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1、实验11 植物的组织培养,大多绿色开花植物靠种子繁殖（有性繁殖），不用种子繁殖（无性繁殖）的方法有：,无性繁殖,组织培养就是取一部分植物组织（外植体），如叶、芽、茎、根、花瓣或花粉等，在无菌条件下接种在三角瓶中的琼脂培养基上，给予一定的温度和光照，使之产生愈伤组织，或进而生根发芽。,一、组织培养概述,1.概念,2、植物组织培养的原理是什么？,植物细胞具有全能性，即生物体的细胞，具有使后代细胞形成完整个体的能力。,3.植物组织培养的基本过程:,植物组织培养过程示意图,烟草植株,根细胞 培养,形成愈 伤组织,发育成幼胚,长成 幼苗,成熟植株,4.植物组织培养条件:,含有全部营养成分的培养基、一定的
2、温度、 空气、无菌环境、适合的PH、适时光照等。,二、实验,培养基配制 外植体的选取 消毒接种 培养 移栽和栽培等。,1、实验材料,（1）MS培养基： 大量元素：C、H、O、N、P、S、K、Ca、Mg 微量元素：Fe、Mn、B、Zn、Cu、Mo、Cl、I、Co 有机成分：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等,（3）发芽培养基： MS培养基+BA+NAA+琼脂+蒸馏水,（2）萘乙酸NAA、苄基腺嘌呤BA,（4）生根培养基： MS培养基+NAA+琼脂+蒸馏水,2、步骤,1.取外植体,超净台上将无菌幼苗(无菌水冲洗)切段，每段至少1张叶片,2.生芽培养,生芽培养基中，放入1-3段切段（茎一部分插入培养
3、基），盖上封口膜。日光灯下保持1825的温度培养，每天光照不少于14.5h。,3.生根培养,23周后，将丛状苗在无菌条件下转入生根培养基中，在上述条件下继续培养。,5.定植,将苗转移到土中培养。,4.适应锻炼,将苗转移至草炭土或蛭石中继续生长，用玻璃罩或塑料布保持80以上的湿度，23天后打开减低湿度进行锻炼，直到将罩全部打开处于自然湿度下为止。,幼苗,外植体,丛芽,生根,锻苗,消毒 接种,愈伤 组织,胚状体,定植,植株,生根培养,生芽培养,1.不同植物、不同组织的生根和生芽是否都可使用与本实验相同的生长素和细胞分裂素浓度？,2.本实验用人工合成的激素，而不用植物中存在的天然激素，为什么？,不相
4、同,天然激素都有相应的使之分解的酶，所以使用时间短，而人工合成的，没有分解酶，作用时间长，效果显著。,课后题,微生物培养基以有机营养为主。与微生物的培养不同，MS培养基则需提供大量无机营养，无机盐混合物包括植物生长必须的大量元素和微量元素两大类。,4. 同LB培养基相比，MS培养基的配方有哪些明显的不同？,3.如果在自然界取植物样本进行组织培养，你认为应采取什么措施保证样本不被污染?,（1）操作环境清洁（2）植物样本的洁净（3）操作敏捷迅速,脱分化：将来自已分化组织的已停止分裂的细胞从植物体部分的抑制性影响下解脱出来，恢复细胞的分裂活性。 再分化:经脱分化的组织或细胞在一定的培养条件下可有转变
5、为各种不同细胞类型的能力。,愈伤组织,1、外植体带菌,2、培养基及接种器具灭菌不彻底,3、接种操作时带入,4、环境不清洁,污染途径,污染的预防措施,（一）防止外植体带菌 （二）保证培养基及接种器具彻底灭菌 （三）操作人员严格遵守无菌操作规程 （四）保证接种与培养环境清洁,思考：以下培养基出现的现象反应了什么问题？,1、培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌） 2、外植体的消毒（酒精、氯化汞） 3、接种的无菌操作（酒精、酒精灯灼烧） 4、无菌箱中的培养； 5、移栽到消过毒的环境中生存一段时间。,在整个操作过程中，是如何来实现无菌环境的？,植物全能性 的表达,离体的植物器官、组织、细胞,游离单细胞或原生质体,胚状体,根、芽,愈伤组织,人工种子,再生植株,扦插,嫁接,压条,