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-支原体PCR检测步骤-第 2 页支原体PCR检测步骤一、 提取支原体DNA1， 取1ml 细胞培养液，（对照为1ml新鲜培养液）13000g离心5min，用1ml D-PBSA（即无钙离子、镁离子的PBS）重悬，离心再重悬，重复两次。2， 沉淀加0. 2ml D-PBSA重悬，90，15min。3， 抽提DNA：氯仿，异丙醇抽提法二、 pcr体系：灭菌水： 6 ulF primer：ulR primer：ulcDNA 1 uld NTP MIXa0A： ulbuffer: 1 ul放在PCR仪中：进行下列步骤：95 7min 、72 3min、65 2min、72 5min打开热盖，美管中加入0.2ul taq酶继续下面步骤：（95 4s、65 8s、72 16s）每次外延1s 32个循环，最后延伸72 10min附支原体16s 引物：（已blast过）（1）.正向引物：5-ACTCCTACGGGAGGCAGCAGTA-3（2）.反向引物：5-TGCACCATCTGTCACTCTGTTAACCTC-3产物大小：705bp