0.5%硫代硫酸纳处理25分钟；（6）充分水洗，再用蒸馏水浸洗；（7）酸性品红液染5分钟；（8）水洗、蒸馏水洗；（9）苯胺蓝橙黄-G液染2030分钟；（10）直接95%酒精快速分化；（11）无水酒精脱水；（12）二甲苯透明；（13）中性树胶封固。3、染色结果：胶原纤维、网状纤维呈蓝色，心机纤维橘红色，红细胞呈浅黄色，细胞核呈黑色。结缔组织复合染色的应用（1）区分各种纤维成分；（2）判定各种组织、器官的病变程度和修复情况；（3）鉴别某些梭形细胞软组织肿

34、瘤的来源的判断（4）用于肾小球肾炎的诊断。第二节 肌肉组织染色 P95（一）Mallory磷钨酸苏木素染色法（简称PTAH）：1、染液配制（1）磷钨酸苏木素：苏木素0.1g, 磷钨酸2g, 蒸馏水100ml。 将苏木素加入20ml蒸馏水中,加热溶解，再将磷钨酸溶于80ml蒸馏水中。苏木素冷却后将两液混合放置33月后使用。此液可保存数年。急用时可加高锰酸钾0.15g促成熟,1224小时即可用。（2）酸性高锰酸钾液：5%高锰酸钾水溶液50ml； 0.5 硫酸水溶液50ml。 2、染色步骤：（1）组织以Zenker液固定最佳；如用甲醛固定则先要用Zenker液处理（37温箱内）3小时；（2）切片脱蜡

35、至水，用碘液除汞，用95%酒精脱碘；（3）充分水洗；（4）酸性高锰酸钾液处理510分钟（5）自来水洗2分钟；（6）1%草酸漂白1分钟；（7）自来水洗，蒸馏水洗2次；（8）磷钨酸苏木素液浸染2448小时；（9）直接用95%酒精分化；（10）无水酒精脱水；（11）二甲苯透明；（12）中性树胶封固。3、染色结果：横纹肌纤维、细胞核呈紫蓝色，胶原纤维、网状纤维呈玫瑰红色。4、肌肉组织染色 常用于Mallory磷钨酸-苏木素染色法能显示与区分：(1)横纹肌纤维的正常与异常形态；(2)诊断心肌损伤早期病变及全身弥漫性血管内凝血有一定参考价值；(3)用于横纹肌肉瘤时显示横纹，(4)用于显示神经胶质。第三节

36、脂肪染色 P96 苏丹染色法： (书上无)1、染料配制：（1）苏丹染液：苏丹 0.15g,60%70%酒精100ml。（将苏丹染料溶于60%70%酒精形成饱和液，作长期备用液。临时配制时需要过滤才可使用。备用液仅用上清液。密封容器存放备用液）。 （2）甘油明胶液：明胶 5g，甘油35ml， 蒸馏水 35ml。（先将明胶溶于蒸馏水中加热溶解，再加甘油充分混合，加12粒石炭酸。冷却后4保存，用时水浴加热）。2、苏丹染色步骤：（1）冷冻切片厚8m10m；（2）蒸馏水稍洗；（3）Harris苏木素12分钟；（4）自来水洗，盐酸酒精分化、反蓝；（5）水洗、蒸馏水洗；（6）70%酒精浸洗；（7）苏丹染液3

37、060分钟（如置于56温箱中可缩短时间）；（8）70%酒精分化数秒；（9）蒸馏水洗；（10）在空气中稍晾干；（11）甘油明胶液封固。3、注意事项：采用冰冻切片染色。苏丹染液温浸时应加盖，防止染液中的酒精或丙酮挥发。在封固前，甘油明胶液应放置56温箱中加温，避免摇荡，防止封固时出现气泡。切片染色后不能长期保存，应尽快观察或照相。4、染色结果：脂肪呈橘红色，脂肪酸不作色，细胞核呈淡蓝色。5、脂肪染色的应用 （1）鉴别细胞内空泡的性质（水样变性、脂肪变性或糖原）； （2）显示动脉粥样斑块病灶内的脂质沉积、脂肪栓塞。 （3）神经系统一些变性、脱髓鞘疾病的诊断有极为重要的作用。 （4）脂肪染色主要用于卵

38、巢纤维瘤与卵泡膜细胞瘤、肾母细胞瘤、皮脂腺癌的诊断和鉴别诊断。第四节 糖原染色与粘液染色一、过碘酸雪夫染色法（PAS法）：P981、染色配制：（1）过碘酸氧化液：过碘酸0.5g，蒸馏水100g。（此溶液应放4冰箱保存）。（2）Schiff液：碱性品红 1g，1mol/L盐酸 20ml，偏重亚硫酸钠（钾）1g，双蒸馏水200ml。（先将双蒸馏水200ml煮沸，加入1g碱性品红，再煮沸2分钟。冷却至50加1mol/L的盐酸20ml，待温度降低至25时，加入偏重亚硫酸钠（钾）1g1.5g,温室2小时后碱稍带红色，5小时后为无色液体，如有颜色应加入活性炭1g1.5g,用双层滤纸过滤,盛于棕色磨口瓶内,

39、放入4冰箱保存。2、染色步骤：（1）切片脱蜡至水；（2）蒸馏水洗；（3）0.5%过碘酸氧化液1020分钟；(4)充分蒸馏水洗；（5）进入Schiff液染色10分钟（如室温低于15可稍加温）；（6）自来水洗10分钟；（7）用Mayer或 Harris明矾苏木素染细胞核35分钟；（8）盐酸酒精分化；（9）水洗；（10）无水酒精脱水；（11）二甲苯透明；（12）中性树胶封固。3、染色结果：糖原及其它PAS反应阳性物质染成红色，细胞核染成蓝色。4、糖原染色的应用 （1）用于显示糖原，对明确细胞空泡的性质、糖原贮积病和糖尿病的诊断及某些透明细胞肿瘤的鉴别诊断方面具有重要作用。 （2）用于中性黏液物质，对

40、低分化腺癌的诊断也有一定价值。 （3）清楚地显示基底膜（肾炎的诊断）、网状纤维、真菌菌丝、寄生虫及腺泡状软组织肉瘤中胞质内结晶体。 （4）观察缺血缺氧早期心肌坏死或梗死区的糖原减少情况。 粘液染色二、奥辛蓝染色法（简称AB染色）：P991、染液配制：（1）AB液：（pH 2.5) 奥辛蓝8GS 1g，蒸馏水97ml，冰醋酸3ml，麝香草酚2粒（防腐）。（先配好3%冰醋酸，然后溶解奥辛蓝。过滤后使用。pH值2.53.0之间.(2)0.5%中性红水溶液: 中性红 0.5g,蒸馏水加至 100ml。2、奥辛蓝染色步骤： (1）石蜡切片脱蜡至水；(2)AB液染色2030分钟；（3）快速蒸馏水洗；（4）

41、0.5%中性红染12分钟；（5）快速只能流水洗；（6）95%酒精、无水酒精脱水；（7）二甲苯透明；（8）中性树胶封固。3、染色结果：酸性粘液物质（及真菌菌丝、隐球菌的夹膜）呈蓝色，中性粘液呈红色，混合粘液呈紫红色，细胞核呈红色。4、粘液染色的应用（1）黏液性肿瘤的诊断和鉴别诊断，如黏液瘤、黏液肉瘤、脂肪瘤、胃肠道低分化腺癌、软骨黏液样纤维瘤；（2）用于结缔组织疾病及慢性胃炎肠上皮化生等的诊断。 第五节 病原微生物染色 P100石炭酸品红抗酸杆菌染色法：P1011、染色配制： 石炭酸品红液：碱性品红 1g， 无水酒精 10ml， 石炭酸（5%）水溶液100ml。 （首先将碱性品红溶于无水酒精，然

42、后与石炭酸水溶液混合，临使用前过滤）。2、抗酸杆菌染色步骤：（1）石蜡切片脱蜡至水；（2）将石炭酸品红液滴切片上，文火热至蒸气出现，离火染1520分钟；（3）蒸馏水洗；（4）1%盐酸酒精液分化，至无红色染料流下止；（5）蒸馏水洗；（6）1%美蓝液复染2分钟；（7）95%酒精分化，美蓝脱色，以示清楚；（8）无水酒精脱水；（9）二甲苯透明；（10）中性树胶封固。3、染色结果：抗酸杆菌(如结核杆菌、麻风杆菌等）呈红色，细胞核呈淡蓝色。4、病原微生物染色的应用用于结核病的干酪样坏死灶及麻风病中泡沫状细胞（瘤型麻风）内的抗酸杆菌，其形态特点是：结核分支杆菌弯曲细长，长短粗细不一；而麻风杆菌短粗成堆，数量

43、较多（称为麻风团）。淀粉样物质的染色（书上无）Bennhola刚果红染色法：1、染色配制：（1）1%刚果红水溶液： 刚果红 1g， 蒸馏水100ml。（2）碳酸锂饱和水溶液：碳酸锂 1.25g， 蒸馏水100ml。2、染色结果： 淀粉样物质呈红色，其它组织呈浅红色，细胞核呈蓝色。3、Bennhola刚果红染色步骤：（1）石蜡切片脱蜡至水；（2）明矾苏木素染液淡染细胞核35分钟；（3）1%盐酸酒精液稍分化。水洗12分钟；（4）充分水洗返蓝；（5）蒸馏水稍洗；（6）1%刚果红溶液染色1030分钟或更长；（7）经碳酸锂饱和溶液处理12分钟；（8）80%酒精液急速分化至无红色染液流下为止；（9）水洗1

44、2分钟；（10）95%酒精脱水及无水酒精脱水；（11）二甲苯透明；（12）中性树胶封固。4、淀粉样物质的染色的应用（1）淀粉样物质染色能显示变性程度:如全身淀粉样变性；（2）用于全身消耗性疾病的观察:如结核病、甲状腺髓样癌等；（3）用于肿瘤的诊断和鉴别诊断:如内分泌肿瘤的间质常出现淀粉样物质沉着，又如甲状腺髓样癌、胰岛细胞瘤、肺小细胞癌等，淀粉样物质染色阳性可作为诊断重要依据；（4）为某些疾病的诊断与鉴别诊断提供依据:钙化上皮瘤、声带息肉等常出现淀粉样变性，可为诊断依据。黑色素染色Masson-Fontana染色法：1、染液配制：（1）Masson-Fontana染：10%硝酸银 15ml， 蒸馏水 15ml。（将浓氨水逐滴加入10%硝酸银液中直至微乳白色，并加入蒸馏水15ml，过滤后静置12小时后使用。4冰箱保存