酵母葡聚糖扩大使用范围.docx

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1、补正资料第4部分 公开征求意见用内容酵母-葡聚糖安琪酵母股份有限公司目 录1. 通用名称、功能分类、用量和使用范围2. 证明技术上确有必要和使用效果资料或者文件2.1 酵母-葡聚糖功能类别及作用机理2.2 在拟添加食品中添加和否效果对比2.3和同一功能类别食品添加剂使用效果对比资料3. 质量规格要求、生产使用工艺和检验方法，食品中该添加剂检验方法或者相关情况说明3.1质量规格要求3.2生产使用工艺和检验方法3.3食品中该添加剂检验方法或者相关情况说明1. 通用名称、功能分类、用量和使用范围通用名称、功能分类、用量和使用范围1、通用名称 酵母-葡聚糖2、功能分类 食品添加剂营养强化剂3、拟扩大使

2、用范围申请将酵母-葡聚糖使用范围扩大到13.01婴幼儿配方食品、13.02婴幼儿辅助食品、13.03特殊医学用途配方食品（13.01 中涉及品种除外）食品类别。4、在上述使用范围使用量，相应使用范围及使用量详见表1：表1 酵母-葡聚糖申报扩大使用范围食品分类号食品类别（名称）使用量（g/kg）13.01婴儿配方食品0.210.6713.02婴幼儿辅助食品0.210.6713.03特殊医学用途配方食品（13.01 中涉及品种除外）0.210.672、证明技术上确有必要和使用效果资料或者文件证明技术上确有必要和使用效果资料或者文件2.1 酵母-葡聚糖功能类别及作用机理功能类别：营养强化剂-葡聚糖为

3、D-葡萄糖单体借由糖苷键连接形成多糖，主要化学结构为-1,3 葡聚糖和-1,6葡聚糖，其中前者具有抗肿瘤活性，可极大提高人体自然免疫力，此外，其作为益生元还可调节肠道菌群结构等。-葡聚糖广泛存在于各种真菌和植物中，主要来源于新鲜食物如啤酒酵母、燕麦、食用菌等。其中，酵母-葡聚糖是存在于酵母细胞壁中一种具有增强免疫力活性多糖，由酵母细胞经自溶、酶解、纯化后精制而成，分子量约为1000KD，主要以-1,3-D-葡聚糖为主链，该结构有别于一般糖类线形分子结构，为一种独特三重超微螺旋结构。这种特殊超微螺旋型分子结构为免疫活性最强且最易被人体吸收结构形式，故而在动物实验中表现出非特异性免疫增强作用。研究

4、表明，-葡聚糖具有免疫调节、抗肿瘤、抗感染等多种生物活性和功能1。-葡聚糖作为非特异性免疫调节剂，主要是通过影响内皮系统功能来实现免疫调节。大量药理试验结果证明，葡聚糖不仅能激活 T、B淋巴细胞、巨嗜细胞(MT)、自然杀伤细胞(NK)、细胞毒细胞(CTL)、淋巴因子激活杀伤细胞(LAK)、树突状细胞(DC) 等免疫细胞，还能促进细胞因子生成，激活补体系统，促进抗体产生，对免疫系统发挥多方面调节作用。近年来从分子水平研究结果表明，多糖通过和巨噬细胞和嗜中性粒细胞、淋巴细胞表面多糖受体相结合，影响细胞信息传递过程，从而影响这类细胞基因表达和淋巴细胞功能，调节机体免疫功能，淋巴细胞多种功能均和细胞内

5、cAMP和cGMP含量及其比值变化有关。研究结果显示，-葡聚糖具有调节细胞内cAMP和cGMP水平功能。另外，-葡聚糖对免疫细胞 NO 生成具有明显促进作用，并和干扰素具有协同促进作用，多糖可影响淋巴细胞前列腺素分泌，调节免疫功能。 酵母-葡聚糖生物活性2 酵母-葡聚糖特殊结构等，使得其具有降低胆固醇和血脂、增加机体免疫力等生理活性。大量研究证明，酵母-葡聚糖免疫调节机制是其能和动物及人类免疫细胞（包括单细胞、巨噬细胞、中性粒细胞和自然杀伤细胞）发生特异性结合，通过刺激动物体内淋巴细胞、活化动物体内巨噬细胞而产生对机体免疫活性。因此，酵母-葡聚糖具有多方面免疫功能。1. 抗癌、抗肿瘤目前研究抗

6、癌功能主要目标就是加强人体组织中巨噬细胞活性，葡聚糖正具有此种功能。Cheung NK等用免疫缺陷性异种移植肿瘤模型研究-(13)-葡聚糖，并检测了其抗肿瘤效应和理化特性之间关系，研究发现，口服-葡聚糖大大增加抗肿瘤单克隆抗体(mAb)在小鼠体内建立抗肿瘤作用。2. 抗氧化、抗辐射-葡聚糖能够有效地清除体内自由基，保护巨噬细胞在遭受辐射期间和辐射后都能免受自由基攻击，使这些巨噬细胞继续正常发挥作用。细胞培养实验表明，羧甲基-葡聚糖能够抑制紫外线照射下抗氧化分子消耗，促进角质素增长，从而保护皮肤细胞。Pathchen ML等研究表明，水溶性葡聚糖能够增强由钴-60诱导辐射后快速痊愈。用-葡聚糖治

7、疗经辐射小鼠，可以增强小鼠恢复能力，并能够提高骨髓活力，使白细胞数量增加，同时增强脾细胞数。3. 促进伤口愈合由于巨噬细胞活性在外科和伤口愈合上起到重要作用，-葡聚糖因此具有能够参和机体自然防御和加速皮肤创伤愈合功能。Waisun等研究发现，20100mg/ml酵母葡聚糖搽抹动物腿部受伤处，能明显加速其伤口愈合，应用0.10.2mg/kg体重可溶性葡聚糖，可降低腹胸外科手术后感染率。4. 降低胆固醇和血脂-葡聚糖特殊结构能促进脂蛋白、脂肪酸释放，使血液中大分子脂质分解成小分子，因而对血脂过多引起血清浑浊有澄清作用，能明显降低血胆固醇。Nicolosi等对15个肥胖高胆固醇男性进行了研究，在研究

8、中病人保持着相同身体重量，在第7周能够明显降低血液中总胆固醇含量8，在第7周基础上第8周又降低了6，可见酵母葡聚糖能够显著降低血浆中胆固醇含量。作用机理：-1,3-D-葡聚糖免疫调节作用机制3 1. 通过多糖受体发挥作用大量研究表明，-1,3-D-葡聚糖是通过结合到单核细胞、巨噬细胞、嗜中性细胞和 NK 细胞表面葡聚糖受体发挥作用。Yan 等从受体水平揭开了-1,3-D-葡聚糖作用于补体3型受体介导抗肿瘤效应，他认为：许多免疫细胞如巨噬细胞、 NK 细胞、中性粒细胞上存在补体3(CR3) 受体，该受体含有2个功能域，一个和补体3裂解片段(iC3b)结合，称为iC3b结合位点；另一个结构域和-葡

9、聚糖结合，称作凝集素(lectin) 位点。巨噬细胞、NK细胞、中性粒细胞通过补体 3(CR3) 受体结合位点，可以结合iC3b调理肿瘤细胞，但此时并不能杀伤肿瘤细胞，只有CR3凝集素结合位点和-葡聚糖结合后，使上述免疫细胞处于预激活化状态，通过iC3b为纽带，使效应细胞和靶细胞结合在一起，才能杀伤肿瘤细胞。-葡聚糖介导细胞毒素作用可被抗CR3抗体所抑制。Engstad 等认为 -葡聚糖作用机制是通过调节一些细胞如巨噬细胞上细胞受体而发挥作用。而且Joegensen等认为哺乳动物巨噬细胞和单核细胞具有特异性-葡聚糖受体，在-葡聚糖存在情况下，能够产生一些如白三烯、细胞因子和前列腺素等免疫调节物

10、质。研究表明，1,3-D-葡聚糖特异性受体，存在于单核细胞和巨噬细胞表面，随着葡聚糖配体结合到单核细胞表面受体上后，可导致 NF-kB激活，IL-6mRNA表达以及葡聚糖内化。近几年研究也表明，多糖也可以通过作用于Toll样受体 (TLRs) 介导免疫效应，酵母-多糖可通过TLR2激活转录因子NF-kB，进而启动TNF-a基因转录，促进TNF-a 产生。最新研究也表明，酵母-葡聚糖也可通过结合于单核/巨噬细胞、中性粒细胞、树突状细胞上树突状细胞相关C型凝集素- 1 (dectin-1)受体介导免疫反应，如介导于巨噬细胞，产生TNF-a。2. 通过调节相关基因表达量发挥作用多糖促进细胞因子分泌，

11、原因在于促进细胞因子基因表达。在免疫应答反应中，有几种基因表达牵涉其中，如 iNOS 基因，常在转录水平上被NF-kB所调节。Young 等研究了酵母多糖促进巨噬细胞TNF合成分子机制，发现酵母多糖可显著提高NF-kB 活性，进而提高TNF基因启动子活性和TNF表达。3. 通过影响免疫细胞信号传导发挥作用（1）对 NO 产量影响NO 是机体内一种主要具有广泛生物活性细胞信号分子，它可参和神经、 免疫等调节作用，从而如影响 T 淋巴细胞增殖、T 淋巴细胞和巨噬细胞细胞因子分泌、增强巨噬细胞杀灭微生物和肿瘤细胞能力等。免疫调节剂可刺激巨噬细胞表面 iNOS 表达，诱导巨噬细胞产生大量 NO，抑制病

12、原微生物生长。Ohno 等研究表明-1,3-D-葡聚糖可促进巨噬细胞 NO 释放。Luvone等应用溶解在0.01%DMSO中-1,3-D-葡聚糖溶液,刺激单核巨噬细胞 J 774 , 单独可显著提高 NO产量,且NO产量和水溶性-1,3-D-葡聚糖刺激量呈现剂量浓度效应，Western bloting 检测结果也表明 iNOS 蛋白表达产量随-1,3- D -葡聚糖添加量提高而增加。（2）对钙离子传导影响细胞内钙离子是一种重要第二信使分子，细胞内Ca2+激活蛋白激酶C(PKC) , 和 DAG 有协同作用，共同促进其他信息传递蛋白及效应蛋白活化，对细胞免疫功能起主要作用，如调节淋巴细胞分裂增

13、殖、促进 T 淋巴细胞IL-2释放、 介导巨噬细胞吞噬作用等。陈宏亮等研究了香菇多糖可以升高脾细胞内Ca2+浓度、促进脾淋巴细胞产生NO。（3）对cAMP、cGMP影响cAMP、cGMP是细胞内重要第二信使分子，cGMP作用和cAMP相反，细胞增殖时细胞内cAMP浓度升高，细胞增殖停止时，cGMP浓度升高。研究表明葡聚糖可调节淋巴细胞内cAMP、cGMP浓度，对机体免疫功能起调节作用。（4）对前列腺素分泌影响前列腺素对免疫细胞活化和抗体合成具有抑制作用。 Cleary 等报道 -1,3-D-葡聚糖可促进体外培养小鼠腹腔巨噬细胞前列腺素E2和IL-1分泌。 Falch等研究表明酵母多糖通过和肺巨

14、噬细胞表面葡聚糖受体结合促进其前列腺素分泌。Castro等研究认为-1,3-葡聚糖可影响花生四烯酸代谢。（5）其他信号途径-葡聚糖可诱导巨噬细胞内PKA活性，可通过激活肌醇磷脂激酶、蛋白激酶C、Src家族酪氨酸激酶、p38丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)等信号途径，促进中性粒细胞吞噬和趋化作用。2.2 在拟添加食品中添加和否效果对比（一）婴儿配方食品奶粉添加一定量酵母-葡聚糖后，检测奶粉中酵母-葡聚糖含量，如下表：表3-1调制乳粉中添加酵母-葡聚糖前后使用效果对比表批次无添加奶粉含酵母-葡聚糖奶粉-1含酵母-葡聚糖奶粉-2含酵母-葡聚糖奶粉-3酵母-葡聚糖含量mg/100g050.1249.99

15、50.11和无添加奶粉相比，添加酵母-葡聚糖奶粉含量达到50mg/100g，酵母-葡聚糖通过激活体内巨噬细胞活性，从而达到增强人体免疫系统活性功能，可增强婴幼儿免疫力。（二）婴幼儿辅助食品米粉添加一定量酵母-葡聚糖后，检测米粉中酵母-葡聚糖含量，如下表：表3-2米粉中添加酵母-葡聚糖前后使用效果对比表批次无添加米粉含酵母-葡聚糖米粉-1含酵母-葡聚糖米粉-2含酵母-葡聚糖米粉-3酵母-葡聚糖含量mg/100g050.0550.1250.07和无添加奶粉相比，添加酵母-葡聚糖奶粉含量达到50mg/100g，酵母-葡聚糖通过激活体内巨噬细胞活性，从而达到增强人体免疫系统活性功能，可增强婴幼儿免疫力

16、。（三）特殊医学用途配方食品婴儿配方奶添加一定量酵母-葡聚糖后，检测婴儿配方奶中酵母-葡聚糖含量，如下表：表3-3婴儿配方奶中添加酵母-葡聚糖前后使用效果对比表批次无添加婴儿配方奶含酵母-葡聚糖婴儿配方奶-1含酵母-葡聚糖婴儿配方奶-2含酵母-葡聚糖婴儿配方奶-3酵母-葡聚糖含量mg/100g021.0521.1221.07和无添加特殊医学用途婴儿配方奶相比，添加酵母-葡聚糖奶粉含量达到21mg/100g，酵母-葡聚糖通过激活体内巨噬细胞活性，从而达到增强人体免疫系统活性功能，早产/低出生体重儿配方食品中添加酵母-葡聚糖可增强婴幼儿免疫力。2.3 和同一功能类别食品添加剂使用效果对比资料国家卫

17、生和计划生育委员会：我司欲申报食品添加剂酵母-葡聚糖，因该食品添加剂于2010年中华人民共和国卫生部（2010年第9号）公告规定为新食品原料，于2012年中华人民共和国卫生部（2012年第6号）公告规定为食品添加剂新品种，暂无同一功能类别食品添加剂，故无法提供和同一功能类别食品添加剂使用效果对比资料，特此说明。 安琪酵母股份有限公司 2015年11月3.质量规格要求、生产使用工艺和检验方法，食品中该添加剂检验方法或者相关情况说明质量规格要求、生产使用工艺和检验方法食品中该添加剂检验方法或者相关情况说明3.1质量规格要求3.2生产使用工艺和检验方法3.3食品中该添加剂检验方法或者相关情况说明3.

18、1 质量规格要求酵母葡聚糖符合QB/T 4572-2013 中华人民共和国轻工行业标准 酵母葡聚糖质量规格要求。3.2 生产使用工艺和检验方法（一）、生产工艺1、生产工艺简图酿酒酵母酶 解12小时 离 心离心液浓 缩干 燥酵母抽提物碱提取3小时固形物加水分离两次离心NaOH 1%调节pH值4.5离 心加水加水1复合蛋白酶和1水解蛋白酶喷雾干燥包装酵母葡聚糖离心固形物2、工艺说明2.1 将酵母溶于水中，浓度达到20%，升温到50，pH值调到4.5，保温30分钟。2.2. 加入1诺维信复合蛋白酶（PROTAMEX）和1诺维信水解蛋白酶（ALCALASE 2.4L），进行酶解12小时。2.3 用高速

19、离心机离心。2.4 离心固型物加水稀释到浓度为5%乳液，加入NaOH使其浓度达到4%，在90保温3小时。2.5 加水用高速离心机分离两次。2.6 加入1%盐酸调节pH值至4.5，再加水离心洗涤两次。2.7 离心固型物加水稀释到浓度为20%乳液，采用喷雾干燥方法进行干燥，得到酵母葡聚糖粉末。干燥进风温度为160，出风温度为80-90，塔内负压-300Pa。2.8 经按企业标准检验合格后入库。3.3 食品中该添加剂检验方法或者相关情况说明（一）、检验方法（二）、食品中该添加剂(营养强化剂)检验说明（三）、安琪酵母葡聚糖检测报告（一）、检验方法按照企标附录A中A.1方法测定。（二）、食品中该添加剂(

20、营养强化剂)检验说明食品中该添加剂(营养强化剂)检验说明附后。酵母葡聚糖检测说明我国目前还没有酵母葡聚糖检测方法国家标准，主要是因为酵母葡聚糖不溶性，常用检测方法有：苯酚-硫酸法、酶法、荧光法等方法。其原理基本都是先将酵母葡聚糖进行水解，然后测定水解后葡萄糖，再换算为酵母葡聚糖含量。我司酵母葡聚糖含量检测方法是依据中华人民共和国轻工行业标准QB/T4572-2013(酵母葡聚糖)中规定方法进行检测。原理是用盐酸水解，然后用高效液相色谱法测定水解产生D-葡萄糖，再换算为酵母葡聚糖含量。安琪酵母股份有限公司 2015年11月（三）、安琪酵母葡聚糖检测报告检测报告附后。 国 家 教 育 部 STAT

21、E EDUCATION MINISTRY 江南大学分析测试中心 Analysis & Testing Center Jiangnan University 检 测 报 告 ANALYZING AND TESTING REPORT报 告 编 号：LC090720SERIES NUMBER 样 品 名 称：安琪酵母-葡聚糖SAMPLE NAME 委 托 单 位：安琪酵母股份有限公司CLIENT UNIT委托单位地址：湖北省宜昌市城东大道168#CLIENT UNIT ADDRESS检 测 类 别：委托检测DETECTING TYPE 检测机构（盖章）：江南大学分析测试中心 ANALYZING AN

22、D TESTING UNIT 报告发送日期：2009年9月28日 REPORTING DATE 第1页 共4页 地址：无锡市蠡湖大道1800号. 邮编（P.C.）：214122. 电话(Tel)：1Add.：1800 Lihu Road，Wuxi,P.R.China 传真(Fax)：1E-mail Add.： 江南大学分析测试中心检测报告ANALYZING AND TESTING REPORT本报告共4页，附 9页（其中：图：9页，表：/ 页）（Total Pages for This Report） 样品名称（Sample Name）：安琪酵母-葡聚糖样品编序号（Sample No.）LC0

23、90720Y1 LC090720Y3样品类别（Sample Type） 生物制品样品数量（Sample Number）3样品外观 (Sample Appearance) 淡黄色粉末报告编号（Report No.）LC090720文件存档名称（） LC090720检测项目及要求（Analysis Item）基本成分分析,1,3糖苷键比例,单糖组成,分子量分布,红外光谱及核磁共振（1H,13C）分析检测依据（Method or Reference Cited）GB/T5009.35-2003,JY/T024-1996,GB/T 6040-2002，JY/T 007-1996检测结果（Result

24、of Analysis）： 基本成分分析结果（，w/w）原样品号1#2#3#葡聚糖76.382.777.7脂类10.802.409.28蛋白3.162.802.97水分4.214.713.85灰分1.293.461.261,3-糖苷键比例：根据13C NMR图谱(见附件4)中被取代C3(86.17ppm)和C6(69.89ppm)两信号强度比值，可计得1#、2#、3#三个葡聚糖样品中1,3-糖苷键和1,6-糖苷键相对量比值为5.4:1、3.6:1、5.5:1，或1,3-糖苷键所占两种糖苷键相对百分比依次为84.4%、78.1%、84.6%。单糖组成分析结果（mol %）：原样品号ManGlcN

25、Glc1#1.52.596.02#1.51.597.03#1.52.096.5 (HPLC图谱见附件1)注：1#为安琪70%含量酵母-葡聚糖，2#为安琪90%含量酵母-葡聚糖，3#为美国70%含量酵母-葡聚糖（以下同）。授权签字人（Authorized Signatory）： 日期（Date）：2009年9月28日（机构盖章）第2页 共4页 说明：1本报告任何涂改增删无效，复印件未加盖本单位印章无效； 2本报告只对来样负责；3若对本报告有异议，请于报告发出之日起15日内向本中心提出，逾期不予受理；4本报告附页加盖骑缝章方有效；5未经本中心同意，任何单位或个人不得用本报告及本中心名义作广告宣传。

26、江南大学分析测试中心检测报告ANALYZING AND TESTING REPORT本报告共4页，附 9 页（其中：图：9页，表 / 页）（Total Pages for This Report） 样品名称（Sample Name）：安琪酵母-葡聚糖样品编序号（Sample No.）LC090720Y1 LC090720Y3样品类别（Sample Type） 生物制品样品数量（Sample Number）3样品外观 (Sample Appearance) 淡黄色粉末报告编号（Report No.）LC090720文件存档名称（）LC090720检测项目及要求（Analysis Item）基本成

27、分分析,1,3糖苷键比例,单糖组成,分子量分布,红外光谱及核磁共振（1H,13C）分析检测依据（Method or Reference Cited）GB/T5009.35-2003, JY/T 024-1996，GB/T 6040-2002，JY/T 007-1996检测结果（Result of Analysis）：相对分子量分布 (图谱见附件2) ：原样品号相对分子量范围(Mw, Dalton)峰面积百分比(%)重均分子量(Mw, Dalton)总重均分子量(Mw, Dalton)1#1279381353088427.2227745388376715308843926445.64241098

28、39264376720.532001937676356.6119992#10764652161808013.76341734880340516080805888455.9355328058884331124.102219033116846.2119993#1127421861944828.2827625879190986194483706844.8422789237068340420.861886834046846.031977红外光谱分析结果： 3个样品在3400cm-1附近均有一个较宽、较强吸收峰，是糖类O-H伸缩振动，同时在2900cm-1附近也均有一较弱吸收峰，是糖类C-H伸缩振动。这

29、两组峰是糖类特征吸收，谱图说明3个级分均为多糖。3个样品均在889 cm-1有-构型特征吸收，说明三者均为-葡聚糖。（图见附件3）授权签字人（Authorized Signatory）： 日期（Date）：2009年9月28日（机构盖章）第3页 共4页 说明：1本报告任何涂改增删无效，复印件未加盖本单位印章无效； 2本报告只对来样负责；3若对本报告有异议，请于报告发出之日起15日内向本中心提出，逾期不予受理；4本报告附页加盖骑缝章方有效；5未经本中心同意，任何单位或个人不得用本报告及本中心名义作广告宣传。江南大学分析测试中心检测报告ANALYZING AND TESTING REPORT本报告

30、共4页，附 9 页（其中：图：9页，表 / 页）（Total Pages for This Report） 样品名称（Sample Name）：安琪酵母-葡聚糖样品编序号（Sample No.）LC090720Y1 LC090720Y3样品类别（Sample Type） 生物制品样品数量（Sample Number）3样品外观 (Sample Appearance) 淡黄色粉末报告编号（Report No.）LC090720文件存档名称（）LC090720检测项目及要求（Analysis Item）基本成分分析,1,3糖苷键比例,单糖组成,分子量分布,红外光谱及核磁共振（1H,13C）分析检测

31、依据（Method or Reference Cited）GB/T5009.35-2003, JY/T 024-1996，GB/T 6040-2002，JY/T 007-1996检测结果（Result of Analysis）：核磁共振分析（1H,13C）结果：见附件4注：除基本成分分析结果外，以上均为用体积比4:1正己烷-甲醇混合溶剂脱脂后检测结果.从以上结果得出以下结论：1. 三种样品均以葡聚糖为主要成分，其中葡聚糖含量分别为：76.3%、82.7%、77.7%，此外还含有少量脂类、蛋白、水分和矿物质。2. 三个样品均以Beta-1,3-葡聚糖为主，还含有少量Beta-1,6-葡聚糖和几丁

32、质，三个葡聚糖样品平均分子量分别为837671、803405、919098，其中Beta-1,3-糖苷键和Beta-1,6-糖苷键比例分别为5.4:1、3.6:1、5.5:1，或1,3-糖苷键所占两种糖苷键相对百分比依次为84.4%、78.1%、84.6%。授权签字人（Authorized Signatory）： 日期（Date）：2009年9月28日（机构盖章）第4页 共4页 说明：1本报告任何涂改增删无效，复印件未加盖本单位印章无效； 2本报告只对来样负责；3若对本报告有异议，请于报告发出之日起15日内向本中心提出，逾期不予受理；4本报告附页加盖骑缝章方有效；5未经本中心同意，任何单位或个人不得用本报告及本中心名义作广告宣传。参考文献1. 李万坤, 闫鸿斌, 才学鹏, 郭福存.-葡聚糖免疫增强作用机理研究进展J. 中国畜牧兽医,2007,34(5):151-155.2. 郭永, 王振伟. 酵母-葡聚糖生物活性及开发利用J. 中国食物和营养,2010,9:24-26.3. 王忠, 聂伟, 呙于明, 袁建敏. -1,3-D-葡聚糖免疫调节作用及其机制研究进展J. 动物营养学报,2007,19 (Suppl):481-486.