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1、血球计数板的使用方法血球计数板的使用方法 血球计数板是一种专门用于计算较大单细胞微生物的一种仪器。血球计数板是一种专门用于计算较大单细胞微生物的一种仪器。计数时，常采用样方法。血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特计数时，常采用样方法。血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的制玻片制成的. .玻片中有四条下凹的槽玻片中有四条下凹的槽, ,构成三个平台构成三个平台. .中间的平台较中间的平台较宽宽, ,其中间又被一短横槽隔为两半其中间又被一短横槽隔为两半, ,每半边上面每半边上面, ,刻有一个方格网刻有一个方格网. .方方格网上刻有格网上刻有9 9个大方格个大方格, ,其中只有中间的一个大
2、方格为计数室其中只有中间的一个大方格为计数室, ,供微生供微生物计数用物计数用. .这一大方格的长和宽各为这一大方格的长和宽各为1mm,1mm,深度为深度为0.1mm,0.1mm,其体积为其体积为0.1mm0.1mm3 3。 计数室通常有两种规格计数室通常有两种规格.一种是大方格一种是大方格内分为内分为16中格中格,每一中格又分为每一中格又分为25小格小格;另一另一种是大方格内分为种是大方格内分为25中格中格,每一中格又分为每一中格又分为16小格小格.但是不管计数室是哪一种构造；它但是不管计数室是哪一种构造；它们都有一个共同的特点们都有一个共同的特点,即每一大方格都是即每一大方格都是由由162
3、5=2516=400个小方格组成。个小方格组成。*以计数酵母菌为例以计数酵母菌为例(1)用血球计数板计数酵母菌悬液的酵母菌个数。用血球计数板计数酵母菌悬液的酵母菌个数。(2)样品稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数样品稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数,以每小以每小方格内含有方格内含有4-5个酵母细胞为宜。个酵母细胞为宜。 (3)将血球计数板用擦镜纸擦净将血球计数板用擦镜纸擦净,在中央的计数室上加在中央的计数室上加盖专用的厚玻片盖专用的厚玻片.(4)将稀释后的酵母菌悬液将稀释后的酵母菌悬液,用吸管吸取一滴置于盖玻用吸管吸取一滴置于盖玻片的边缘片的边缘,使菌液缓缓渗入使菌液缓缓渗入,多余的菌液用吸水纸
4、吸取多余的菌液用吸水纸吸取,捎待片刻捎待片刻,使酵母菌全部沉降到血球计数室内使酵母菌全部沉降到血球计数室内.(5)计数时计数时,如果使用如果使用16格格25格规格的计数室格规格的计数室,要按要按对角线位对角线位,取左上取左上,右上右上,左下左下,右下右下4个中格个中格(即即100个个小格小格)的酵母菌数的酵母菌数.如果规格为如果规格为25格格16格的计数板格的计数板,除了取其除了取其4个对角方位外个对角方位外,还需再数中央的一个中格还需再数中央的一个中格(即即80个小方格个小方格)的酵母菌数的酵母菌数. (6)当遇到位于大格线上的酵母菌当遇到位于大格线上的酵母菌,一般只计数大方一般只计数大方格
5、的格的上上方和方和右右方线上的酵母细胞方线上的酵母细胞(或只计数或只计数下下方和方和左左方线上的酵母细胞方线上的酵母细胞).(7)对每个样品计数三次对每个样品计数三次,取其平均值取其平均值,按下列公式计按下列公式计算每算每1ml菌液中所含的酵母菌个数菌液中所含的酵母菌个数. 血球计数板的清洁血球计数板的清洁 血球汁数板使用后血球汁数板使用后,用自来水冲洗用自来水冲洗,切勿用硬物切勿用硬物洗刷洗刷,洗后自行晾干或用吹风机吹干洗后自行晾干或用吹风机吹干,或用或用95%的的乙醇乙醇,无水乙醇无水乙醇,丙酮等有机溶剂脱水使其干燥丙酮等有机溶剂脱水使其干燥.通通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物
6、过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物.若不干净若不干净,则必须则必须重复清洗直到干净为止重复清洗直到干净为止. 例例2:酵母菌的计数通常用血球计数板进行，血球计数板每个大方格容积为0.1mm3 ，由400个小方格组成。现对某一样液进行检测，如果一个小方格内酵母菌过多，难以计数，应先 后再计数。若多次重复计数后，算得每个小方格中平均有5个酵母菌，则10mL该培养液中酵母菌总数有 个。例例1 :在用血球计数板（2mm2mm方格）对某一稀释50倍样品进行计数时，发现在一个计数室内（盖玻片下的培养液厚度为0.1mm）酵母菌平均数为16，据此估算10mL培养液中有酵母菌 个。2x1072108稀释稀释例例3 检测员将1 mL水样稀释10倍后，用抽样检测的方法检测每毫升蓝藻的数量；将盖玻片放在计数室上，用吸管吸取少许培养液使其自行渗入计数室，并用滤纸吸去多余液体。已知每个计数室由2516400个小格组成，容纳液体的总体积为01 mm3。现观察到图中该计数室所示a、b、c、d、e 5个中格80个小格内共有蓝藻n个，则上述水样中约有蓝藻 个mL。 5n105