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1、-临床细菌学检验的质量控制流程-第 9 页临床细菌学检验的质量控制流程1、质量的概念和质量保证 影响检验结果质量的因素很多,实验过程中,仪器、试剂和操作等均会引起试验结果的误差,衡量检验结果的质量常用准确度和精确度,或特异性和灵敏度。具体采用哪一种指标应根据实验的性质决定,目前临床细菌学检验的工作内容大致有3类,衡量起质量的技术指标不完全相同。 第一类是检出细菌的实验,包括标本直接涂片检查和细菌分离培养。现代的细菌感染,混合菌较常见,一份标本中,会有2种以上细菌存在。无论标本直接涂片还是分离培养,检验结果必须如实反映感染病灶中细菌的真实情况。这类实验的质量,应该用细菌检出率或细菌分离率来衡量。
2、 第二类是鉴定细菌的实验。通过一系列生理生化及形态学、血清学的手段来鉴定病原菌。对分离到的病原菌都做出准确的鉴定,是反映细菌事工作质量的一个重要方面。 第三类是药敏实验。有稀释法和纸片法,前者是半定量的实验,可以用准确度和精密度来衡量,后者以敏感或耐药的形式报告,属于定性的实验,但实验过程中测量抑菌环是定量的指标。也应以准确度和精确度衡量。 所以实验室人员必须清楚认识到以上这一点,在实验室的设计和管理方面就应该主动设置误差检测系统,实验中一旦出现误差及时发出警报,查明原因及时纠正。2、 室内质量控制2.1.1须受过细菌学检验的专门基础教育以及相关的生物交全防护知识,并以细菌检验为专业,及时终结
3、并积累工作经验。2.1.2作人员必须具有严谨的工作态度,技术操作须完全遵守操作规程,并直接参与质量控制工作。2.1.3工作人员应不断加强自身的业务学习,及时了解本领域的新进展,将所掌握的新知识应用到实际工作中。2.1.4实验室管理人员应注意利用一切机会培养技术人员,积极参加国际、国内学术会议、专业培训班,获取新信息。因为细菌学检验,投资人员培训远比投资与仪器设备更重要。2.2操作手册及参考书2.2.1细菌室可以根据自己的实际情况制订一本指导日常工作、简明扼要的操作手册,并在工作中不断完善和修改。细菌室应准备一些细菌学参考书,解决某些少见的菌种的分离鉴定,判断细菌的致病性及向临床医生解释结果时用
4、。3、设备质量控制3.1温箱、冰箱每日工作开始,在打开温箱或冰箱等控温设备前,以及下午下班前须观察当时设备的温度并记录。3.2高压灭菌器须定期检查灭菌器的灭菌效果,至少每月1次。测试方法可用留点温度计或嗜热芽孢菌等,并定期维修。3.3生物安全柜新安装必须由生产厂家提供安装检测报告,以后每年必须检测一次,若须更换滤网,须由专门技术人员进行,并提供检测报告。工作时检测气流、紫外灯正常与否,可用营养琼脂检测空气中细菌的沉降数,紫外线必须有使用记录,每3个月检查一次性能3.4接种环要求长5-8cm,环直径约3mm;接种针长5-8cm。3.5显微镜应做好常规的清洁和保养。所有的技术人员必须对显微镜的对光
5、、应用和清洁正确步骤掌握。3.6细菌鉴定仪应及时更新系统操作软件。定期清浩仪器的探测部位,并用标准模板进行校正，必要时按照菌株对每批号的鉴定卡、条、板进行一次测定,并核对每个反应和药敏试验的结果。 每批培养基应有配制记录,并对不同性能的培养基要用以知特性的、稳定的标准菌株进行测定并记录,符合要求方可应用。培养基的一般质量控制 项目检测标准检测频率(1)外观液体培养基 固体培养基含指示剂的培养基各种培养基都应有名称、标记和制备日期颜色、透明度、失水情况无菌落、不干裂无菌、颜色符合要求 每周 (2)平板深度一般培养基3mm MH为4-6mm每批(3)双糖斜面底层与斜面之间至少有1cm的直立段,长度
6、不得过2/3试管,不可干裂每批（4） 无菌试验经病压灭菌后的培养基无菌分装的试管或平板选择性培养基随机取10个,放35度孵箱24h无菌每批(5) 硬度试验固体培养基半固体培养基划线接种应无碎裂穿刺接种后能区分有动力或无每批 监控常规培养基及试剂的菌种培养基 阳性(或生长）阴性(或不生长)监测频率第一套:A(每月一次)赖氨酸脱酶鸟氮酸脱羧酶精氨酸双水解酶 靛基质v - p橼酸盐(西蒙氏)苯丙氨酸脱氨酶葡萄糖O-F氧化发酵不活动硝酸盐还原氧化酶触酶胆汁一七叶酸丙二酸盐尿素动力迟缓爱德华菌产气肠杆菌阴沟肠杆菌大肠埃希氏菌 阴沟肠杆菌产气肠杆菌雷氏变形杆菌 铜绿假单胞菌 大肠埃希氏菌洛非氏不动杆菌铜绿
7、假单胞菌铜绿假单胞菌ATCC27853金黄色葡萄球菌粪链球菌产气肠杆菌雷极氏变形杆菌(快)肺炎克雷伯氏菌(慢）大肠埃希氏菌 弗氏构橼酸菌弗氏构橡酸菌普通变形杆菌阴沟肠杆菌大肠埃希氏菌迟缓爱德华菌弗氏枸橼酸菌洛菲氏不动杆菌大肠埃希氏菌ATCC25922化脓性链球菌化脓性链球菌迟缓爱德华菌大肠埃希氏菌肺炎克雷伯氏菌每批第二套:B(每批一次)巧克力球脂(HN) 羊血琼脂平板麦康凯双糖铁培养基营养琼脂流感血杆菌化脓性链球菌(小菌落)肺炎链球菌(中等菌落)大肠埃希氏菌(粉红菌落)奇异变形杆菌(无色菌落)金黄色葡萄球菌每批5.试剂、染色液的质量控制试剂的质量控制试剂阳性控制菌种 阴性控制菌监测频率氧化酶铜
8、绿假单胞菌ATCC 2 7 8 5 3 金黄葡萄球菌 大肠埃希氏面ATCC 2 5 9 2 2每次凝固酶表皮葡萄球菌每次杆菌肽纸片A群链球菌 B群链球菌每次Optochin纸片肺炎链球菌草绿色链球菌每次染色液的质量控制染色液阳性控制菌种阴性控制菌监测频率革兰氏染色液金黄色葡萄球菌 ATCC 2 5 9 2 3大肠埃希氏菌ATCC 2 5 9 2 2每天萋纳抗酸染液TB阳性的痰液不作每次鞭毛染色液普通变形杆菌福氏志贺氏每次6、药敏试验的质量控制 琼脂扩散法为药敏试验直接测定抑菌环直径。参考菌株分别选择金黄色葡萄球菌ATCC25923、大肠埃希氏菌ATCC25922和铜绿假单胞菌ATCC27853
9、。由于有很多因素均能影响药敏试验扩散法的结果,因此对以下每一可变因素均应按要求加以控制:6.1培养基的成分、PH及深度:成分为水解烙蛋白琼脂:PH为7.；深度为4mm，一只9cm直径的平板约需25ml培养基。6.2抗生素纸片含量及有效期:库存的抗生素纸片储存在20度,小量使用抗生素纸片密封后存放于冰箱的冰格内。使用时取出,放置室温平衡后再开启。6.3菌落浓度:挑取分纯的菌落5-10个移种于合适的液体培养基,35度46h后,校正菌液浓度与标准0.5麦氏比浊管相同为止。6.4将菌液均匀的涂好,每只9cm平极至多贴7张纸片,测试平板最多两只叠在一起,不得过多,量取抑菌环用毫米尺。6.5参考菌种的抑菌
10、环质量控制标准是:药物对该菌株的排菌环直径平均值+2标准差:简明的说:将这个指标换算成抑菌环直径质量控制允许范围。实验室连续30次监测的结果允许最多3次超过质量控制范围,并且这3次失控不应该连续出现。如超出围,成查明误差原因并予以纠正。6.6质控菌株:大肠埃希氏菌ATCC25922、大肠埃希氏菌ATCC35218(用于内酰胺酶抑制剂复合制剂);金黄色葡萄球菌ATCC25923铜绿假单胞菌ATCC27853等。6.7质控测定次数:每批新的M-H琼脂和含药纸片必须用质控菌株进行检测。每大与临床标本一起测定质控菌株以监控整个过程, NCCLS规定只有在符合以下条件时才可减少测定次数： 与常规标本一起连续测定质控菌株30日。 每种药物与相应的每种细菌的30个抑菌环直径(3个结果超出规定范围）。 达到以上要求以后,可执行每周一次检测。如发现有一个不符合的结果,应立即寻找原因,如果发现诸如质控菌错误、含药纸片种类错误或标准菌种被污染等明显的错误,加以纠正后重新测定:如果不能发现原因,则须立即该为每日检测,直至问题解决。纸片扩散法常见结果失控的错误原因:质控结果记录错误；量读数错误;标准菌株被污染或其他改变；接种的菌悬液浓度不当；麦氏浊度标准管未摇匀或已过期失效;卿育温度或气体环境不正确；MH培养基质量问题；含药纸片失效。