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1、-实验室菌种管理规程-第 14 页实验室菌种管理规程目的：保证菌种合理、有效地使用和保存，最大限度降低变异率，确保菌种的溯源性与稳定性，保证实验室和社会的生物安全。职责：主管负责菌种的出入库保管、保存、分发，组员负责菌种的确认、传代、使用及销毁。范围：本规程适用于实验室菌种的管理，包括菌种的保存、传代、使用及销毁等。1 菌种的保存1.1 工作用菌种的保存工作用菌种采用平板低温保存法。将菌种接种在适宜的固体培养基上，待菌生长充分以后，转移至28冰箱中保存。此法仅用于工作用菌种的短期保存，并应随时检查其污染杂菌和变异等情况，发现异常情况，经应灭活处理后销毁。保存时间为1周，超过该期限前挑取单菌落重
2、新于琼脂平板划线活化，若菌落活力下降则从-80冰箱中取用甘油冷冻管。1.2 传代用菌种的保存采用甘油冷冻管保藏法。1.2.1 甘油冷冻管保存法用无菌接种环轻轻刮平板上的单菌落并接种至适宜的液体培养内，置于适宜的培养条件下培养，菌液充分振荡后取适宜体积加入到已灭菌的冷冻管内，再加入等体积的无菌甘油（浓度40%），即为20%甘油菌悬液，轻轻振摇，使内容物充分混合，在-80冷冻条件下保存，保存期限为3年。每个菌株保存至少30个无菌冷冻管。使用时，取出一支放至室温，接种增菌培养或接种至琼脂平板复苏，挑取纯菌落传代或工作用。2 菌种的传代2.1 工作用菌种的传代当工作用菌种代数小于5时，在规定保存期限内
3、，可直接用上一代工作用菌种转接下一代工作用菌种。取在冰箱28保存的工作用菌种用普通琼脂平板传代，并将新传代的培养物替代原有的菌种，作为工作用菌种。也可取用“甘油冷冻管保藏法”保存的菌种，进行复苏，直接作为工作用菌种。菌种每1周传代一次，当超过5代，须用“甘油冷冻管保藏法”保存的原始菌种传代。2.2 传代用菌种的传代首先划线接种确认，根据日常检验工作的需要量，挑取纯菌落转接平板，作为工作用菌种；同时，结合菌种的代数和最长保存期限，挑取纯菌落制成菌悬液，按“1.2”的方法制备甘油冷冻管数支，作为传代用菌种。2.3 传代时注意事项无菌操作，使菌株不死亡，不污染、不丢失。同时实验人员也要采取有效的预防
4、措施进行自我保护，如工作时必须穿工作服，佩带无菌手套，实验完成以后消毒实验进行的区域、实验仪器和器具。如发生意外，如菌种泄漏或人员受伤，应立即向主管报告以便及时进行处理。3 菌种的保管3.1 实验室全部菌种都应由菌种负责人记录在册，并输入电脑以电子版形式存档，以便查找。菌种上应贴上明显的标签，标明名称、培养基、保种人、日期、编号等。菌种设专人加锁保管，并对所保存的菌种建立菌种保存、领用登记台账（附表3）。3.2 菌种的定期检查在菌种的保存期间，应每天检查保存菌种冰箱的温度、菌种管的塞子是否松动或生霉，如有异常应及时处理。3.3 所保管的菌种，不能随意转让其他单位和个人，需要时应有单位证明和批准
5、手续以及李爱科组长签字方可供应。4 菌种的领用与使用4.1 实验室人员根据实验需要，需到主管领取工作用菌种或传代用菌种，同时填写菌种领用登记台账相关内容。4.2 实验室人员从主管领取工作用菌种或传代用菌种，用于日常检验或验证试验，使用后及时填写菌种使用登记台账（附表6），以便追踪菌种使用历史。5 菌种（废弃）的销毁下列情况的菌种或培养物或被污染的器具等，必须采用121、45分钟湿热灭活处理：新一代菌种制备成功后的上一代菌种；使用完后的菌种和带有标准菌种的器具和培养物；超过有效期的菌种；凡被污染、变异、可疑等异常情况菌种；其他应废弃的菌种。6 附则附表1：检定菌接收记录附表2：检定菌种传代、分离
6、记录附表3：检定菌种保存、领用登记台账附表4：检定菌种观察记录附表5：检定菌种鉴定记录附表6：检定菌种使用登记台账附表7：废弃菌种（物品）销毁处理记录菌种资源详细信息（密）此项信息不对外公布，保存核心成员手中。菌种登记：编号+详细名称+来源+特性+动物实验+，随时补充，留照片。附表1：菌种接收记录记录名称菌种接收记录代码页次1共 页名称及编号数量代数来源接收日期接收人检查情况保存条件附表2：菌种传代、分离、保存记录记录名称菌种传代、分离记录代 码页次1共1页名称及编号 购进（领取）日期年 月 日来源传代前菌种保存方法传代用培养基传代日期传代用菌种编号总数量传代用菌种工作用菌种操作人数量编号有效
7、期保存方法数量编号有效期保存方法分离与纯化过程纯度检查结果操作人： 复核人：附表3：菌种使用登记台账记录名称菌种保存、领用登记台账代码页次1共1页收到日期名称及编号数量接收人移交人领用日期用途数量发放人领用人附表4：菌种观察记录记录名称菌种观察记录代码页次1共1页日 期冰箱温度（）塞子是否松动是否霉变处理措施 观察人附表5：菌种鉴定记录记录名称菌种鉴定记录代码页次1共1页菌种名称及编号鉴定原因开始鉴定日期鉴定人复核人年 月 日鉴定项目菌落形态革兰染色显微镜下形态典型生化反应特征鉴定结论 日期： 年 月 日附表6：菌种使用登记台账记录名称菌种使用登记台账代码页次1共1页领用日期名称及编号数量使用人制备菌悬液浓度(CFU/ml)用于检验的产品批号附表7：废弃菌种（物品）销毁记录记录名称废弃菌种（物品）销毁处理记录代码页次1共1页日期被处理菌种（物品）名称销毁原因处理方式批准人操作人监督人备注：废弃菌种要标明编号、数量（支）