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1、液相色谱与气相色谱相比较，在以下几个方面具有优越性：（1）气相色谱不适用于不挥发物质与对热不稳定物质，而液相色谱却不受样品的挥发性与热稳定性的限制。有些样品因为难以汽化而不能通过柱子，热不稳定的物质受热会发生分解，也不适用于气相色谱法。这使气相色谱法的使用范围受到了限制。据统计，目前气相色谱法所能分析的有机物，只占全部有机物的15%20%。另一方面，液相色谱却不受样品的挥发性与热稳定性的限制。所以液相色谱非常适合于分离生物、医药有关的大分子与离子型化合物，不稳定的天然产物，种类繁多的其它高分子及不稳定的化合物。（2）对于很难分离的样品，用液相色谱常比用气相色谱容易完成分离，主要有以下三个方面的
2、原因：液相色谱中，由于流动相也影响分离过程，这就对分离的控制与改善提供了额外的因素。而气相色谱中的载气一般不影响分配，也就是说，在液相色谱中，有两个相与样品分子发生选择性的相互作用。液相色谱中具有独特效能的柱填料（固定相）的种类较多，这样就使固定相的选择余地更大，从而增加了分离的可能性。液相色谱使用较低的分离温度，分子间的相互作用在低温时更为有效，因此降低温度一般会提高色谱分离效率。（3）与气相色谱相比，液相色谱对样品的回收比较容易，而且是定量的，样品的各个组分很容易被分离出来。因此，在很多场合，液相色谱不仅作为一种分析方法，而且可以作为一种分离手段，用以提纯与制备具有中等纯度的单一物质。在气
3、相色谱中所分离出的各样品组分虽也可以回收，但一般都不太方便，而且定量性差。液相色谱法由于具有这些气相色谱法不具备的优点，因此在许多领域得到广泛的应用。气相色谱与液相色谱相比各有什么特点呢？让我们从以下几个方面进行考察：一、流动相 GC用气体作流动相，又叫载气。常用的载气有氦气、氮气与氢气。与HPLC相比，GC流动相的种类少，可选择范围小，载气的主要作用是将样品带入GC系统进行分离，其本身对分离结果的影响很有限。而在HPLC中，流动相种类多，且对分离结果的贡献很大。换一个角度看，GC的操作参数优化相对HPLC要简单一些。此外，GC载气的成本要低于HPLC流动相的成本。二、固定相 因为GC的载气种
4、类相对少，故其分离选择性主要通过不同的固定相来改变，尤其在填充柱GC中，固定相常由载体与涂敷在其表面的固定液组成，这对分离有决定性的影响，所以，导致了种类繁多的GC固定相的开发研究。迄今已有数百种GC固定相可供我们选择使用，但常用的HPLC固定相也就十几种。故LC在很大程度上要靠选用不同的流动相来改变分离选择性。当然，毛细管GC常用的固定相也不过十几种。在实际分析中，GC一般是选用一种载气，然后通过改变色谱柱（即固定相）以及操作参数（柱温与载气流速等）来优化分离，而LC则往往是选定色谱柱后，通过改变流动相的种类与组成以及操作参数（柱温与流动相流速等）来优化分离。三、分析对象 GC所能直接分离的
5、样品是可挥发、且热稳定的，沸点一般不超过500。据有关资料统计，在目前已知的化合物中，有20%25%可用GC直接分析，其余原则上均可用LC分析。也就是说GC的分析对象远没有LC多。需要指出的是，有些虽然不能用GC直接分析的样品，通过特殊的进样技术，如顶空进样与裂解进样，也可用GC间接分析。比如高分子材料的裂解色谱就是如此。这在一定程度上扩大了GC分析对象的范围。此外，GC比LC更适合于永久气体的分析。四、检测技术 GC常用的检测技术有多种，比如热导检测器（TCD）、火焰离子化检测器（FID）、电子俘获检测器（ECD）、氮磷检测器（NPD）等，其中FID对大部分有机化合物均有响应，且灵敏度相当高
6、，最小检测限可达纳克级。而在LC中尚无通用性这么好的高灵敏度检测器。商品LC仪器常配的也就是紫外-可见光吸收检测器（UV-Vis）与示差折光检测器（RI）。前者的通用性远不及GC中的FID，后者的灵敏度又较低，且不适于梯度洗脱。当然，不论GC还是LC，都有一些高灵敏度的选择性检测器，GC有ECD与NPD等，LC有荧光与电化学检测器。较为理想的检测器应该首推MS，但在这一点上，GC目前要优于LC。因为GC流动相的特点，它与MS的在线联用已不存在任何问题，特别是毛细管GC与MS的联用已成为常规分析方法。而LC与MS的联用就受到了流动相的限制。虽然目前已有多种接口，如离子束、热喷雾、电喷雾等，但流动
7、相的选择还是受到明显的限制。五、制备分离在新产品的研究开发过程中，或在未知物的定性鉴定工作中，常需要收集色谱分离后的组分作进一步分析，而某些高纯度的生化试剂则是直接用色谱分离来制备的。就这一点而言，GC在原理上应该是有优势的，因为收集馏分后载气很容易除去。然而，由于GC的柱容量远不及LC，如果用GC作制备，那是相当费时的。因此，制备GC的实用价值很有限。制备LC则有很广泛的应用。比较气相色谱法与高效液相色谱法怎样区别比较气相色谱法与高效液相色谱法怎样区别一、分离原理： 1.气相：气相色谱是一种物理的分离方法。利用被测物质各组分在不同两相间分配系数(溶解度)的微小差异，当两相作相对运动时，这些物
8、质在两相间进行反复多次的分配，使原来只有微小的性质差异产生很大的效果，而使不同组分得到分离。 2.液相：高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上，引用了气相色谱的理论，在技术上，流动相改为高压输送(最高输送压力可达4.9107Pa);色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱(每米塔板数可达几万或几十万);同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流出物进行连续检测。二、应用范围： 1.气相：气相色谱法具有分离能力好，灵敏度高，分析速度快，操作方便等优点，但是受技术条件的限制，沸点太高的物质或热稳定性差的物质都难于应用气相色谱法进行分析。一般对500以下不易挥发或受热易分解
9、的物质部分可采用衍生化法或裂解法。 2.液相：高效液相色谱法，只要求试样能制成溶液，而不需要气化，因此不受试样挥发性的限制。对于高沸点、热稳定性差、相对分子量大(大于 400 以上)的有机物( 些物质几乎占有机物总数的 75% 80% )原则上都可应用高效液相色谱法来进行分离、分析。 据统计，在已知化合物中，能用气相色谱分析的约占20%，而能用液相色谱分析的约占7080%。三、仪器构造： 1.气相：由载气源、进样部分、色谱柱、柱温箱、检测器与数据处理系统组成。进样部分、色谱柱与检测器的温度均在控制状态。 1.1 柱箱：色谱柱是气相色谱仪的心脏， 样品中的各个组份在色谱柱中经过反复多次分配后得到
10、分离， 从而达到分析的目的， 柱箱的作用就是安装色谱柱。 由于色谱柱的两端分别连接进样器与检测器， 因此进样器与检测器的下端( 接头) 均插入柱箱。 柱箱能够安装各种填充柱与毛细管柱， 并且操作方便。 色谱柱( 样品) 需要在一定的温度条件下工作， 因此采用微机对柱箱进行温度控制。并且由于设计合理， 柱箱内的梯度很小。 对于一些成份复杂、沸程较宽的样品， 柱箱还可进行三阶程序升温控制。且程序设定后自动运行无需人工干预， 降温时还能自动后开门排热。 1.2 进样器： 进样器的作用是将样品送入色谱柱。如果是液体样品， 进样器还必须将其汽化， 因此采用微机对进样器进行温度控制。 根据不同种类的色谱柱
11、及不同的进样方式， 共有五种进样器可供 选择： 1.填充柱进样器 2.毛细管不分流进样器附件 3.毛细管分流进样器附件 4.毛细管分流/不分流进样器 5.六通阀气体进样器 1.3检测器: 检测器的作用是将样品的化学信号转化为物理信号( 电信号) 。 检测器也需要在一定的温度条件下才能正常工作， 因此采用微机对检测器进行温度控制。 根据各种样品的化学物理特性， 共有五种检测器可供选择： 1.氢火焰离子化检测器(FID) 2.热导检测器(TCD) 3.电子捕获检测器(ECD) 4.氮磷检测器(NPD) 5.火焰光度检测器(FPD) 1.4 数据处理系统 该系统可对测试数据进行采集、贮存、显示、打印
12、与处理等操作，使样品的分离、制备或鉴定工作能正确开展。 2.液相：高效液相色谱仪主要有进样系统、输液系统、分离系统、检测系统与数据处理系统组成。 2.1 进样系统 一般采用隔膜注射进样器或高压进样间完成进样操作，进样量是恒定的。这对提高分析样品的重复性是有益的。 2.2 输液系统 该系统包括高压泵、流动相贮存器与梯度仪三部分。高压泵的一般压强为l.474.4X107Pa，流速可调且稳定，当高压流动相通过层析柱时，可降低样品在柱中的扩散效应，可加快其在柱中的移动速度，这对提高分辨率、回收样品、保持样品的生物活性等都是有利的。流动相贮存错与梯度仪，可使流动相随固定相与样品的性质而改变，包括改变洗脱
13、液的极性、离子强度、PH值，或改用竞争性抑制剂或变性剂等。这就可使各种物质(即使仅有一个基团的差别或是同分异构体)都能获得有效分离。 2.3 分离系统 该系统包括色谱柱、连接管与恒温器等。色谱柱一般长度为1050cm(需要两根连用时，可在二者之间加一连接管)，内径为25mm，由优质不锈钢或厚壁玻璃管或钛合金等材料制成，住内装有直径为510m粒度的固定相(由基质与固定液构成).固定相中的基质是由机械强度高的树脂或硅胶构成，它们都有惰性(如硅胶表面的硅酸基因基本已除去)、多孔性(孔径可达1000?)与比表面积大的特点，加之其表面经过机械涂渍(与气相色谱中固定相的制备一样)，或者用化学法偶联各种基因
14、(如磷酸基、季胺基、羟甲基、苯基、氨基或各种长度碳链的烷基等)或配体的有机化合物。 因此，这类固定相对结构不同的物质有良好的选择性。例如，在多孔性硅胶表面偶联豌豆凝集素(PSA)后，就可以把成纤维细胞中的一种糖蛋白分离出来。另外，固定相基质粒小，柱床极易达到均匀、致密状态，极易降低涡流扩散效应。基质粒度小，微孔浅，样品在微孔区内传质短。这些对缩小谱带宽度、提高分辨率是有益的。根据柱效理论分析，基质粒度小，塔板理论数N就越大。这也进一步证明基质粒度小，会提高分辨率的道理。 再者，高效液相色谱的恒温器可使温度从室温调到60C，通过改善传质速度，缩短分析时间，就可增加层析柱的效率。 2.4 检测系统
15、 高效液相色谱常用的检测器有紫外检测器、示差折光检测器与荧光检测器三种。 (1)紫外检测器 该检测器适用于对紫外光(或可见光)有吸收性能样品的检测。其特点：使用面广(如蛋白质、核酸、氨基酸、核苷酸、多肽、激素等均可使用);灵敏度高(检测下限为10-10g/ml);线性范围宽;对温度与流速变化不敏感;可检测梯度溶液洗脱的样品。 (2)示差折光检测器 凡具有与流动相折光率不同的样品组分，均可使用示差折光检测器检测。 ，糖类化合物的检测 使用此检测系统。这一系统通用性强、操作简单，但灵敏度低(检测下限为10-7g/ml)，流动相的变化会引起折光率的变化，因此，它既不适用于痕量分析，也不适用于梯度洗脱样品的检测。 (3)荧光检测器 凡具有荧光的物质，在一定条件下，其发射光的荧光强度与物质的浓度成正比。因此，这一检测器只适用于具有荧光的有机化合物(如多环芳烃、氨基酸、胺类、维生素与某些蛋白质等)的测定，其灵敏度很高(检测下限为10-1210-14g/ml)，痕量分析与梯度洗脱作品的检测均可采用。 2.5 数据处理系统 该系统可对测试数据进行采集、贮存、显示、打印与处理等操作，使样品的分离、制备或鉴定工作能正确开展。第 10 页