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1、-生物选修一植物组织培养花药离体培养-第 3 页课题1 菊花的组织培养 1.细胞分化：细胞在形态,结构,功能上出现稳定性差异的过程（基因选择性表达的结果）. 2.细胞的全能性：已经分化的细胞仍然具有发育成完整植株的潜能. 3.外植体：用于离体培养的植物器官或组织片段. 4.脱分化：又叫去分化,由高度分化的组织或细胞产生愈伤组织的过程. 5.愈伤组织的细胞特点：细胞排列疏松无规则,是一种高度液泡化呈无定形状态的薄壁细胞. 6.再分化：愈伤组织重新分化成根或芽的过程.总结：植物组织培养过程： 脱分化 再分化外植体-愈伤组织-试管苗-移栽-完整的植物体二影响因素 1.植物材料的选择：菊花的组织培养一
2、般选择未开花植株的茎上部新萌生的侧枝. 2.培养基的选择：MS培养基（含大量元素,微量元素,有机物和植物激素） 注：微生物培养基以有机营养为主,MS培养基则需要提供大量无机营养. 3.植物激素的浓度,实用的先后顺序,用量比例,都会影响实验结果.使用的先后顺序先使用生长素,后细胞分裂素细胞分裂但不分化先试用细胞分裂素,后使用生长素分裂也分化同时使用分化频率提高用量比例生长素细胞分裂素有利于根的分化,抑制芽的形成生长素细胞分裂素有利于芽的分化,抑制根的形成生长素细胞分裂素促进愈伤组织的形成 4.其他影响因素：pH,温度和光照.三. 实验步骤（重点是无菌技术）（1）制备Ms固体培养基（2）灭菌（将培
3、养基与其它器械进行高压蒸汽灭菌）（3） 外植体消毒（嫩枝流水冲洗无菌吸水纸吸干70%酒精中摇晃23次无菌 水冲洗无菌吸水纸吸干0.1%的氯化汞溶液12min无菌水洗 三次）（4）接种（a.70%的酒精擦工作台;b.操作在酒精灯附近进行;c.火焰灼烧灭菌）（5） 培养（温度：1822;pH：5.8左右;光照：每日用日光灯照射12h）（6） 移栽栽培 注：容易进行无性繁殖的植物也容易进行组织培养.课题2 月季的花药培养一. 花粉发育过程 减数分裂 有丝分裂花粉母细胞-四个小孢子-1个小孢子-1个小孢子-（小孢子母细胞） （小孢子四分体时期） （单核居中期） （单核靠边期） 花粉管细胞核营养细胞一个
4、小孢子（双核期） 有丝分裂 生殖细胞核生殖细胞-两个精子二. 影响因素 1.主要因素：材料的选择和培养基的组成 2.其他因素：亲本植株的生长条件,材料的低温预处理,接种密度 3.材料的选择：初花期完全未开花的花蕾（花期）;单核期（时期） 单核期以前质地幼嫩极易破碎.单核期以后花瓣松动不利于消毒.三 操作流程：材料的选取（镜检：醋酸洋红法：将花粉细胞核染成红色；焙花青-铬钒法：适用 于不易染色的,染成蓝黑色） 70%的酒精 无菌水 无菌吸水纸 0.1%的氯化汞溶液 无菌水材料的消毒（花蕾-取出-花蕾-花蕾-取出-完成）接 种（除去萼片和花瓣；防止损伤花药,否则会从受伤部位长出愈伤组织；除 去花丝,因为与花丝相连不利于愈伤组织或胚状体的形成）培 养（每瓶接种花药710个，温度25左右；刚开始不需要光照，幼小植株形 成才需要光照.）花 药 开 裂(2030天后；若长出愈伤组织应该及时转移到分化培养基上；若释放出胚状体 应该尽快将幼小植株分开分别移植到新的培养基)四 通过花粉培养产生花粉植株（单倍体植株）的两种途径： 脱分化 分化1. 花药中的花粉-胚状体-丛芽 诱导 脱分化 再分化 -生根-移栽2. 花药中的花粉-愈伤组织-丛芽 取决于激素种类和浓度配比（主要是生长素和细胞分裂素）.