《最新单核增生李斯特氏菌检测精品课件.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《最新单核增生李斯特氏菌检测精品课件.ppt（44页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、内 容o简介李斯特氏菌属o单核增生李斯特氏菌生物学特性o流行病学o致病性o实验室危害及其预防o检测程序o快速检测方法生物学特性-血清型o根据菌体（O）抗原和鞭毛(H)抗原，将单增李氏菌分成13个血清型，分别是1/2a、1/2b、1/2c、3a、3b、3c、4a、4b、4ab、4c、4d、4e 和“7”。o致病菌株的血清型一般为1/2b、1/2c、3a、3b、3c、4a、1/2a和4b,后两型尤多。 生物学特性-抵抗力o该菌对理化因素抵抗力较强，在土壤、粪便、青储饲料和食品中能长期存活；o对碱和盐抵抗力强，60-70经5-20min可杀死，70%酒精5min、2.5%石炭酸、2.5%氢氧化钠、2
2、.5%福尔马林20min 可杀死此菌；o湿热灭菌（121，至少15min）和干热灭菌（160-170，至少1hr）可杀灭该菌，对紫外线和射线敏感；o该菌对青霉素、氨苄青霉素、四环素（已产生抗性）、氨基糖苷类、氯霉素均敏感。 流行病学o分布：广泛存在于自然界中，土壤、地表水、污水、废水、青储饲料、动植物及其食品中均有该菌存在，所以动物很容易食入该菌，并通过口腔-粪便的途径进行传播o寄主范围：哺乳动物、鸟类、鱼类、甲壳类和昆虫流行病学o据报道，有1-10%的人类肠道中存在单核增生李斯特氏菌，4-8%的水产品、5-10%的奶及其产品、30%以上的肉制品及15%以上的家禽均被该菌污染。o相关食品：鲜奶
3、、巴氏消毒奶、奶酪（尤其是软奶酪）、冰激凌、生的蔬菜、发酵过的生肉制作的香肠、生的和加工过的禽肉、各种生的肉类、生的和烟熏的鱼肉。约有85-90%的病例是由被污染的食品引起的。 致病性及其治疗o该病的临床表现，健康成人个体出现轻微类似流感症状，新生儿、孕妇、免疫缺陷患者表现为呼吸急促、呕吐、出血性皮疹、化脓性结膜炎、发热、抽搐、昏迷、自然流产或死婴、脑膜炎、败血症直至死亡。o由该菌造成的脑膜炎的致死率可高达70%，败血症的死亡率达50%，围产期或新生儿感染的死亡率超过80%，怀孕期妇女的感染，母亲通常能存活下来。o抗生素治疗，用青霉素或氨苄青霉素注射给药，或与氨基糖苷类抗生素一起用药。感染人群
4、o感染剂量未知，但与该菌的毒力和易感人群的年龄、免疫状态有关。o易感者：孕妇/胎儿围产期和新生儿的感染；免疫缺损者； 癌症病人 尤其是白血病的患者；年纪较大的人；没有免疫缺陷的健康的人，食用污染该菌尤其是大量污染该菌的食品后，也有患病的危险。致病机理o单增李氏菌的抗原结构与毒力无关，它的致病性与毒力机理如下： 1、寄生物介导的细胞内增生，使它附着及进入肠细胞与巨噬细胞； 2、抗活化的巨噬细胞，单增李氏菌有细菌性过氧化物歧化酶，使它能抗活化巨噬细胞内的过氧物（为杀菌的毒性游离基团）分解； 3、溶血素，即李氏杆菌素O，可以从培养物上清液中获得，有和两种，为毒力因子。实验室危害o不是一种普遍的与实验
5、室相关的传染病，目前只有少数有报道的案例发生；o直接摄取是最普遍的一种感染方式，除此之外，暴露在该菌高浓度的气溶胶中，也可通过眼睛和破损的皮肤、粘膜进入体内造成感染。注意事项o生物安全2级，操作时应有相应的防污染设施，在进行可能产生气溶胶的操作时，应在生物安全柜内完成；o在直接接触有感染性的材料时，必须穿着实验服，戴手套和护目镜；o怀孕的妇女应避免接触传染物。操作要求o溅洒：使气溶胶沉降，穿着防护服装，用纸巾轻轻覆盖溅洒处，加入1%次氯酸钠溶液，由周边向中心加，在清理之前要留充足的接触时间（30min）；o废弃：在废弃前应先采取净化措施，高压蒸汽灭菌、化学消毒、焚烧等；o储存：在有适当标记的密
6、封容器内储存。 25g样品样品+225ml FB1增菌液增菌液 1mL转种转种10mLFB2增菌液增菌液 VIDAS 快速筛选快速筛选 阴性，阴性，报告结果报告结果 阳性，阳性，继续鉴定继续鉴定 选择性培养基（显色培养基、选择性培养基（显色培养基、OXAOXA、PALCAMPALCAM） 挑选可疑菌落，接种挑选可疑菌落，接种TSA-YE 接种接种TSB-YE蓝蓝色色菌菌落落检检验验典典型型运运动动检检验验过过氧氧化化氢氢酶酶试试验验革革兰兰氏氏染染色色溶溶血血试试验验动动力力试试验验协协同同溶溶血血试试验验血血清清学学试试验验 报告结果报告结果 API鉴定试验或生化试验鉴定试验或生化试验尿素酶
7、水解，硝酸盐还原，尿素酶水解，硝酸盐还原，葡萄糖，甘露醇，麦芽糖，葡萄糖，甘露醇，麦芽糖，鼠李糖，木糖，七叶苷，鼠李糖，木糖，七叶苷，TSI MR-VP检测程序-增菌 目前常用的单核增生李斯特氏菌检测增菌肉汤主要有半量Fraser肉汤、 Fraser肉汤（FB）、UVM（Modified University of Vermont broth，也叫UVM1）、LEB（Listeria enrichment broth）和BLEB（buffered Listeria enrichment broth） 半量Fraser肉汤和Fraser肉汤o具有选择性和区别性。o加入柠檬酸铁铵和七叶灵，起到区别
8、的作用。李斯特氏菌可以水解七叶灵，与培养基中的铁离子反应，使培养基变黑，可直观的从培养液的颜色就可以判断是否有单核李斯特氏菌的生长。UVMoUVM只有选择性没有区别性o加入萘啶酮酸和盐酸吖啶黄，作为选择性因子。虽然其中含有七叶灵，但是没有添加柠檬酸铁铵，不能发生黑色的颜色反应。LEB和BLEBo只有选择性没有区别性oLEB是在TSB-YE的基础上加入盐酸吖啶黄、萘啶酮酸和放线菌酮等选择性因子；加入的丙酮酸钠，有助于受损细胞的恢复；不含七叶灵和柠檬酸铁铵，无颜色反应oBLEB是在LEB基础上加入缓冲体系：磷酸二氢钾和磷酸氢二钠检测程序-分离o分离培养基有：OXA、PALCOM、LPM、MOX等。
9、分离原理主要是基于李斯特氏菌具有D葡萄糖苷酶的活性，能水解培养基中的七叶灵，产生七叶苷，与铁离子产生颜色反应而使菌落为棕褐色，并带有褐色晕圈，而致病性和非致病性李斯特氏菌病都能发生这种反应o还有一些选择性显色培养基，如BCM、ALOA、CHROMagar listeria、RapidL. mono等，其原理主要是检测由毒力基因编码的溶血素，而此种溶血素只存在于单核增生李斯特氏菌和伊氏李斯特氏菌中，因而可以很好的将此两种菌同李斯特属的其他种分开。 OXA平板 /(palcam) OXA平板显色平板检测程序-鉴定o蓝色菌落检验（Henry illumination）o典型运动：相差显微镜，轻微旋转
10、或翻跟头 动力试验：7天，伞形生长o过氧化氢酶试验：阳性o革兰氏染色：阳性短杆菌o溶血试验：穿刺接种血平板o硝酸盐还原试验：5天，阴性o糖发酵试验：葡萄糖、麦芽糖和七叶灵，李斯特菌属反应均为阳性，除格氏李斯特甘露醇阴性，李斯特其他种甘露醇阴性，木糖和鼠李糖最有检测意义动力试验 血平板 血平板 血平板单增李斯特菌无害李斯特菌绵羊李斯特菌马红球菌金葡协同溶血试验检样检样25g(或或25mL)样品样品+LB1增菌液增菌液225mL，均质，均质0.1mL+10mL LB2增菌液增菌液李斯特氏菌显色培养基李斯特氏菌显色培养基PALCAM琼脂琼脂接种木糖、鼠李糖，接种木糖、鼠李糖，361 ，24h；同时于
11、；同时于TSA-YE平板划线纯化，平板划线纯化，30 1 ，24h48h木糖木糖-，鼠李糖，鼠李糖+鉴定鉴定结果报告结果报告30 1 ，24h30 1 ，1824h36 1 ，24h48h25g样品样品+225ml BLEB基础（加入丙酮酸钠）基础（加入丙酮酸钠） 加入萘啶酮酸、盐酸吖锭黄、放线菌酮加入萘啶酮酸、盐酸吖锭黄、放线菌酮 30 4hr划线接种划线接种OXA平板平板30 24hr和和48hr 科玛嘉李氏菌显色培养基科玛嘉李氏菌显色培养基TSA-YE分纯分纯 35 24hr-48hr 35 24hr过氧化氢酶试验、革兰氏染色、溶血试验、糖发过氧化氢酶试验、革兰氏染色、溶血试验、糖发酵试验（木糖、鼠李糖）酵试验（木糖、鼠李糖） API Listeria 35 24-48hr报告结果报告结果 35 18-24hr单核增生李斯特氏菌检测快速方法oVIDASoVITEKoAPI ListeriaoBAXoTECTAAPI ListeriaBAXTECRA UNIQUE PLUS TECRA UNIQUETM44 结束语结束语