蛋白质详解分类性质生物化学课件完整版生物化学课件.doc

上传人:叶*** 文档编号:35912232 上传时间:2022-08-24 格式:DOC 页数:135 大小:2.27MB
返回 下载 相关 举报
蛋白质详解分类性质生物化学课件完整版生物化学课件.doc_第1页
第1页 / 共135页
蛋白质详解分类性质生物化学课件完整版生物化学课件.doc_第2页
第2页 / 共135页
点击查看更多>>
资源描述

《蛋白质详解分类性质生物化学课件完整版生物化学课件.doc》由会员分享,可在线阅读,更多相关《蛋白质详解分类性质生物化学课件完整版生物化学课件.doc(135页珍藏版)》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。

1、第二章 蛋白质第一节 蛋白质的概念与其生物学意义一、什么是蛋白质?AA 借肽键相连形成的高分子化合物(短杆菌肽含D-苯丙氨酸)O 肽键:CNH 也叫酰胺键二、蛋白质的生物学作用(或称功能分类)物质吸收与运输、运动,调节代谢、储存养分、催化各种生化反应、分子间的识别(支架蛋白)、信息传递(受体 复制酶)、记忆、疾病防御 抗体。应用:固体酶的工业应用(联于水不溶性树脂上)、脱(纺织品)浆(淀粉酶)、生化制药,蛋白酶用于皮革的脱毛与软化等,都是利用蛋白质的催化作用,蛋白质生物芯片(贮存信息量大,将多种蛋白质抗体固定、排列到玻璃板上,能检测各种疾病蛋白与其他基因表达蛋白),进行病原体与疾病诊断等。第二

2、节 蛋白质的组成一、蛋白质的元素组成: C(50-55)、H(6-8)、O(20-30%)、N(15-18)、S(半胱aa)(0-4%)有的还含有P(酪蛋白)、Fe、Zn、Mo(钼Fe蛋白)、Cu、I,特别是含N量都很接近,平均为16% 。所以,测出含N量 6.25(100/16 蛋白质系数)即可推测出蛋白质的含量凯氏定氮。二、蛋白质的aa组成通常只有20种,除Pro外均为 aa ,除甘氨酸外,都有D、L两种异构体(碳原子为不对称碳原子)所以有旋光性。投影式如下: COOH COOH H2N C H H C NH2 R R L D aa的分类方法:(一)氨基酸的种类分类一 根据侧链基团R的化学

3、结构分为四类:第一类 脂肪族aa:侧链是脂肪烃链一氨基一羧基(中性):一氨基一羧基aa中共九种:H CH COOH CH2 CH COO CH2 CH COO NH2 OH NH+3 SH NH+3 (Gly:G) (Ser:S) (Cys:C)CH3 CH COO CH3 CH CH COO CH3 CH CH COO NH+3 OH NH+3 CH3 NH+ 3 (Ala:A) (Thr:T) (Val:V 支链aa)CH3 S CH2 CH2 CH CO CH3 CH CH2 CH O(Leu: L支链aa)(Met:M) NH+3 CH3 NH+3 CH3 CH2 CH CH COO

4、CH3 NH+3 (Ile:I支链aa)一氨基二羧基aa(酸性)与其酰胺OOC CH2 CH COO OOC CH2 CH2 CH COO NH+3 NH+3 (Asp:D) (Glu:E) O O H2N C CH2 CH COO H2N C CH2 CH2 CH COO NH+3 NH+3 (Asn:N) (Gln:Q)二氨基一羧基aa(碱性: NH2-COOH)H3N+ CH2(CH2)3 CH COO H2N C NH (CH2)3 CH COO NH3+ NH2+ NH3+ (Lys:K) (Arg:R)第二类 芳香族aa(含有苯环的化合物叫做芳香族化合物,有的包括Trp): CH2

5、 CH COO HO CH2 CH COO NH+3NH+3 (Phe:F) (丙aa取代) (Tyr:Y)第三类 杂环aa:HC CCH2 CH COO CH2 CH COO HN+ NH NH+3 N NH+3 CH (His:H 咪唑基) (Trp :W 吲哚基 苯并吡咯)第四类 脯氨酸,也称杂环亚氨基酸:由Glu还原、环化、再还原形成 COO 四氢吡咯-2-羧酸 NH2+ (Pro:P)分类二 按侧链R基团的极性(与在pH7左右时的解离状态)分为:非极性:甘、丙、缬、亮、异亮、苯丙、蛋、脯、色氨酸。不带电荷:带OH、SH、酰胺基极性 带负电荷(酸性aa) 带正电荷:Lys、Arg、Hi

6、s (碱性aa) . His等电点为7.59此外在蛋白质代谢中还有鸟aa、瓜aa(尿素循环中)、胱aa、羟脯aa、羟赖aa(胶原蛋白的组分)。甘aa的H介于极性与非极性之间,有时归入极性不带电荷类中。 人和动物的必需aa:不能自身合成必须由食物获得。Thr、Val、Met、Leu、Ile、Phe、Lys、Trp、His*、Arg* (*半必需aa,儿童合成不足)(二)aa的性质1. 物理性质:无色结晶,易容于水,不容于有机溶剂,熔点高(Gly:232,乙酸:16.6,分子间靠氢键缔合),这些特性说明是离子化合物。2. 两性解离与等电点:(难点*) COO 加碱解离出H+带负电,加H+结合H+带

7、正电,向阴极移动, 在某一pH下带正、负电荷量相等。 H3N+ C H (由很酸向碱变化NH+3 CH COOH NH+3 CH COO ) R R R在电场中不移动,此时的pH称为aa的等电点(pI)。此时aa的溶解度最小(因为静电作用),pI与COOH和NH2的解离常数有关。K1:COOH解离为 COO + H+的解离常数;K2:H3N+解离为 NH2 + H+的解离常数。其pI可从pK计算或测定(用酸碱滴定法测定)。 aa等电点的计算:只有一个解离基团的物质AH,其解离常数与pH的关系为pH=pK+lg(A-/AH).证明:AH A+H+ K=A-* H+/AH H+=K*AH/ A-=

8、K/(A-/AH)-lg H+=-lgk-lg(A-/AH) 即:pH=pK+lg(A-/AH)Henderson-方程。当有一半解离时,即 A-=AH时,pH=pK,即溶液的pH可由其溶质的解离常数与解离量计算而得,溶质的解离常数可查得。pK:解离常数K的负对数。aa可看作二元弱酸(酸性条件)有两个可解离的H+其分步离解如下: K1(+OH)在充分酸的条件下 RCHCOOH RCHCOO + H+ NH+3 NH+3 (R+) (R0) K2 RCHCOO RCHCOO + H+ NH+3 NH2 (R0) (R)R0H+R0H+ R+ R+= K1= K1 R0=R+ 时K1=H+R-H+

9、 K2R0K2= R = R0 H+ 用NaOH滴定到R0 = R时K2 =H+等电点时:aa处于两性离子状态,可有少量解离成阳离子和阴离子,但解离成阳离子和阴离子的数目和趋势相等。即:R=R+ 即 R0H+ / K1=K2R0 / H+ H+2= K1* K2 H+2=K1 K2 lgH+=pH;lgK1=pK1; lgK2=pK2 两边取负对数得2lgH+lg K1lgK2即: pH= pK1 + pK2 / 2 = pI 分子的存在状态是多种多样的,但在一定条件下以某一状态为主。即aa的等电点pI就是两性离子(R0)两侧的pK值的平均值。基团的pK值可查得,故pI值可由二pK值计算得之。

10、对于有三个解离基团的aa,如Asp、Lys只要取其兼(两)性离子两侧的pK值的平均值即得pI值。COOH COO COO CH NH+3 K1 CH NH+3 K2 CH NH+3 K3 Asp= CH2 CH2 CH2 COOH COOH COO Asp+(R+) Asp0(R0) Asp(R)等电点时Asp主要以兼性离子R0存在,(R+)与(R)很小且相等(等电状态为理想状态,pI为理论值)。pI=(pK1+pK2)/ 2 同上赖COOH COO COO COO CHNH+3 K1 CHNH+3 K2 CHNH2 K3 CHNH2 (CH2)4 (CH2)4 (CH2)4 (CH2)4 N

11、H+3 NH+3 NH+3 NH2 (R2+) (R+) (R0) (R)pI=(Pk2+pK3)/ 2 因R2+可忽略不计(pI时可认为它是不存在的,否则就不是等电状态了)。NH2比NH2碱性强,结合H+能力大,结合后不易放出H+(因受COOH影响小)。3. 氨基酸的化学性质:与强酸、强碱都可生成盐(铵盐与羧酸盐)如 谷氨酸钠与水合茚三酮的反应 80-100的条件下,首先使aa氧化脱羧脱氨形成醛,而本身被还原成还原型茚三酮,然后还原型茚三酮、氨和另一分子的水合茚三酮缩合形成蓝紫色的二酮茚二酮茚胺,这是aa 定性定量测定的基础,反应如下ONHOOOHOHOOHOOOONHOHOOO3H2O+

12、NH3 + (二酮茚-二酮茚胺 紫兰色 吸收峰 570nm )Pro、羟Pro生成黄色物质(因为无氨基) 用于比色、测定、层析、电泳的显色剂。因为产生CO2 ,也可用CO2气体分析法测定aa(只限于-氨基酸),肽和蛋白也有此反应,肽越大灵敏度越差。与亚硝酸的反应(aa的NH2基被氧化成 OH),+NH3N被氧化成N2,HNO2N被还原为N2,等量进行。所以N2一半来自HNO2(其他伯氨基均可)。生成N2的反应叫van slyke(范斯莱克)反应。可测N2量(体积)计算氨基的含量。用于测定蛋白质的水解程度。 与甲醛的反应:酸碱滴定没有适宜的指示剂(因为等当点过高或过低)。其氨基可与甲醛反应(加成

13、),生成N羟甲基或N,N二羟甲基aa。使NH+3变为NH2释放出H+。使溶液酸性增强,可用NaOH滴定之。与NH2的含量相当,即aa含量。这就是aa的甲醛滴定法,(滴定到放出的H+被中和时的 pH为终点)。RCHCOO RCHCOO+H+ +NH3 NH2 +HCHO RCHCOO NHCH2OH +HCHO RCHCOO N(CH2OH)2与2,4二硝基氟苯的反应(胺与卤代烷的反应)NH3的烷基化,生成黄色DNPaa,不被酸水解。也可用之测肽和蛋白质的N端aa,反应后酸解得N端的DNPaa,有机溶剂提取分离,层析与标准氨基酸对比即可鉴定之。 O2NFNO2NCH3O=S=OH3CClDNFB

14、 丹磺酰氯 Sanger试剂 (5二甲氨基萘磺酰氯)O2N NF NO2O2NF NO2 R H R + H2NCHCOOH CHCOOH 因为丹磺酰aa有强烈的荧光,所以可用荧光光度计测定。(均在试剂与NH2之间脱去卤化氢)均称 Sangar反应。DNFB亦可与非氨基反应,如可生成:DNP-鸟氨酸。+aaS RNHCNHCHCOOHCONCNHCHSRN=C=S与异硫氰酸苯酯(PITC)的反应,称艾德曼反应(Edman)反应:弱碱性条件下,形成苯氨基硫甲酰aa(PTC aa),在无水酸(硝基甲苯中与酸作用)环化为苯乙内酰硫脲氨基酸(简称PTH或PTH-氨基酸)。PTH在无水酸中极稳定。PTC

15、基的引入使紧接着的肽键减弱,所以在无水酸中只切下之(环化断裂同时发生)PTHaa在紫外区有强吸收。Vmax=268nm.PTHaa可用各种层析技术分离,紫外分析测定与标准PTHaa对比即可知为何种aa(N 末端),多肽、蛋白的N 末端aa也可与PITC反应,不断重复可得蛋白质aa顺序,多肽的aa顺序自动分析仪,即以此原理设计而成。一次可测60多个aa。7. 成肽反应:肽即氨基酸脱水缩合而成的化合物RCHCOOH + H2NCHCOOH RCHCONHCHCOOH NH2 R NH2 R二肽、三肽含一个自由的氨基与羧基,还可缩合为多肽蛋白质 活性肽:谷胱甘肽GSH *Glu的r羧基Cys的氨基缩

16、合成r肽键: SHCOOH O CH2 O HCH (CH2)2 C NH CH C NH C COOHNH2 2H H GSSG(氧化还原酶的辅酶 SH)催产素与加压素(激素类):前者使子宫与乳腺平滑肌收缩二者只有两个aa不同:3Ile 3Phe 8Leu 8Arg 所以有催产和促排乳作用,后者则使血管平滑肌收缩使血压升高(也使肾小球血管收缩形成尿减少)(也是血压升高的原因之一)。所以也叫抗利尿激素,也与学习的记忆过程有关。均由下丘脑合成,神经垂体分泌入血H3N+S67 8 99肽O CysS TyrPheGlnAsnCysPro Arg GlyCNH2 升压素 C端Met 脑啡肽:许多有镇

17、痛作用: C端Leu( Leu脑啡肽已人工合成) 似吗啡有镇痛作用但不上瘾 (5肽)TyrGlyGlyPheMet 促肾上腺皮质激素(ACTH 39肽,脑垂体分泌)、 胆囊收缩素(33肽,十二指肠分泌)括约肌收缩,胆汁分泌减少引起厌食(减肥) 胰高血糖素(29肽,胰岛-细胞分泌)使糖原降解,血糖升高,与胰岛素相反。8 与荧光胺反应(氨基):产物具有荧光 RN CHCOOH + CO2OOOO +aa OHO 荧光胺 荧光产物(被390nm光激发,发射475nm的荧光)ng级9. 与5,5/双硫基双(2硝基苯甲酸)反应 测半胱aa (Cys) 等的游离SH含量,生成含SH的硝基苯甲酸产物OD41

18、2nm有一吸收峰可测之Cys的含量。SNO2COOH SHOOCNO2SNO2COOHCH2 CH COO SH NH+3 + H Cys 5,5/双硫基双(2硝基苯甲酸) 硫代硝基苯甲酸 Cys与抗性有关 (吸收峰412nm)(三)aa制备与分析 (可略)制备: 蛋白水解:毛发水解(H+) 胱aa、半胱氨酸 发酵:Glu菌发酵 Glu钠 化学合成: 酮酸 + NH3 aa 分 离:层析与电泳 第三节 蛋白质的结构蛋白质多肽链可分为四级结构。一、蛋白质的一级结构:其aa种类、连接方式与排列顺序,包括二硫键(共价键)。H2NCHCONHCHCONHCHCONHCHCOOH R1 R2 R3 Rn

19、NHCHCO (称为aa残基) R 成环则无书写: N端(氨基末端):有氨基的一端写在左边用H表示 C端(羧基末端):有羧基的一端写在右边用OH表示连接方式:CONH。SS与稳定肽链的空间结构和生物活性有关如胰岛素:51aa(分子质量5734)21A+30B 6 7 7 11 19 20 21 OH H H OH 研究方法:测定蛋白质的aa序列。Edman法一次只能测定60-70个aa残基的肽段 单条肽链测定如下:1.测定aa组成。酸解、碱解,可避免多肽链的aa丢失。(测分子量确定aa个数 氨基酸残基的平均分子量为120)2.测N、C末端aa 。DNFB法等,确定肽链的数目,(羧肽酶A释放除P

20、ro、Arg和Lys的所有C末端残基,羧肽酶B只水解Arg和Lys为C末端残基的肽键,二者合用)3.用两种以上的方法将蛋白质断裂为不同的肽段。如用不同的酶水解。4.分离各肽段,并测出它们的序列。Edman法5.根据各肽段的重叠部分推出蛋白质的全部aa排序。也可DNA测序后反推。 关键是小肽段aa顺序的测定:Edman反应(降解法)与外肽酶酶解法。如:某十肽,用胰凝乳蛋白酶酶解得4个小肽:A1:AlaPhe;A2:GlyLysAsnTyr; A3:ArgTyr;A4:HisVal 胰蛋白酶酶解得3个小肽:B1:AlaPheGlyLys; B2:AsnTyrArgB3:TyrHisVal.根据重叠

21、结构拼接为: AlaPheGlyLysAsnTyrArgTyrHisVal(可直接Edman法)如果含两条以上的肽链先拆分成单链,若含二硫键需先拆开:过甲酸氧化形成二个半胱氨磺酸(或用-巯基乙醇还原后用碘乙酸保护-形成羧甲基衍生物):HCOOOH-CH2-S-S-CH2- -CH2-SO3H + -CH2-SO3H 含SO3H,分析时即知SS的位置(可先水解成只含一个或少量SS的小肽段,以便确定SS的准确连接位置)。二硫键位置的确定(另取一份样品) + + - 熏蒸 一般用蛋白酶水解带有二硫键的蛋白质,从部分水解产物中分离出含二硫键的肽段,再拆开二硫键,将两个肽段分别测序,再与整个多肽链比较,

22、即可确定二硫键的位置。常用胃蛋白酶,因其专一性低,生成的肽段小,容易分离和鉴定,而且可在酸性条件下作用(pH2),此时二硫键稳定。肽段的分离可用对角线电泳,将混合物点到滤纸的中央,在pH6.5进行第一次电泳,然后用过甲酸蒸汽断裂二硫键,使含二硫键的肽段变成一对含半胱氨磺酸的肽段。将滤纸旋转90度后在相同条件下进行第二次电泳,多数肽段迁移率不变,处于对角线上,而含半胱氨磺酸的肽段因负电荷增加而偏离对角线。用茚三酮显色,分离,测序,与多肽链比较,即可确定二硫键位置。 提取 DNA测序后反推蛋白:蛋白质抗体 蛋白mRNA 反转录 cDNA测序反推(见后一章)。 第三节 蛋白质的结构多肽链可分为四级结

23、构。一、蛋白质的一级结构:其aa种类、(共价)连接方式与排列顺序,应包括二硫键。二、蛋白质的空间结构多肽链按一定方式盘绕折叠,形成立体(空间)结构(各基团的作用力之故)。也称蛋白质的构象(或高级结构):指蛋白质分子中所有原子在空间的排列与肽链的走向,以一级结构为基础。肽键与肽键平面,双键性质(不能自由旋转且比一般C-N键短,比C=N键长) O O O CCCNCCNC C=N O与H成反式 H H C H 亚氨基肽键中的4个原子CONH(羧基与另一aa的氨基构成)和与之相连的两个C原子都处于同一平面上。这个平面叫肽键平面,有部分单键的性质,只有C,C键可以旋转。多肽的主链由许多肽键平面构成,平

24、面可以C为顶点绕NC和CC键旋转,但受侧链基团的影响,只有少数的特定结构。所以肽链折叠有一定的限制,分为二、过渡、三、四级结构。1. Pr的二级结构:指多肽链本身的折叠与盘绕方式,驱使蛋白质折叠的主要动力来自各侧链基团与其与介质的相互作用(H键维持系统的能量平衡)。主要有螺旋结构、折叠、转角、无规则卷曲四种。1)螺旋结构:毛、发、羽毛中的角蛋白中的主要形式,多肽链盘绕成右手或左手螺旋(是由肽键平面绕C相继旋转一定的角度形成的)。典型的右手N 3.6aa残基为一圈,高0.54nm 0.54/3.6=0.15nm,3600/3.6=1000侧链R基伸向螺旋外侧相邻螺旋圈 C=O与亚氨基( NH)氢

25、间形成链内H键,每个残基的C=O 都与它后面的第四个 aa残基(隔三隔aa残基)形成H 键,氢键平行中心轴。 O H O H CNH C C N nS 3.613 (33)+4=13 3 Rs:形成氢键封闭(合)环内共价连接的原子数,几乎全为右手螺旋(也有极少数左手螺旋)。但整条肽链并非全是,如有Pro存在时,即中断(无H可形成H键)。带同电荷的aa出现在邻近位置上就会影响螺旋的形成,甘氨酸也不易形成螺旋。2) 折叠结构: O=C C N C纵向排列形成片层 N-HN N N N C N平行(角蛋白) 反平行(丝心蛋白) 折叠片层也可在同一肽链的不同部分之间形成。凸起:折叠的一股弯曲使一个氨基

26、酸残基突出出来不形成氢键。 3)转角 出现在180回折角处,此处Gly、Pro多(侧链小才可形成),也叫发夹结构、回折、弯曲。 O H O H CNH C C N nS 310 (32)+4=10 2 4)自由回转(无规则卷曲):无规则的松散结构。一种蛋白质中往往含几种二级结构2. 超二级结构与结构域:相邻的二级结构的组合体(构象单元)在空间上能与其它部分分开,、(靠近)、(连接链连接平行的片层)、曲折(转角连接)、回形拓扑结构 曲折 左手超螺旋 希腊钥匙构象超二级结构无特定功能(只有一定的组合规则,在空间上能辨认)。结构域:是球蛋白的折叠单位,超二级结构进一步盘曲折叠成球状的,在空间上独立(

27、相对)的、具有部分(一定)功能的结构,较小的蛋白可能只有一个结构域,这时结构域等于三级结构,超二级结构与结构域在结构上很难区别(后者比前者更复杂)。结构域的类型:圆桶、螺旋束结构域(后二者)等转角相连3 78 62541 丙酮酸激酶 溶菌酶 肌红蛋白三级结构(单域) 由两个以上结构域组合成三级结构(可以是完整功能的蛋白质)。 每个结构域都有其功能,三级结构是指多肽链的所有原子在空间的排列与分布,如肌红蛋白的三级结构一条多肽链,非极性侧链埋于分子内部,极性基团分布在分子表面与水结合,所以具水溶性。有几个结构域常常就有几个功能区,结构与功能的统一。两条以上肽链才有四级结构:分子量大的蛋白多由几条多

28、肽链组成,它们以非共价键结合成一个功能单位,执行一个特定功能,其中一条肽链就称为该蛋白的一个亚基(Subunit)如血红蛋白由2、2亚基组成。 1 2以共价键连接的肽链不能称为亚基,如胰岛素A、B链以两个SS键相连。四级结构:就是指亚基之间的连接与空间排列,不包括亚基内部得空间结构,亚基单独存在无活性或活性很低,只有聚合成四级结构,才能有完整的生物活性。如血红蛋白只有2、2(141、146aa)=574个aa一起才能组成完整的功能单位。胶原蛋白:左手螺旋的多肽链缠绕成三股右手超螺旋的原胶原蛋白分子。胶原蛋白。 三、蛋白质分子中的共价键与次级键(非共价键)一级结构由共价键维持:肽键(酰胺键),二

29、硫键;空间结构由次级键(非共价键)维持:氢、盐键(离子键)、疏水键、范德华引力(包括H键)。二级结构主要是H键,三级结构主要是疏水力,盐键、范氏力也都起着重要作用(维持特定构象)。四、蛋白质分子结构与功能的关系 一级结构:结构决定功能,相同的功能有相同或相似的结构1. 不同动物的胰岛素大同小异(差异在A链:8、9、10、30位aa残基)。变化的aa不起决定(功能)作用;细胞色素C(呼吸链的重要组分)在动物间亲缘关系越近,差异越小,人与黑猩猩的差异小于人与鸡的差异。细胞色素C的结构中与之功能密切相关的部位在各种动物中都是不变的(104个aa组成)。2. 关键部位结构上的一点变化,就会引起功能的显著变化。如:镰刀型贫血病。只是血红蛋白(2:141aa,2:146aa)的链的第六位Glu Val代替就使患者红细胞在缺氧时成镰刀状,易胀破、溶血,引起头晕、胸闷等贫血症状,都证明Pr结构与功能的统一性。 构象与功能的关系构象:即空间结构。指取代基团,因为单键旋转所形成的不同立体结构。别构现象:构象改变功能也随之改变的现象。血红蛋白与O2的亲和力是很弱的,但其一个亚基与O2结合后引起的构象改变,亚基间次级键破坏,使其它亚基与O2结合力变大,结合速度变

展开阅读全文
相关资源
相关搜索

当前位置:首页 > 期刊短文 > 信息管理

本站为文档C TO C交易模式,本站只提供存储空间、用户上传的文档直接被用户下载,本站只是中间服务平台,本站所有文档下载所得的收益归上传人(含作者)所有。本站仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容本身不做任何修改或编辑。若文档所含内容侵犯了您的版权或隐私,请立即通知淘文阁网,我们立即给予删除!客服QQ:136780468 微信:18945177775 电话:18904686070

工信部备案号:黑ICP备15003705号© 2020-2023 www.taowenge.com 淘文阁