威尼德分子杂交仪:聚丙烯酰胺凝胶电泳操作小技巧.docx

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1、威尼德分子杂交仪:聚丙烯酰胺凝胶电泳操作小技巧威尼德生物科技(北京),研发生产的经济型分子杂交 仪 VH-1000、多功能型分子杂交仪 VH-4000、组合型分子杂交仪 VH-2000,底部标配培养皿圆周运动托盘,选配250ML/500ML锥形 瓶托盘,96孔酶标板托盘,可适用于如放置杂交袋等其他严格要求 的孵育实验,以及膜洗脱和凝胶脱色,同时可以做恒温微生物培养。 分子杂交仪是现代实验室采用杂交技术的理想设备,可替代塑料杂交 袋和水浴摇床,并防止破损带来的污染危害。1、让凝胶电泳变得更快,更漂亮方法改进:将电泳电压进行定时变化,例如可以在开始时将电泳电 压调节至100V,大约15min,使条

2、带确实可以因为自身片段大小不同 而产生较大差异的泳动速度,从而将片段别离,然而现在的别离或许 会间距较小,从而图片很不漂亮,或者不易观察,可以紧接着进行 120V-BOV的电压进行较小差 异电泳,但是由于电泳电压较大,可以 防止过大的片段残存在胶孔不易泳动的情况.结果:这样两个电压进 行配合电泳,便可以得到非常漂亮的电泳条带,并且可以节省1/5-2/5 左右的时间.2、RNA电泳如何得出漂亮的条带方法改进:1 ,电泳槽,制胶器,梳子等的清洗:去污剂浸泡过夜 自来水冲洗干净ddH20冲洗3%H2O2灌满浸泡过 夜灭活的0.1%DEPC水冲洗干净超净台内紫外线照射 过夜.2.烧瓶,烧杯,药匙,量筒

3、等制胶器械的清洗:0.1%DEPC水浸泡过 夜后高压消毒灭活,烘箱烘干.或者ddH20清洗干净,超净台内紫外 线照射过夜.3.电泳缓冲液必须是RNase free(最好买试剂公司的,这 里推荐生兴的,应为我师兄在生兴做,做点小广告).4.预电泳 5-10min减少了非特异RNA条带的出现,有利于别离和纯化,同时可 根据电泳仪是否冒泡判断电泳仪装置是否有误.5.样品是在电泳缓 冲液液略低于胶外表而不是在高过胶面时加进齿槽,防止了加样时 RNA的扩散,加样后RNA从齿槽逸出造成RNA的弥散及定位不 良等现象.6.电泳3-5min让RNA进入凝胶后再加电泳缓冲液液高 过外表,确保了加到每个槽中的RN

4、A量及定位的准确性,从而有利于 DNA的鉴定和纯化.威尼德生物科技(北京),研发生产的经济型分子杂交 仪 VH-1000、多功能型分子杂交仪 VH-4000、组合型分子杂交仪 VH-2000,底部标配培养皿圆周运动托盘,选配250ML/500ML锥形 瓶托盘,96孔酶标板托盘,可适用于如放置杂交袋等其他严格要求 的孵育实验,以及膜洗脱和凝胶脱色,同时可以做恒温微生物培养。 分子杂交仪是现代实验室采用杂交技术的理想设备,可替代塑料杂交 袋和水浴摇床,并防止破损带来的污染危害。3、如何提高SDS-PAGE的分辨率方法改进:借鉴Tricine-SDS-PAGE中添加甘油或者尿素来提高 分辨率的成功经

5、验,在普通的SDS-PAGE中加入约13%的廿油,同样 可以提高分辨率,有效防止小分子量蛋白的弥散.只要把原来 配方中 的水换成60%的甘油,就可以了.结果:加入甘油之后,条带较细,分得 更开.4、改进一点点,我们能得到更加美观的SDS-PAGE胶威尼德生物科技(北京),研发生产的经济型分子杂交 仪 VH-1000、多功能型分子杂交仪 VH-4000、组合型分子杂交仪 VH-2000,底部标配培养皿圆周运动托盘,选配250ML/500ML锥形 瓶托盘,96孔酶标板托盘,可适用于如放置杂交袋等其他严格要求 的孵育实验,以及膜洗脱和凝胶脱色,同时可以做恒温微生物培养。 分子杂交仪是现代实验室采用杂

6、交技术的理想设备,可替代塑料杂交 袋和水浴摇床,并防止破损带来的污染危害。方法改进:所做的改进很简单却很有效,加完别离胶后,用移液枪 吸取酒精(浓度没有特别要求,干净无污染就好)加到别离胶上至覆盖 界面,静置片刻后放到37c恒温箱中可加速胶的凝固.待到别离胶完 全凝固之后倒去上层的酒精,就可以看到齐平漂亮的界面啦!改进二: 脱色背景:给染色结束的SDS-PAGE胶脱色往往需要比拟长的时间, 否那么会由于脱色不完全而导致条带不清晰,影响到拍照的效果.方法 改进:改进的方法很简单易行取一张我们常常随身携带的面巾纸, 打个结放入盛有脱色液的大培养皿里放到脱色摇床上,这样一来,原 来过夜脱色到达的效果现在只需要短短的3,4个小时就可以轻松 实现了.PS:希望大家这个时候用的面巾纸是质量比拟好不容易掉屑 的

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