《医学专题一BCA法测定蛋白质浓度的方法.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《医学专题一BCA法测定蛋白质浓度的方法.docx（2页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、1. 根据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B50:1配制适量BCA工作液，充分混匀。BCA工作液室温24小时内稳定。2. 完全溶解蛋白标准品，取10微升稀释至100微升 ，使终浓度为0.5mg/ml。蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见，也可以用0.9%NaCl或PBS稀释标准品。3. 将标准品按0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20微升加到96孔板的标准品孔中，加标准品稀释液补足到20微升。4. 加适当体积样品到96孔板的样品空中，加标准品稀释液到20微升。5. 各孔参加200微升BCA工作液，37放置30分钟。注：也可以在室温放置2
2、小时，或60放置30分钟。BCA法测定蛋白浓度时，吸光度会随着时间的延长不断加深。并且显色反响会因温度升高而加快。如果浓度较低，适合在较高温度孵育，或延长孵育时间。6. 测定A562，540-595nm之间的波长也可接受。根据标准曲线计算出蛋白浓度。混匀的问题，可以在参数中选择快速震荡，30s就可以了做的好的话可以到达4个九事先配好各个浓度的bsa标准品，step 1A液和B液按 50：1混合，比方你要测2个样品，可以是6个标准曲线点 0，0.05，0.1，0.2，0.5，1mg/ml，加上2个样品，也就是8个孔，做平行就是16孔，那么取A液取16*0.2=3.2ml，B液取64ul 混合就ok了step2 每孔加200ul混合液，然后标准曲线孔参加25ul标准品 ，样品稀释到适宜的比例，也参加25ul如果图省事的话，比方也可以加1ul样品，再加24ul水补齐，加样的时候可能不会太准step3 37度孵育30minstep4 测 od 565，附近也行内容总结11. 根据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B50:1配制适量BCA工作液，充分混匀2注：也可以在室温放置2小时，或60放置30分钟3如果浓度较低，适合在较高温度孵育，或延长孵育时间4根据标准曲线计算出蛋白浓度