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1、-土壤中分解尿素的细菌的分离与计数-第 3 页土壤中分解尿素细菌的分离与计数课题背景尿素是一种重要的农业 肥。但是，尿素 (能，不能)直接被农作物吸收。尿素只有被 分解成 之后，才能被植物吸收利用。土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成 。分解尿素方程式： 。一、研究思路(一)筛选菌株1.实验室中微生物的筛选应用的原理：人为提供有利于 生长的条件（包括 等），同时抑制或阻止其他微生物生长。2.实例：PCR技术利用的耐高温的 是从生活在热泉中的 细菌中提取的,之所以能从热泉中筛选出该菌是因为 。3.选择培养基：在微生物学中，将允许 种类的微生物生长，同时 和 其他种类微生物生长的培养基，
2、称做选择培养基。(二)统计菌落数目 和 。当样品的 足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个 。通过统计平板上的 数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为保证结果准确，一般选择菌落数在 的平板进行计数。每克样品中的菌株数= 。3.统计的菌落数往往比活菌实际数目低。这是因为当两个或多个细胞在一起时，平板上观察到的只是一个 。因此，统计结果一般用 数而不是 数来表示。(三)设置对照设置对照的目的是排除实验组中 对实验结果的影响，提高实验结果的 。二、实验设计关于土壤中某样品细菌的分离与计数实验操作步骤如下：1土壤取样：土壤中的微生物绝大多数分布在距地表约 cm的土壤层。土壤取样
3、时一般铲去 土3cm左右。再取样，将样品装入事先准备好的信封中。2制备培养基：准备牛肉膏蛋白胨培养基和 。将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显 （多于，少于）选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基可以作为 （对照组，实验组），用来判断选择培养基是否起到了选择作用。3 微生物的培养与观察将10g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀，此时将10g土样相当于稀释 倍；吸取上清液 mL，转移至盛有 ml的无菌水大试管中，吹吸三次，充分混匀，这时将土样相当于稀释 倍；依次等比稀释至107稀释度，并按照由103107稀释度的顺序分别吸取 mL进行平板涂布操作。每个稀释度下需要3个选择培养基、1个牛肉膏蛋白胨培养基，将涂布好的培养皿放在30温度下培养，及时观察和记录。 三、操作提示无菌操作做这个实验前，复习学习过的无菌操作。此外，还须注意以下几点。 和盛土样的信封在使用前都需要灭菌。 旁称取土壤。3.在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在 旁操作。四、课题延伸初步鉴定细菌原理：在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的 酶将尿素分解成了 。 会使培养基的 增强，pH 。初步鉴定细菌方法：以 为唯一氮源的培养基中加入 ，培养某种细菌后，如果 升高，指示剂 。