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1、-卫生化学实验总结-预防医学-第 7 页ICP发射光谱测头发样品中的元素【试剂和仪器】中性洗发液、丙酮、无水乙醇、混合酸、去离子水，钙铁锌标准品。100ml烧杯2只，10ml比色管1个，玻璃棒，剪刀，电子天平，烘箱，滤纸。日本岛津公司ICPS-7000型电感耦合等离子体原子发射光谱仪，高纯氩气，通风装置，循环水系统，容量瓶，移液管。【实验步骤】1、消化处理 采样：后枕部头发距头皮13cm（为了反映近期金属元素蓄积的情况）样品量约为0.05g。洗涤：中性洗发液洗涤蒸馏水洗净（约3-5遍）去离子水洗至无泡沫淋干后放在丙酮中浸泡2min（去除有机污染物） 无水乙醇中浸泡1min 滤干110干燥箱中干
2、燥0.5h 消化：精称取样品0.025g左右混合酸5ml（10min）电炉上徐徐加热（120左右）溶液由棕褐色变至淡黄色，加大火，200左右赶酸（小于1ml为宜）。若为较深的黄色，则继续加数滴混合酸（完全冷却后）电炉上加热直至残渣为白色时消化完成。注：混合酸是为了增加氧化性（硝酸：高氯酸=4:1，适用于含钙较高的材料）；所有试剂为优级纯 稀释：1%HNO3溶解后去离子水少量多次（至少3次）将样品转移至10ml容量瓶中定容，摇匀。贴签备用（注：吸取硝酸和搅拌的吸管用两根，避免损失及污染）2、仪器基本操作方法（1）打开主机电源，预热3h以上。（2）打开循环水装置，接通氩气，打开通风罩。（3）打开电
3、脑，进入ICPS操作系统，首先观察仪器状态是否正常，点燃距焰，（此时毛细管不能空吸）吸入空白溶液，进行波长校正（通常使用O/C/Ar）。S50,应重复校正一次。（4）然后建立新文件（make new card命名定性or定量设一些参数,如测量次数，为3次，最后取平均值选要测的元素选波长设置测量条件，采用人工方法进样，将样品提升时间设为0设置标准系列样品浓度），根据测量需要设定条件。（5）测定标准系列和样品。（6）测定结束后，应先关闭氩气阀门，待距焰熄灭后，再关闭电源。3、 标准曲线的绘制（1） 首先用浓度最高的混合标准溶液测定ATT值（告诉仪器最高浓度是多少，测完之后用纯水洗一下），然后依次测
4、定不同浓度混合标准溶液中各元素的发射强度，测量结束后，仪器自动绘出标准曲线。4、 发样的测定 用与标准系列同样方法测定光强度，然后从标准曲线上查出发样中各元素含量。若某种元素浓度超过最高浓度限值，要进行稀释。【结果及公式】以c为横坐标，原子发射谱线强度（）为纵坐标，根据样品中各元素的从标曲中得到其浓度cx【注意事项】器皿等玻璃器材不要随意放置，以免污染。进样：样品毛细管雾化器雾化雾化室进一步雾化炬管光学系统紫外分光光度法测定蛋白质的含量【实验原理】 蛋白质分子结构中的酪氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键，具有吸收紫外光的性质，其最大吸收波长为280nm左右。在一定实验条件下，蛋白质溶液的吸光度
5、与其浓度符合LambertBeer定律，据此可对蛋白质进行定量分析。结构：光源单色器吸收池检测器显示系统注：此次试验用紫外光，所以选用石英比色杯。Q或者S表示石英的意思，放置时字母要朝同一个方向。比色杯为成对的，不能混用。【实验步骤】1.吸收光谱曲线的绘制：以生理盐水作参比，以波长为横坐标，吸光度为纵坐标，从200400nm扫描任一牛血清白蛋白标准液的吸收曲线并找出最大吸收波长（max）。2.标准曲线的绘制： 移取5.00mg/ml牛血清白蛋白标准应用液0.00、0.50、1.00、1.50和2.00ml，分别置于10ml比色管中，用生理盐水稀释至刻度，摇匀。以生理盐水作参比，在max波长下测
6、定吸光度，以溶液浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。 3.未知蛋白质溶液的测定：准确移取血清样本0.1ml，置于10ml比色管中，定容至刻度。以生理盐水作参比，在max波长下测定吸光度。【实验结果】Cx=C稀释倍数其中Cx为待测蛋白质溶液的质量浓度；C为由标准曲线确定的被测溶液蛋白质的质量浓度【注意事项】1.由于蛋白质的紫外吸收峰常因溶液pH的改变而改变，测定时未知溶液与标准溶液的pH要一致。2.紫外分光光度法测定蛋白质的准确度较差，其主要原因为不同蛋白质中酪氨酸和色氨酸的含量不同，使得不同蛋白质溶液在280nm的吸光系数也不同。样品中若含有核酸，可分别测定在280nm和260nm的吸
7、光度值，用经验校正公式计算蛋白质的浓度。蛋白质浓度=1.45A280 0.74A260 (mg/mL)【仪器电脑操作】仪器连接自检光谱扫描（设置200400nm高速扫描）方法设置（选择max，多点，固定波长，改单位）进行测定（输入号码和浓度，记录吸光度值）荧光分析法测定尿中核黄素（VB2）含量【实验原理】 核黄素（VB2）在一定波长的光波照射下发荧光。在PH67的溶液中荧光最强，在其他条件恒定时，荧光强度F与VB2浓度C成正比，即F=KC；当PH11时荧光消失。尿中共存物质干扰VB2的测定，需要将尿液通过硅镁吸附柱，使其中VB2被硅镁吸附柱吸附，再用洗脱液洗脱，测定洗脱液中VB2的荧光强度。采
8、用标准曲线法进行测量。光源（氙弧灯200800nm；高压汞灯卤钨灯一般用于荧光计）分光系统（两个单色器，第一单色器在光栅和样品池之间用于选择发射波长；第二单色器位于样品池和检测器之间与激发光源成90以消除透过光影响，选择荧光波长）样品池检测器显示系统注：比色皿四面光滑【实验步骤】1、 装柱 脱脂棉塞住吸附柱下端硅镁吸附剂与蒸馏水混合装柱（约占柱长的2/3左右）用双蒸水测试流速，控制流速在6080滴/分，柱内应无气泡。2、 标准曲线的的绘制 标准液配制（0.5mg/L）：取25mg/L的标储液1ml于50ml棕色容量瓶，定容混匀。（1） 吸附：取VB2标准应用液0.00,0.50,1.00,1.
9、50,2.00,2.50ml，分别过柱，用1520ml热水（6070）淋洗柱子（去除共存杂质）。（2） 洗脱：将10ml比色管接在柱子下方，每个吸附柱中加入5ml洗脱液（洗脱VB2），待流尽后再用不足5ml的蒸馏水淋洗柱子，流出液一并盛入比色管中，双蒸水定容至10ml。混匀，避光保存。（3） 测定：取任意标准管溶液，固定荧光波长535nm，在350500nm的波长范围内，测定不同激发光波长下的荧光强度，以激发光的波长为横坐标，荧光强度为纵坐标，绘制激发光谱，选择激发光波长（ex）。固定激发波长ex，在450600nm的波长范围内，测定不同荧光波长下的荧光强度，以荧光波长为横坐标，荧光强度为纵坐
10、标，绘制荧光光谱，选择荧光光波长（em）。在固定ex和em的条件下，分别测定不同浓度标准溶液洗脱液中VB2的荧光强度，以VB2的浓度C为横坐标，相对荧光强度为纵坐标，挥之标准曲线。注：洗脱液（丙酮：冰醋酸：超纯水=5:2:9）3、 测定样品 取尿样5ml，通过吸附柱进行吸附（VB2和杂质都会被吸附，热水将杂质洗脱，VB2易溶于有机溶剂，被保留在吸附柱上）、洗脱（洗脱液洗脱VB2）和荧光测定。【电脑操作】打开荧光光度计电源预热30min打开操作软件采集模式选光谱模式ex(激发波长为横坐标，荧光强度为纵坐标)em（以荧光波长为横坐标，荧光强度为纵坐标）改为定量模式输入ex，em测定【实验结果及处理
11、】公式：尿中VB2含量（mg/L）=样品管中VB2浓度10取尿量【注意事项】1、 操作应在避光下进行。2、 装住时要与水混装，以免柱内形成气泡和空隙。3、 测定前用洗脱液通过硅镁吸附柱，检查是否有荧光物质，有则用丙酮清洗烘干待用石墨炉原子吸收法测定样品中铅的含量【实验原理】样品用基体改进剂稀释后直接注入石墨管中，通过程序升温将样品灰化及原子化。在=283.3nm条件下测定铅基态原子蒸汽的吸光度，在一定实验条件下，其吸光度与溶液中铅的浓度呈正比，即A=Kc，据此进行定量分析。组成：铅元素灯共振线石墨炉中原子分光系统 水循环系统防止石墨管氧化，高纯氩气保护石墨管原子化过程：干燥、灰化、原子化、净化
12、【实验步骤】1、 血清样品处理 用微量移液管吸取血清100g置于1.5ml的塑料离心管中，加入0.9ml的纯水（稀释10倍），在漩涡混合器上充分震摇均匀。2、 仪器工作条件 =283.3nm，灯电流为13mA，狭缝宽度为0.4nm，氘灯背景矫正，氩气流量0.6L/min。石墨炉工作条件使用仪器推荐条件（因本次试验不使用基体改进剂，灰化温度应改为550）。进样体积20l，读数方式为峰面积。3、 工作曲线的绘制 将100g/ml的铅储备液逐级稀释1000倍至100g/L的铅标准溶液放入自动进样器，用稀释液稀释（机器自动稀释）到10、20、30、40g/L，以稀释液为标准空白，依次进样测定，得到工作
13、曲线。4、 样品测定 按仪器测定条件测定血清样品和试剂空白。【实验结果】【注意事项】1、 铅标准应用液的配制应采用逐级稀释法，以减小误差。（1ml10ml1ml10ml1ml10ml）2、 铅是高温下易挥发元素，在不使用基体改进剂时，灰化温度不能超过600。【仪器操作】1、开机预热光源开关打开接通氩气打开电脑系统（xxx32xxA？）将元素灯点亮（预热15min30min）背景校正（看AA，BG值是否正常）建立方法（new method）设置（settings）测量次数、温度自动采样量、设置采样位置标准系列（方程选择回归线性过零点，看单位，设置标准系列稀释浓度及储备液位置）2、设置样品信息设置
14、样品位置、样品身份（血清）、体积3、看看灯的稳定性（预热时间不够，寿命等影响稳定性）4、石墨炉设置手动校准自动进样器自动检查清洁石墨炉5、检测稀释剂的纯水放在1号位铅的标准品2号血清样品3号电化学实验实验一 溶出伏安法测定水中铅含量【实验原理】当在工作电极上加上一定电位进行预电解时，待测样品中的铅还原富集在电极上并与电极上的汞生成汞齐，然后施加反向扫描电压，此时汞齐中的铅便氧化溶出，其氧化电流与待测样品中的铅浓度成正比，因此可作定量分析。【实验步骤】1.打开LK2006A型电化学分析系统，选择“线性扫描溶出伏安法”，设置镀汞实验。参数:灵敏度10A/ V ；起始电位 0.000 V；滤波参数1
15、0 Hz ；电沉积电位 -1.000 V；放大倍率1 ；扫描速度100 mV/ s；平衡时间10 s；电沉积时间30 s电位增量1 mV；终止点位 0.00V2.将玻璃电极作工作电极，饱和甘汞电极作为参比电极，铂电极作对极，连接到LK2006A型电化学系统，并确认电化学主机与微机系统的连接正常。3.取30.0ml镀汞液与50ml烧杯中，插入三电极系统，接镀汞实验参数设定，镀汞，检查汞膜完好，即可测定样品，记录峰电流值h1 。4.取30ml 待测样品于烧杯中。选择“方波溶出伏安法”，设定样品测定的实验条件参数:灵敏度10A/ V ；起始电位 - 0.100 V ； 方波周期40 ms滤波参数10
16、 Hz ； 电沉积电位 - 1.000 V ；方波幅度20 mV放大倍率1 ； 电位增量4 mV ；平衡时间10 s；电沉积时间30 s终止电位0.00V5.在待测样品中加入5ml铅标准溶液按上述步骤进行测定，记下峰电流值h2。【结果计算】根据公式：Cx=h1CsVs/h2（Vx+Vs）-h1Vx五、 讨论本次实验过程中出现了一个错误： 待测液和铅标准溶液的加样顺序搞混了，即在30ml的铅标准溶液中加入了5ml的待测溶液，故我们的实验结果可能存在误差。实验二酸度计测水溶液PH【实验原理】酸度计主要是由参比电极（银-氯化银电极）、测量电极（玻璃电极）和精密电位计三部分组成。银-氯化银电极由金属银
17、、氯化银和饱和氯化钾溶液组成，电极电位不随溶液的PH变化而变化，在一定温度下和浓度下是一个定值。在25时为0.2V。玻璃电极：电极电位会随溶液的PH变化而变化。主要部分头部的玻璃球泡，是由特殊的敏感玻璃膜构成。玻璃膜对氢离子敏感，浸入被测溶液时，被测溶液的氢离子与电极玻璃球泡表面水化层进行离子交换，玻璃球泡内层也同样产生电极电势。由于内层氢离子浓度不变，外层氢离子浓度变化，因此内外层的电势差在变化，所以该电极电势随待测液的PH值不同而改变。离子选择性电极电位与待测离子呈能斯特响应。K值包括内参比电极电位和难于测量和计算的液接电位，因此要用已知PH的标准缓冲液（与被测溶液PH接近）进行校正，减小
18、由液接电位和不对称电位带来的误差。【注意事项】1. 使用前浸泡于蒸馏水或缓冲溶液中活化玻璃膜表面2. 玻璃电极的使用范围：pH =193. 避免碰碎或擦伤玻璃膜4不能测含 F- 的溶液和具有脱水性的溶液5复合pH电极需浸泡在KCl溶液中6电极浸入溶液需足够的平衡稳定时间7间隔中用蒸馏水浸泡，以稳定其不对称电位，用已知pH值的标准缓冲溶液进行定位校正可消除不对称电位的影响 8、读取PH时，还要读取温度！离子选择性电极电位有两部分组成，一个是内参比电极电位，一个是膜电位。当玻璃膜与待测溶液接触之后，就会由于玻璃膜相和待测溶液相的氢离子浓度的不同进行离子交换，经过一段时间达到平衡，就产生了两个相间电
19、位，其差值就是膜电位。电极电位与待测溶液中氢离子离子呈能斯特响应。实验三电导率的测定【实验原理】电解质具有导电能力，并遵循欧姆定律在一定条件下，一定浓度的电解质溶液的电阻与电极间的距离成正比，与电极截面积成反比电导是衡量电解质溶液导电能力的物理量，是电阻的倒数 （其中k为电导率：两电极板为1，距离1m的平行电极板之间电解质溶液的电导）与电解质溶液的浓度有关。【注意事项】1、 电导率仪要预热30min才能进行电导率的测定。2、 测定前用纯水清洗电导电极。高效液相色谱法（HPLC）测定饮料中山梨酸和苯甲酸【实验方法与原理】苯甲酸和山梨酸广泛用于食品防腐剂，能够引起人的再生障碍性贫血，粒状白细胞缺乏
20、等。因此国家严格限制其使用量。在本实验中，样品首先经过超声和加热除去二氧化碳和乙醇，然后过滤注入高效液相色谱仪，经反相C18液相色谱柱分离后，紫外检测器230 nm波长处检测。以色谱峰的保留时间定性，色谱峰面积在一定范围内与浓度呈线性关系进行定量分析。 【实验步骤】1、 样品处理 碳酸饮料（雪碧）：吸取10 ml碳酸溶液超声5 min（脱气），然后用微孔滤膜（0.22 m）过滤，滤液备用。吸取100 l滤液于离心管中，并加入900 l超纯水（稀释了10倍），混合均匀标记为样品。 2、 配制标准溶液 （1） 取一定量的苯甲酸储备液，经滤膜过滤于离心管中。吸取滤液50 l于另一离心管并加入950
21、l超纯水，得到50 g/ml的苯甲酸标准品，做好标记。 （2） 同理得到50 g/ml的山梨酸标准品，做好标记。 （3） 混合标准品配制：分别吸取500 l过滤后的苯甲酸和山梨酸储备液于离心管中混合均匀，得到500 g/ml的混合标准品。吸取50 l混合标准品（500 g/ml）于离心管中并加入950 l超纯水，得到25 g/ml的混合样，标记为混标。 3、 色谱条件： 色谱柱：C18反相键合色谱柱 流动相：甲醇-0.02 mol/L醋酸铵溶液（5 : 95） 流速：1 ml/min 检测波长：230 nm 进样量10 l 4、 标准品和样品测定 （1） 分别进苯甲酸（50 g/ml）、山梨酸
22、（50 g/ml）标准品，确定保留时间。 （2） 记录混合标准品（25 g/ml）的峰面积并按下式计算样品中苯甲酸和山梨酸含量： （3）测样品中的待测物质，根据保留时间确定苯甲酸，山梨酸的峰面积。计算方法：Cx=FCsAxAs式中：Cx为样品中被测物的含量（g/ml）；Cs为苯甲酸或山梨酸标准品的含量（g/ml）。F为稀释倍数；Ax样品的峰面积；As标准品的峰面积。 【仪器操作】 平衡柱子标准样测试（样品名、进样模式-标准样、方法-建立好的方法、位置-样品放置的位置、进样量、时间）inject进样【注意事项】1、如果被测溶液含有气泡，对测定和仪器的使用均有影响，因此需要将被测溶液超声加热除去二
23、氧化碳。 同时试验中所用的所有试剂均需脱气处理。2 、苯甲酸的灵敏波长为230 nm，山梨酸的灵敏波长为254 nm，在此波长测定时苯甲酸的灵敏度较低。因此波长选择230 nm。 3、平衡前用甲醇：水（5:95）冲洗柱子15 min，再用甲醇-0.02 mol/L醋酸铵溶液（5:95）进行平衡。 4、开机顺序：高压输液系统、进样系统、柱温箱、检测器、电脑软件。 5 、使用盐做流动相的时候：水：甲醇=95: 5冲洗柱子20 min以上；然后用甲醇冲洗色谱柱20 min以上，保存色谱柱。 6 、关机：清洗结束后，点击并将泵流量输入为0，等压力降为0时，关掉泵电源，退出Breeze工作站，再关闭仪器
24、各部分电源及计算机。 GC-MS（气相色谱与质谱联用仪）法测定N-亚硝胺类化合物【实验原理】 利用色谱对混合物的高分离能力和质谱对化合物的而准确鉴定能力，可以对N-亚硝胺类化合物进行定性定量分析。气相色谱的流动相为惰性气体，气固色谱法中以表面积大且具有一定活性的吸附剂作为固定相。当多组分混合样品进入色谱柱后，由于吸附剂对每个组分的吸附能力不同，经一段时间后，各组分在色谱柱中运行速度不同，吸附能力弱的组分容易被解吸下来，最先离开色谱柱进入检测器。因此各组分可以在色谱柱中彼此分离，顺序进入检测器，记录下来。质谱分析是通过被测样品离子的质荷比的测定进行分析的一种方法。被分析的样品首先要离子化，然后利
25、用不同离子在电场或磁场的运动行为的不同，把离子按质荷比分开而得到的质谱，通过样品的质谱和相关信息，可以得到样品的定性，定量结果。【知识点】1、 原理:利用组分在两相中分配系数不同进行分离2、 载气：惰性，3、检测器：火焰离子化，电子捕获、火焰光度、氮磷、热导 FID：氢气与带样载气混合，引入空气，火线点火，形成氢焰，将组分离 子化，在外加电场作用下，产生离子流，经信号放大，由色谱工作站记录。 氢气：空气：载气=1:10:1 检测器的温度要大于100为了防止水在离子室冷凝，降低灵敏度 NPD:对环境污染物中痕量N、P化合物具有高选择性 检测器温度进样口温度柱箱温度4、 分离条件的选择载气流速：最佳载气流速（此时塔板高最大，柱效最高）柱温：样品进样后迅速气化，气化室温度大于组分沸点程序升温：保证各组分都能与固定相充分接触（注意：柱温要低于固定相的沸点）GC-定量（内标法）MS-确定结构，定性-全扫描（根据出峰时间定性）-sim（离子检测）定量（外/内标，选择合适的特征离子进行定量）开始时间设为3min，使溶剂都出去再进行质谱扫描。【注意事项】1、 仪器保持良好的真空度-保证定量的准确度2、 防止离子源被污染3、 实验前进行柱子老化处理4、 二氯甲烷容易挥发，要及时盖好试管塞 打开气瓶-气相部分-质谱部分软件操作：抽真空设定气相色谱条件质谱条件