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1、生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定一、教学目标记住鉴定所用材料，学会选材，明白选材的依据。 理解：通过预习，初步理解实验的目的、原理和方法步骤，进一步归纳出生物组织中可溶性还原糖、脂肪和蛋白质的鉴定原理。能力目标1.学会制备生物组织试样。 2.能正确选取鉴定试剂，并能进行规范操作。 3.明确观察对象，能正确说出鉴定过程中试样的颜色变化，并能用准确的语言解释实验现象，得出结论，填写实验报告册。 4.能熟练使用低倍镜、制作徒手切片、临时装片，学会规范使用高倍镜。情感目标 二、教学重点 掌握鉴定生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的基本方法。 教师可事先配制好已知待测样品，如葡萄液、植物油滴
2、、鸡蛋蛋白稀释液。让学生按要求加入相应试剂，观察颜色变化，从而让学生自己归纳出本实验的简单原理。三、实验目的：尝试用化学试剂检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质，阐明实验原理颜色反应，识记和区分用于可溶性还原糖、脂肪、蛋白质鉴定的试剂及产生的特定颜色，初步掌握鉴定上述化合物的基本方法，学会描述实验现象，掌握NaOH溶液和CuSO4溶液的使用方法。四、实验原理：可溶性还原糖如葡萄糖、果糖及斐林试剂发生作用可以生成砖红色沉淀。斐林试剂实际是Cu2+的碱性溶液能使具有自由醛基或酮基的糖氧化Cu2+则被还原成砖红色的Cu2O沉淀。反应式为 CH2OHCHOH4CHO+2Cu(OH)2CH2OHCHOH4C
3、OOH+Cu2O+2H2O 脂肪可以被苏丹染液染成橘黄色。苏丹在脂肪中的溶解度比在酒精中的溶解度大当用苏丹的酒精溶液处理含有脂肪的生物组织时酒精中的苏丹进入脂肪中将脂肪染成橘黄色。 蛋白质及双缩脲试剂发生作用可以产生紫色反应。具有两个或两个以上肽键的化合物皆可及双缩脲试剂产生紫色反应。蛋白质的肽键在碱性溶液中能及Cu2+络合成紫红色的化合物。颜色深浅及蛋白质浓度成正比。 五、实验材料 1.做可溶性还原糖的鉴定实验应选择含糖量高颜色为白色或近于白色的植物组织以苹果、梨为最好使实验效果明显2.做脂肪的鉴定实验应该选择富含脂肪含量高的种子以花生种子为最好实验前需浸泡34 h3.做蛋白质的鉴定实验可用
4、浸泡12 d的黄豆种子或用豆浆或用蛋清必须稀释10倍后再使用。4.实验试剂 由质量浓度为0.1 g/mL的NaOH溶液和质量浓度为0.05 g/mL的CuSO4溶液刚配制而成的斐林试剂苏丹或苏丹溶液双缩脲试剂 六、实验步骤1、还原糖的检测 取样液2mL于试管中加入刚配的斐林试剂1mL（斐林试剂甲液和乙液等量混合均匀后再加入）水浴加热2min左右观察颜色变化（白色浅蓝色砖红色）2、脂肪的检测 制作切片（切片越薄越好）将最薄的花生切片放在载玻片中央 染色（滴苏丹染液23滴切片上23min后吸去染液滴体积分数50%的酒精洗去浮色吸去多余的酒精） 制作装片（滴12滴清水于材料切片上盖上盖玻片） 镜检鉴
5、定（显微镜对光低倍镜观察高倍镜观察染成橘黄色的脂肪颗粒） 3、蛋白质的检测 （1）试剂：双缩脲试剂（A液：0.1g/mL的NaOH溶液，B液：0.01g/mL的CuSO4溶液） （2）步骤：试管中加样液2mL加双缩脲试剂A液1mL，摇匀加双缩尿试剂B液4滴，摇匀观察颜色变化(紫色)4、注意事项及常见问题：（1）常见还原性糖及非还原性糖有哪些？ 葡萄糖、果糖、麦芽糖都是还原性糖；淀粉、蔗糖、纤维素都是非还原性糖。 （2 )还原性糖植物组织取材条件？ 含糖量较高、颜色为白色或近于白色，如：苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜等。 （3)研磨中为何要加石英砂？不加石英砂对实验有何影响？ 加石英砂是为了使研磨
6、更充分。不加石英砂会使组织样液中还原性糖减少，使鉴定时溶液颜色变化不明显。 （4）斐林试剂甲、乙两液的使用方法？混合的目的？为何要现混现用？ 混合后使用；产生氢氧化铜；氢氧化铜不稳定。 （5）还原性糖中加入斐林试剂后，溶液颜色变化的顺序为？ 浅蓝色 棕色 砖红色 （6）花生种子切片为何要薄？ 只有很薄的切片，才能透光，而用于显微镜的观察。 （7）转动细准焦螺旋时，若花生切片的细胞总有一部分清晰，另一部分模糊，其原因一般是什么？ 切片的厚薄不均匀。 （8）脂肪鉴定中乙醇作用？ 洗去浮色。 （9）双缩脲试剂A、B两液是否混合后用？先加A液的目的怎样通过对比看颜色变化？ 不能混合；先加A液的目的是使溶液呈碱性；先留出一些大豆组织样液做对比。五、 实验总结 1.还原糖的鉴定当中，最初实验现象不太理想（颜色为棕红色而非砖红色），后增加了苹果汁的计量后颜色明显说明最初实验材料苹果汁中还原糖浓度不足。 2.在蛋白质的鉴定实验中，当实验材料为豆浆时，实验结果很不明显，反而是将豆浆稀释后，结果才明显变紫。当实验材料为蛋清时，实验结果的显色反应相当迅速，立即变紫。估计为浓度过大时蛋白溶液将颜色包裹覆盖。