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1、-人教版高中生物选修一学案专题2 课题1 微生物的实验室培养-第 7 页专题1 微生物的培养与应用 课题1 微生物的实验室培养【学习目标】1. 了解有关培养基的基础知识2. 进行无菌技术的操作3. 进行微生物的培养【重点难点】重点：无菌技术的操作难点：无菌技术的操作【预习案】任务一、基础知识1. 培养基（1）培养基的种类包括 培养基和 培养基等。（2）培养基的化学成分一般都含有 、 、 、 四类营养成分，（3）在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物生长对 、 以及 等的要求。例如：培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加 ；培养霉菌时需要将培养基的PH调至 ；培养细菌时需要将培养基
2、的PH调至 ；培养厌氧微生物时需要提供无氧的条件2.无菌技术（1）获得纯净培养物的关键是 。避免杂菌污染的方法主要包括以下四个内容：（2）消毒是指 灭菌是指 （3）实验室常用的消毒方法是 ，此外，人们也常使用化学药剂进行消毒，如用 、 等。常用的灭菌方法有 、 、 ，此外，实验室里还用 或 进行消毒。任务二、实验操作1.制备牛肉膏蛋白胨固体培养基（1）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的方法步骤： 倒平板2.纯化大肠杆菌（1）微生物接种的方法中最常用的是 和 。平板划线法是指 稀释涂布平板法是指 【探究案】探究点一概括制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤。 认真阅读P17倒平板操作过程，并回答讨论的问题。
3、探究点二微生物纯化培养技术中的平板划线法和稀释涂布平板法的原理分别是什么？ 探究点三认真阅读P18平板划线法的操作过程，用红笔画出关键词，并回答讨论的问题。探究点四认真阅读P19稀释涂布平板法的操作过程，用红笔画出关键词，并回答讨论的问题。【训练案】1下列有关培养基的叙述正确的是 ( ) A培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质B培养基只有两类：液体培养基和固体培养基C固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基D微生物在固体培养基上生长时，可以形成肉眼可见的单个菌落2.不同培养基的具体配方不同，但一般都含( )A碳源、磷酸盐和维生素 B氮源和维生素C水、碳源、氮源和无机盐 D碳元素、氧元素、氢
4、元素、氮元素3获得纯净培养物的关键是 ( )A将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌 B接种纯种细菌C适宜环境条件下培养 D防止外来杂菌的入侵4下列常用的无菌操作中错误的是 ( )A用酒精擦拭双手 B用氯气消毒水源C验操作应在酒精灯火焰附近进行 D玻璃器皿(吸管、培养皿)可用酒精擦拭5制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是( )A计算、称量、倒平板、溶化、灭菌 B计算、称量、溶化、倒平板、灭菌 C计算、称量、溶化、灭菌、倒平板 D计算、称量、灭菌、溶化、倒平板6有关倒平板的操作错误的是 ( )A将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上 B使打开的锥形瓶瓶口迅速通过火焰C将培养皿打开，培养
5、皿盖倒放在桌子上 D等待平板冷却凝固后需要倒过来放置7有关平板划线操作正确的是 ( )A使用已灭菌的接种环、培养皿，操作过程中不再灭菌B打开含菌种的试管需通过火焰灭菌，取出菌种后需马上塞上棉塞C沾有菌种的接种环迅速伸人平板内，划三至五条平行线即可D最后将平板倒置，放人培养箱中培养8有关稀释涂布平板法，叙述错误的是 ( ) A首先将菌液进行一系列的梯度稀释B然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面C再放在适宜条件下培养 D结果都可在培养基表面形成单个的菌落9将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入37恒温箱的目的是 ( ) A对比观察培养基有没有被微生物利用 B对比分析培养基是否被
6、杂菌污染C没必要放人未接种的培养基 D为了下次接种时再使用10自养生物唯一碳源的是（ ）A糖类 B 石油 C 二氧化碳 D 花生粉饼11菌种保存控制的条件是（ ）（1）湿度 （2） 低温 （3） 干燥 （4） 有光 （5）隔绝空气 （6）适当有氧A（1）（4）（6） B（2）（3）（6） C（1）（5）（6） D（2）（3）（5）12下列物质中，不能用作酵母菌碳源的是（ ）A含碳有机物 B蛋白胨 C含碳无机物 D花生粉饼等天然物质13平板冷却凝后要将平板倒置，其意义是（ ）A利于大肠杆菌的接种 B防止杂菌污染 C利于培养的冷却 D 防止皿盖冷却水倒流入培养基14含C、H、O、N的大分子化合物可
7、以作为（ ）A异养微生物的氮源、能源 B异养微生物的碳源、氮源C自养微生物的氮源、能源、碳源 D自养微生物的氮源、能源、碳源15. 关微生物营养物质的叙述中，正确的是A.是碳源的物质不可能同时是氮源 B.凡碳源都提供能量C.除水以外的无机物只提供无机盐 D.无机氮源也能提供能量16. 下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是A.防止杂菌污染 B.消灭杂菌C.培养基和发酵设备都必须灭菌 D.灭菌必须在接种前17鉴定培养基的制作是否合格的方法是：将制备好的培养基放在 中保温1-2天看有无 ，如果没有 说明制作合格，反之则不合格。18某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验。实验包括制备培养基
8、、灭菌、接种及培养、菌落观察计数。请回答与此实验相关的问题。(1)培养基中含有的蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了_和_。除此之外，培养基还必须含有的基本成分是_和_。(2)对培养基进行灭菌，应该采用的方法是_。(3)为了使该实验所得结果可靠，还应该同时在另一平板上接种_作为对照进行实验。(4)培养20小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，这说明湖水样品中有_种细菌。一般说来，菌落总数越多，湖水遭受细菌污染的程度越_。(5)如果要检测水中是否含有大肠杆菌，培养基中还应加入_。19.右表是某微生物培养基成分，请据此回答：编号成分含量粉状硫10g（NH4）2SO40.4gK2HPO44.0gM
9、gSO49.25gFeSO40.5gCaCl20.5gZ|xx|H2O100ml（1）右表培养基可培养的微生物类型是 。（2）若除去成分，加入（CH2O），该培养基可用于培养 。（3）表中营养成分共有 类。（4）不论何种培养基，在各种成分都溶化后分装前，要进行的是 。（5）右表中各成分重量确定的原则 是 。（6）若右表培养基用于菌种鉴定，应该增加的成分是 。记忆大餐：1、培养基的种类包括 固体 培养基和 液体 培养基等。琼脂是从红藻中提取的多糖，在配制培养基中用作为 凝固剂。培养基的化学成分包括水、无机盐、碳源、氮源四类营养成分。培养基除满足微生物生长的 pH、特殊营养物质和氧气等要求。2、培
10、养基的类型及其应用：标准培养基类型配制特点主要应用物理性质固体培养基加入琼脂较多菌种分离,鉴定,计数半固体培养基加入琼脂较少菌种保存液体培养基不加入琼脂工业生产，连续培养化学组成合成培养基由已知成分配制而成，培养基成分明确菌种分类、鉴定天然培养基由天然成分配制而成，培养基成分不明确工业生，产降低成本目的用途鉴别培养基添加某种指示剂或化学药剂菌种的鉴别选择培养基添加（或缺少）某种化学成分菌种的分离3、碳源：如CO2、糖类、脂肪酸等有机物，构成微生物的结构物质和分泌物，并提供能量。氮源：如N2、氨盐、硝酸盐、牛肉膏、蛋白胨等，主要用来合成蛋白质、核酸及含氮代谢物等。含有C、H、O、N的化合物既可以
11、作为碳源，又可以作为氮源，如氨基酸等。生长因子：某些微生物正常生长代谢过程中必须从培养基中吸收的微量有机小分子，如某些氨基酸、碱基、维生素等。牛肉膏为微生物提供碳源、磷酸盐和维生素，蛋白胨主要提供氮源和维生素。4、培养乳酸杆菌时需要添加 维生素，培养霉菌时需要将培养基pH调节为 酸性，培养细菌时需要将pH调节为中性或微碱性 。5、获得纯净培养物的关键是 防止外来杂菌的入侵 。无菌技术包括：（1）对实验操作空间、操作者的衣着和手进行 清洁和消毒 ；（2）将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行 灭菌；（3）为避免周围微生物污染，实验操作应在 酒精灯火焰附近 旁进行；（4）避免已灭菌处理的材料用具与
12、 周围物品 相接触。6、消毒和灭菌的方法及应用，参考预习案。无菌技术除了防止培养物被污染外，还能防止感染实验操作者。7、培养基的配制过程：(1)计算(2)称量：准确称取各成分。称取牛肉膏和蛋白胨时动作要迅速，目的是防止牛肉膏吸收空气中水分。(3)溶化：整个过程不断用玻棒搅拌，目的是防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。(4)调pH：用1mol/LNaOH溶液调节pH至偏碱性。(5)灭菌：将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加塞包扎后用高压蒸汽灭菌锅灭菌；所用培养皿用报纸包扎后用干热灭菌箱灭菌。(6)倒平板：待培养基冷却至50左右时在酒精灯火焰附近操作进行。8、（1）锥形瓶的瓶口通过火焰的目的是消灭瓶口的杂菌
13、，防止杂菌感染培养基。（2）倒平板的目的是防止培养基冷却过程中形成的水滴落到培养基表面。（3）若皿盖和皿底之间粘有培养基，则该平板不能否培养微生物空气中杂菌会在这些粘附培养基上繁殖，并污染皿内培养基。（4）配制斜面培养基中，试管要加塞棉塞的目的是保持通气并防止杂菌感染。（5）试管培养基形成斜面的作用是增大接种面积。9、平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。（1）取菌种前灼烧接种环的目的是消灭接种环上的微生物；（2）除第一次划线外，其余划线前都要灼烧接种环的目的是消灭接种环上残留菌种；（3）取菌种和划线前都要求接种环冷却后进行，其目的是防止高温杀死菌种；（4）最后灼烧接种环的目的是防止细菌污染环境和操作者。（5）次划线后都从上次划线末端开始的目的是获得由单个细菌形成的标准菌落。10、稀释涂布平板法：将菌液进行一系列梯度稀释，并将不同稀释度菌液分别涂布到琼脂固体培养基上进行培养。当稀释倍数足够高时，即可获得单个细菌形成的标准菌落。11、频繁使用的菌种利用临时保藏法保存，长期保存菌种的方法是甘油管藏法。前者利用固体斜面培养基培养后，保存在4冰箱中保藏，每36个月转种培养一次，缺点是保存时间较短，容易发生污染和变异；后者将菌种和甘油等体积充分混匀后，保存在20冷冻箱中。