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1、临床常用免疫学检查,中国医科大学 教育部,免疫学诊断：用免疫学方法确定疾病相关因子、监测疾病过程、判断疗效及预后，涉及对疾病相关因子的诊断和辅助诊断，以及检测机体免疫功能状态。 临床常用免疫学检查：血清免疫球蛋白检测，血清补体检测，细胞免疫检测，肝炎病毒标志物检测，感染免疫检测，肿瘤标志物检测，自身抗体检测及其它免疫检测。,一.体液免疫功能 检测 检测血清免疫球蛋白及其类别（尤其是IgG、IgA和IgM ）和水平，可为诊断免疫缺陷性疾病和免疫增殖性疾病提供重要参数。 检测针对疫苗或感染因子的特异性抗体及其水平，可较直接反映机体特异性体液免疫功能状态。,1免疫球蛋白（immunoglobulin
2、,Ig) 具有抗体活性和抗体样结构的球蛋白，由浆细胞产生，存在于血液、体液、外分泌液及部分细胞的表面。分五类：IGG、IGM、IGA、IGD、IGE。 1.IgG、IgM、IgA的检测： IgG是血清中的主要抗体成分，占总Ig的75%是唯一能通过胎盘的Ig，通过自然被动免疫获得。 IgM是Ig中分子量最大者，亦是最早出现的抗体为五聚体，在机体早期的免疫防御中起重要作用。 IgA分血清型与分泌型，尤以分泌型IgA在局部抗感染、抗过敏起重要免疫屏障。,检测方法：免疫扩散法及免疫比浊法 参考值：各个年龄阶段有差别 临床意义：(1).Ig均增高常见于慢性肝病、淋巴瘤、SLE、RA、MM等 (2).单一
3、Ig增高：见于免疫增殖性疾病如MM（IGG），巨球蛋白血症（IGM） (3). Ig降低：反复呼吸道感染者常见IGA单一降低 2.IgG亚类测定 分四类：IgG1 IgG2 IgG3 IgG4 与免疫缺陷病和变态反应性疾病有关 3.IgE测定 血清含量低但与I型变态反应疾病有关,测定方法：ELISA法 参考值：0.10.9mg/L 意义： IgE增高：见于IgE型多发性骨髓瘤、重链病、肝脏病、结节病、RA和各种过敏性疾病。 IgE降低：见于丙种球蛋白缺乏症、恶性肿瘤、长期用免疫抑制剂者和共济失调性毛细血管扩张症等。,二.血清M蛋白(monoclonal immunoglobulins)测定 测
4、定方法：蛋白电泳法、免疫比浊法和免疫电泳法 参考值：阴性 意义：检测到 M蛋白，提示单克隆免疫球蛋白增殖性疾病。见于多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、重链病、轻链病和半分子病等,三.血清补体检测 基本概念 补体(complement)：是一组具有酶原活性的糖蛋白，由传统途径的 9种成分C 1 - C 9 、旁路途径的3种成分及其衍生物组成，参与灭活病原体的免疫反应，也参与破坏自身组织和自身细胞而造成的免疫损伤。 1.补体 CH 50 方法：试管法 参考值：50000-100000u/l 意义：反映补体传统途径活化的活性程度。 1、CH 50 增高见于急性炎症、组织损伤和某些恶性肿瘤；2、CH 50
5、降低见于肾小球肾炎、自身免疫病、感染性心内膜炎、病毒性肝炎和慢性肝病。,2.补体 C 3 方法：单向免疫扩散法 (1.140.27 g/L) 免疫比浊法(0.85-1.70 g/L) 意义：1、增高见于急性炎症、传染病早期、肿瘤和排异反应；2、减低见于70%以上的急性肾小球肾炎、85%以上的链球菌感染后肾炎、78%狼疮性肾炎患者。还见于活动性SLE和类风湿性关节炎。,2.补体 C 4 方法：单向免疫扩散法 (0.553-0.109 g/L ) 意义：1、升高见于急性风湿热、结节性动脉周围炎、皮肌炎、关节炎、和组织损伤等；2、降低见于自身免疫性肝炎、狼疮性肾炎、SLE、1型糖尿病、胰腺癌、多发性
6、硬化症、类风湿性关节炎、IgA肾病和遗传性IgA缺乏症。 3.补体 C 1q 方法：单向免疫扩散法 (0.197-0.04 g/L ) 意义：1、增加见于骨髓炎、类风湿性关节炎、痛风、过敏性紫癜等；2、降低见于SLE和混合性结缔组织病等。,4.BF 方法：单向免疫扩散法 (0.1-0.4g/L) 意义：增高见于某些自身免疫病、肾病综合征、慢性肾炎、恶性肿瘤； 2、减低见于肝病、急性肾小球肾炎、自身免疫性溶血性贫血。 第二节 细胞免疫检测 主要包括有T细胞、B细胞、K细胞、NK细胞及其亚群；临床常对淋巴细胞的数量，表面标志物及功能进行检测，以了解机体的细胞免疫功能., T细胞免疫检测 1. T细
7、胞表面标志物检测(1).E-玫瑰花形成试验：用于检测T细胞的数量。其临床意义： 降低；见于免疫缺陷性疾病，如恶性肿瘤、免疫性疾病、大面积烧伤、多发性神经炎等。 升高：见于甲亢、甲状腺炎、重症肌无力、慢性活动性肝炎、SLE活动期和器官移植排斥反应等。 （2）T细胞分化抗原测定 CD3 :参考值（ IFA法）61%-85% 意义： 降低见于自身免疫性疾病，如 SLE、RA等 CD4:参考值（ IFA法）28%-58% 意义：降低见于恶性肿瘤、遗传性免疫缺陷病、爱滋病、应用免疫抑制剂者, CD8+:参考值（ IFA法）19%-48% 意义：减低见于自身免疫性疾病或变态反应性疾病 CD4+ /CD8+
8、：参考值（ IFA法）1.660.33 意义： 比值增高见于恶性肿瘤、自身免疫性疾病、病毒感染、变态反应等； 比值降低见于爱滋病； 监测器官移植排斥反应时比值增高提示可能发生排斥反应。 注：当 CD 1-8 都增高可能为T细胞型急性淋巴细胞白血病, B细胞免疫检测 1. B细胞表面标志物检测： B细胞表面有表面抗原(CD19、CD20、CD21、CD22、CD40等)与表面受体(BCR、CKR、CR、FC等) BCR又称B细胞表面免疫球蛋白（SmIg），是B细胞的特征性表面标志，其类别随B细胞发育阶段不同而变化。 (1).B细胞表面免疫球蛋白（SmIg）测定：主要用于检测外周血B细胞的百分率。
9、临床意义： SmIg减低见于免疫缺陷性疾病； SmIg升高见于慢性淋巴细胞性白血病、多毛细胞白血病和原发性巨球蛋白血症。原发性巨球蛋白血症患者SmIgM阳性细胞可占78%。,(2).B细胞分化抗原测定：临床意义： 升高见于急性淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病和Burkitt淋巴瘤等； 降低见于无丙种球蛋白血症、使用化疗或免疫抑制剂后。 淋巴细胞功能检测 (1).T细胞转化试验：反映T细胞的免疫功能。临床意义同T细胞花结形成试验。但Down综合征时明显增高。 (2).混合淋巴细胞反应：反映机体整体的细胞免疫功能，还可用于HLA的细胞学分型, 自然杀伤细胞免疫检测 自然杀伤细胞活性测定：可作
10、为判断机体抗肿瘤和抗病毒感染的指标之一。在血液系统肿瘤、实体瘤、免疫缺陷病，爱滋病和某些病毒感染者活性降低；宿主抗移植物反应者活性升高。 中性粒细胞吞噬、杀菌功能检测 反映机体抗感染免疫的能力,第四节 感染免疫检测 病原体及其代谢产物进入人体后刺激机体免疫系统，产生相应的免疫产物，免疫产物进入血液。临床多利用凝集试验、补体结合试验、沉淀试验、免疫荧光发（ IFA）、酶联免疫吸附试验（ELISA）、放射免疫法（RIA）等手段检测血清中的免疫产物或病原体的抗原成分，帮助某些感染性疾病的诊断或早期诊断。近年来随着分子生物学的发展，可以利用聚合酶链反应（PCR）或DNA探针分子杂交技术对病原体的核酸进
11、行检测，帮助确定病原学诊断。 一.细菌感染免疫检测,1.抗链球菌溶血素 “ O”测定 病人感染A群溶血性链球菌一周后ASO开始升高，4-6周达高峰，可持续几个月或几年，见于活动性风湿热、风湿性关节炎、急性肾小球肾炎、急性上呼吸道感染、皮肤软组织感染。 抗体滴度逐步下降提示疾病缓解。 2.肥达氏(Widal)反应 ：协助伤寒与副伤寒的诊断。 参考值： O凝集价1：80 伤寒H凝集价1：160 副伤寒A、B、C凝集价1：80 意义：O升高，H正常 O正常，H升高 O升高，H升高 O升高，A、B、C均升高,3.结核杆菌抗体： 辅助结核病的诊断。 4.结核杆菌 DNA检测 ： 可以确定结核病的诊断，但
12、应防止假阳性。 5.C反应蛋白测定 急性时相反应蛋白，具有激活补体，促进吞噬和免疫调理作用 临床意义：1).组织损伤 2).各种细菌性感染 3).风湿热 4).恶性肿瘤，器官移植后排斥反应，妊娠等,二.病毒感染免疫检测 1.汉坦病毒抗体 IgM ：协助肾综合征出血热早期诊断。 2.乙脑病毒抗体 IgM ：协助乙脑的早期诊断。 3.轮状病毒抗体 IgM、IgG；轮状病毒 RNA :阳性提示现症感染。 4.柯萨奇病毒抗体 IgM、IgG IgM阳性示现症感染。当IgM抗体阴性IgG阳性提示既往感染 5.EB病毒抗原、抗体测定：抗-VCA IgM阳性常见于传染性单核细胞增多症；抗-VCA IgA阳性
13、主要见于鼻咽癌,三.TORCH感染免疫检测 1.弓形虫抗体 IgM和IgG IgM 阳性提示现症感染，IgG阳性提示既往感染。 2.巨细胞病毒抗体 IgM、IgG ： IgM阳性示现症感染或病毒活动期。IgG既往或潜伏感染。巨细胞病毒 DNA :阳性提示现症感染。 3.风疹病毒抗体测定 4.HSV抗体测定 四.寄生虫感染免疫检测 1.血吸虫感染：1).环卵沉淀实验 2).血吸虫抗体 IgM和IgE：阳性提示现症感染，早期诊断指标。 IgG阳性提示既往感染。 2.囊虫抗体测定：囊虫特异性IgG阳性提示囊虫病, 在血清学试验中，若能以某种病原体的特异性抗原检测到针对某种病原体的特异性 IgM抗体，
14、或以特异性抗体特别是单克隆抗体检测到病原体的抗原成分，或以多聚酶链反应（PCR）或DNA探针分子杂交技术检测到病原体的核酸，则具有早期诊断意义，甚至确诊意义。但要注意假阳性或假阴性的问题，特别是在分析PCR结果时更应注意，因为PCR具有高度特异性和高度敏感性，稍有不慎即被污染造成假阳性。 第五节.肿瘤标志物检查 肿瘤标志物(TM )：指在肿瘤发生和增殖过程中，由肿瘤细胞本身合成、释放或者由机体对肿瘤细胞反应而产生的一类物质，主要用于肿瘤普查、辅助诊断、观察疗效和判断预后。,常用肿瘤标志物检测及临床意义：分三类 1蛋白质类肿瘤标志物：包括甲胎蛋白（AFP）、癌胚抗原（CEA）、癌抗原125（CA
15、125）、癌抗原15-3（CA15-3）、组织多肽抗原（TPA）、前列腺特异抗原（PSA）鳞状上皮细胞癌抗原（SCC）等。甲胎蛋白主要用于原发性肝癌的辅助诊断，此外生殖腺胚胎癌、胃癌和胰腺癌血中AFP也可增高。CEA明显增高见于胰腺癌、结肠癌、肺癌和乳腺癌。妇科肿瘤特别是卵巢癌CA125水平明显升高。CA15-3主要用于乳腺癌的辅助诊断和疗效观察。PSA可用于前列腺癌的辅助诊断、疗效观察以及转移和复发判断。SCC在上皮细胞源性恶性肿瘤中升高。,2糖脂类肿瘤标志物：包括癌抗原-50（CA-50）、癌抗原72-4（CA72-4）、癌抗原242（CA242）、糖链抗原19-9（CA19-9）等。CA
16、-50增高见于大部分恶性肿瘤，动态观察其水平变化对癌肿疗效、预后判断、复发检测颇有价值。CA72-4是卵巢肿瘤和胃肠道肿瘤的标志物。CA242是胰腺癌和结肠癌的标志物。CA19-9在胰腺癌、胆道肿瘤和胃肠道癌中水平明显升高。 3酶类肿瘤标志物：包括前列腺酸性磷酸酶（PAP）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）、异常凝血酶原（APT）、-L-岩藻糖苷酶（AFU）等。PAP对前列腺癌的疗效观察、有无复发、转移及预后判断有重要意义。NSE是神经母细胞瘤和小细胞肺癌的标志物。APT和AFU在肝细胞肝癌中水平明显升高。,第六节 自身免疫检测 抗核抗体： ANA阳性：血清滴度1：40为阳性。最多见于未治疗的S
17、LE，活动期SLE几乎100%阳性。也可见于其他自身免疫性疾病。抗核抗体共有4种荧光核型：均质型，见于SLE、SS、PSS、MCTD；边缘型，见于SLE、SS；颗粒型，见于SLE、RA；核仁型，见于PSS、Crest征。 抗脱氧核糖核酸测定：分为抗双链 DNA抗体（ds-DNA）、抗单链DNA抗体（ss-DNA）、抗Z-DNA抗体。抗双链DNA抗体的检测有重要的临床意义，它见于活动期的SLE，阳性率70%-90%。,组织和细胞抗体的检测： 抗线粒体抗体（AMA）：正常人群阳性率低于10%。许多肝脏疾病可检出AMA，原发性胆汁性肝硬化无症状患者为90.5%，有症状患者为92.5%；慢性活动性肝炎
18、可达90%以上；但胆总管和肝外胆管阻塞为阴性。 抗甲状腺球蛋白抗体（抗-TG）：阳性见于90%-95%的桥本甲状腺炎，52%-58%的甲亢和35%的甲癌。此外，40岁以上的健康妇女检出率为18%。,抗甲状腺微粒体抗体（抗-TM）：抗-TM阳性检出率：桥本甲状腺炎为50%-100%，甲减为88.9%，甲状腺肿瘤为13.1%，单纯性甲状腺肿为8.6%，亚甲炎为17.2%-25%。 抗乙酰胆碱受体抗体：对诊断重症肌无力有意义，敏感性和特异性高，大约 90%患者阳性，其他眼肌障碍者全部阴性。可作为重症肌无力疗效的观察指标。 抗平滑肌抗体：狼疮性肝炎患者阳性率高达 80%，急性肝炎患者的阳性率70%，但
19、在发病一周时出现，3个月后消逝失。,其它自身免疫抗体检测 类风湿因子（RF）：正常为阴性。类风湿性关节炎（RA）的阳性率为70%，RF为RA病情活动程度的判断指标之一。其他自身免疫性疾病，如多肌炎、SLE、硬皮病、干燥综合征等可见阳性。，某些感染性疾病如传单、结核、感染性心内膜炎等多呈阳性。 ACA检测：阳性见于SLE，PLT减少症，习惯性流产等 ANCA检测：用于诊断血管炎 狼疮细胞(LE)检测,第八节 细胞因子的检测 白细胞介素 2（IL-2）活性和白细胞介素2受体（IL-2R）测定： IL-2随着年龄的增长有降低趋势。增高见于自身免疫性疾病、再生障碍性贫血、多发性骨髓瘤和排斥反应等。降低见于免疫缺陷性疾病、恶性肿瘤、1型糖尿病、某些病毒感染等。 IL-2R对急性排斥反应和免疫性疾病有诊断意义，可作为病情观察和药效监测的一项指标。 肿瘤坏死因子（ TNF）的测定：血中TNF水平增高特别对某些感染性疾病的病情观察有价值。, 干扰素的（ IFN）测定： 增高见于SLE、非活动性类风湿性关节炎、恶性肿瘤早期、急性 病毒感染、再生障碍性贫血的等； 减低见于乙肝及携带者、哮喘、活动性类风湿性关节炎。 IL-6，IL-8，IL-10测定,谢谢大家!,