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1、SDS-PAGE电泳所用溶液：30 %聚丙烯酰胺溶液 (100 mL)丙烯酰胺 (Arc) 29 gN,N-亚甲双丙烯酰胺 (Bis) 1 g用双蒸水定容至100mL，过滤备用，4存放丙稀酰胺29.2g，N-N-甲叉双丙稀酰胺0.8g，加入去离子水定容至100mL，pH值不能超过7.0，过滤于棕色玻璃瓶中4贮存。5Tris-甘氨酸缓冲液 (1 L)Tris碱 15.1 g甘氨酸(电泳级) 94 g10 %SDS 50 mL使用时稀释5倍使用2SDS凝胶加样缓冲液(10mL)0.5 mol/L Tris-Cl (pH 6.8) 2 mL10(W/V)SDS 4 mL甘油 2 mL-巯基乙醇 1.
2、0 mL(DTT（二硫苏糖醇） 0.31g)溴酚兰 0.02g双蒸水 0.5 mL室温存放备用考马斯亮蓝染色液考马斯亮蓝R-250 （G-250） 1.0 g甲醇 450 mL冰醋酸 100 mLddH2O 450 mL0.2g考马斯亮蓝R250+84mL 95乙醇+20mL冰醋酸，定容至200mL，过滤备用考马斯亮蓝脱色液（甲醇脱色液效果好，但有毒性）甲醇 100 mL冰醋酸 100 mLddH2O 800 mL医用酒精：冰醋酸：水=4.5：0.5：5(V：V：V)SDS-PAGE所需溶液:A液30丙稀酰胺（W/V）：丙稀酰胺29.2g，N-N-甲叉双丙稀酰胺0.8g，加入去离子水定容至10
3、0mL，pH值不能超过7.0，过滤于棕色玻璃瓶中4贮存。B液1.5mol/L TrisHCl，pH8.8：18.17g（9.09g）Tirs碱，溶于80mL（40mL）去离子水中，加入约3mL(1.5mL)以上的浓盐酸调节pH值至8.8，定容至100mL（50mL）。C液1.5mol/L TrisHCl，pH6.8：12.1g（6.05g）Tirs碱，溶于80mL（40mL）去离子水中，加入约7mL(3.5mL)以上的浓盐酸调节pH值至6.8，定容至100mL（50mL）。D液10SDS：10g (2g)SDS溶于去离子水中，定容至100mL(20mL)，加热至68助溶。E液10过硫酸铵：5g
4、(0.5g)过硫酸铵，溶于50mL(5mL)去离子水中；现配现用或分装至0.5mL离心管中冷冻备用。F液TEMED(N-N-N-N四甲基乙二胺)原液，室温保存。表1.配制Tris-甘氨酸SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离胶所用溶液成分配制不同体积与浓度凝胶所需各成分的体积/mL51010 %胶水1.94.05.97.99.911.915.919.830 %丙烯酰胺混合液1.73.35.06.78.310.013.316.71.5 mol/L Tris(pH8.8)1.32.53.85.06.37.510.012.510 % SDS0.050.10.150.20.250.30.40.510 % 过硫酸
5、铵0.050.10.150.20.250.30.40.5TEMED0.0020.0040.0060.0080.010.0120.0160.0212 %胶水1.63.34.96.68.29.913.216.530 %丙烯酰胺混合液2.04.06.08.010.012.016.020.01.5 mol/L Tris(pH8.8)1.32.53.85.06.37.510.012.510 % SDS0.050.10.150.20.250.30.40.510 % 过硫酸铵0.050.10.150.20.250.30.40.5TEMED0.0020.0040.0060.0080.010.0120.0160
6、.02表2. 配制Tris-甘氨酸SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳浓缩胶所用溶液成分配制不同体积与浓度凝胶所需各成分的体积/ml123456810水0.681.42.12.73.44.15.56.830 %丙烯酰胺混合液0.170.330.50.670.831.01.31.71.5 mol/L Tris(pH6.8)0.130.250.380.500.630.751.01.2510 % SDS0.010.020.030.040.050.060.080.110 % 过硫酸铵0.010.020.030.040.050.060.080.1TEMED0.0010.0020.0030.0040.0050.0060.0080.01第 3 页